侧耳纤维素酶基因的克隆与表达研究

采用能够转化细菌和真菌的双功能质粒pDL1,与部分酶切的糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)基因组DNA片段进行体外重组.再用重组质粒DNA转化玉米黑粉菌(Ustilago maydis)的原生质体,在平皿上筛选抗新霉素的转化子,转化率达800转化子/μg DNA,由此在玉米黑粉菌中建立了糙皮侧耳的基因文库.随机选出25个转化子提取其DNA,以^(32)P标记的neu基因酶切片段作为探针进行打点杂交,全部显示阳性,证明抗性菌落不是来源于敏感细胞的回复突变.利用李氏木霉(Trichoderma reesei)的纤维二糖水解酶(Cellobio_hydrases,简称CBHs)CBH Ⅱ基因末端片段为探针,从阳性克隆菌株中提取DNA进行Southern转移并杂交,结果证明,本研究已成功的克隆了糙皮侧耳纤维二糖水解酶CBH Ⅱ基因.基因的表达检测证明,克隆菌株具有纤维二糖水解酶活力.

侧耳纤维二糖水解酶基因的克隆与表达研究

pDL1是能够转化细菌和真菌的双功能质粒。将pDL1与糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的DNA片段连接,然后转化玉米黑粉菌(Ustilago maydis)的原生质体。通过新霉素选择平皿的筛选,转化率达到800转化子/μgDNA,建立了糙皮侧耳的基因文库。随机取15个转化子进行点渍法(Dotting blotting)检验,结果均呈阳性。此结果表明,抗性克隆不是源于玉米黑粉菌敏感细胞的回复突变。萨慎法(Southern blotting)检验显示,本研究在玉米黑粉菌细胞中克隆糙皮侧耳纤维二糖水解酶基因是成功的。基因表达试验表明,玉米黑粉菌克隆株具有糙皮侧耳纤维二糖水解酶的活性。

埃及食用菌生产及消费情况简介

笔者于2005年夏作为政府食用菌专家赴埃及执行援外任务,在埃及长期从事蘑菇工厂化栽培,有机会接触了解这个文明古国的食用菌行业。现简单介绍埃及食用菌产业情况,供国内同行参阅。1自然气候与地理环境埃及国土面积约为100万平方公里,地跨亚、非两洲,北临地中海,全境95%为沙漠。世界第一长河尼罗河从南到北流贯全境,两岸形成宽约3～16公里的狭长河谷,在首都开罗以北形成2.

真菌纤维二糖水解酶基因的克隆与表达研究

采用能够转化细菌和真菌的双功能质粒ｐＤＬ１，与部分酶切的糙皮侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ）基因组ＤＮＡ片段进行体外重组。再用重组质粒ＤＮＡ转化玉米黑粉菌（Ｕｓｔｉｌａｇｏ，ｍａｙｄｉｓ）的原生质体，在平皿上筛选抗新霉素的转化子，转化率达８００转化子／μｇＤＮＡ，由此在玉米黑粉菌中建立了糙皮侧耳的基因文库。随机选出１５个转化子提取其ＤＮＡ，以３２Ｐ标记的ｎｅｕｒ基因酶切片段作为探针进行打点杂交，全部显示阳性，证明抗性菌落不是来源于敏感细胞的回复突变。以李氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）的纤维二糖水解酶（Ｃｅｌｌｏｂｉｏｈｙｄｒａｓｅｓ，简称ＣＢＨ）ＣＢＨⅡ基因末端片段为探针，从阳性克隆菌株中提取ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移并杂交，结果证明本研究已成功地克隆了糙皮侧耳纤维二糖水解酶ＣＢＨⅡ基因。基因的表达检测证明，克隆菌株具有纤维二糖水解酶活力。