疫苗制品氢氧化铝佐剂质量控制及国家标准建立

目的:建立国内疫苗用氢氧化铝佐剂的质量标准。方法:分别以不同厂家制备工艺获得的氢氧化铝佐剂作为研究对象,参照欧洲药典的铝佐剂质量标准进行氢氧化铝佐剂的检定项目确认、分析方法建立及限度确认,并依据检定结果及产品特性建立国家标准。结果与结论:建立氢氧化铝佐剂的16项质量控制项目,包括外观、溶解性能、鉴别试验、无菌检查等,并确立了国家标准。目前已建立疫苗用氢氧化铝佐剂的质量标准接近国际标准,可实现对铝佐剂严格的质量控制,进一步提高我国铝佐剂疫苗的安全性和有效性。

3种氢氧化铝佐剂的理化性质分析

目的分析3种氢氧化铝佐剂的理化性质。方法通过X-射线衍射（X-ray diffraction,XRD）、透射电镜观察、颗粒大小和吸附能力检测、沉降分析及灭菌前后p H变化检测分析本室配制的氢氧化铝佐剂（佐剂C）与两种商品化的氢氧化铝佐剂（佐剂A和佐剂B）的理化性质。结果 3种氢氧化铝佐剂均为弱晶型勃姆石（poorly-crystalline boehmite,PCB）的晶体形态,颗粒大小主要分布在1～10μm,吸附能力均大于2 mg BSA/mg Al,沉降情况符合《欧洲药典》（7.0版）的要求,灭菌前后p H值变化均小于0.5。结论本室配制的氢氧化铝佐剂与商品化氢氧化铝佐剂多数检测参数值较接近,但吸附能力高于商品化佐剂。本研究为氢氧化铝佐剂质控标准的建立提供了参考。

不同方法配制的DTaP—sIPV中sIPV的免疫原性研究

目的 对采用不同配制方式制备的，含不同剂量Sabin株脊髓灰质炎（脊灰）灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliovirus vaccine，sIPV）的DTaP-sIPV联合疫苗中sIPV的免疫原性进行研究。 方法 按照2种不同方式配制含高、低剂量sIPV的DTaP-sIPV联合疫苗。将70只大鼠按简单随机法分成7组，分别为F1H（DTaP-sIPV高剂量组，配制方式1）、F2H（DTaP-sIPV高剂量组，配制方式2）、sIPV-H（sIPV高剂量组）、F1L（DTaP-sIPV低剂量组，配制方式1）、F2L（DTaP-sIPV低剂量组，配制方式2）、sIPV-L（sIPV低剂量组）、赛诺菲巴斯德五联疫苗潘太欣组。每组10只大鼠，间隔3周双侧后腿肌内注射，0.5 ml/只，共免疫3针。于第0、3、6、9、13、17、21、25周眼眶采血、分离血清，采用微量细胞病变效应抑制法分别测定血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体滴度，并进行多样本均数方差分析。结果 每针免疫后，各组抗各型中和抗体滴度均持续上升，第9周均达到最高水平，第13周开始显著下降，至第25周仍维持在一定水平。3针免疫完成后3周，F2H组的抗Ⅰ型脊灰病毒中和抗体几何平均滴度显著高于潘太欣组（F=0.988，P=0.027）；抗Ⅱ型中和抗体，F2H组显著高于F1H组，sIPV-H组显著高于F1H和潘太欣组（F=2.391，P值均〈0.05）；抗Ⅲ型中和抗体，各组间差异均无统计学意义。3针基础免疫后各时间点F2H组抗各型中和抗体滴度均为最高，但除第9周其抗Ⅱ型中和抗体显著高于F1H组外，其他差异均无统计学意义。结论 DTaP-sIPV联合疫苗免疫大鼠后可以诱导产生抗各型中和抗体，且其滴度和持续时间均优于或等同于潘太欣组。DTaP-sIPV诱导的中和抗体滴度不低于相应剂量的sIPV。虽然配制方式2可能更佳，但2种配制方式间sIPV的免疫原性差异无统计学意义。

疫苗用氢氧化铝佐剂质量标准的初步建立

目的建立疫苗用氢氧化铝佐剂的质量标准。方法参照《欧洲药典》8.0和《中国药典》四部(2015版),选择5个实验室对6个厂家12批氢氧化铝佐剂样品同时进行17个理化项目的检测及分析,建立适合国内氢氧化铝佐剂的质量标准。结果初步建立了疫苗用氢氧化铝佐剂17项质量标准。经5个实验室检测,12批样品外观、溶解性能、鉴别试验、无菌、吸附率、硫酸盐含量、硝酸盐含量、铵盐含量、砷盐含量、铁盐含量、重金属含量、氯化钠含量、氯化物含量及细菌内毒素的结果均符合《欧洲药典》8. 0和《中国药典》四部(2015版)相关质量标准;而p H值、铝含量、沉降率检测结果不同厂家之间差异较大。结论建立了适合国内氢氧化铝佐剂的质量评价体系,为氢氧化铝佐剂的质量标准进入2015版《中国药典》增补版提供了方法细则和标准制定依据。

苏云金芽胞杆菌YBT-1520中SigL及其增强子结合蛋白的结构与功能分析

为揭示SigL及其增强子结合蛋白(EBPs)在苏云金芽胞杆菌(Bt)中的调控功能,在全基因组测序的基础上,采用生物信息学方法,对YBT-1520菌株的SigL及其EBPs的结构和功能进行深入分析.结果表明,YBT-1520基因组中存在1个SigL和6个EBPs,而且EBPs在结构上具有丰富的多样性,包含了EBPs的所有可能的结构域组织类型.SigL所调控的基因涉及11个假定的COG代谢途径,其中包括能量代谢、氨基酸代谢、翻译与细胞周期等.根据EBPs在基因组的位置推测,YBT-1520的EBPs参与γ-氨基丁酸代谢途径、精氨酸代谢途径、支链脂肪酸降解途径、多糖分解代谢等代谢途径的调控.本研究将为揭示Bt杀虫晶体蛋白大量表达的调控机制提供新的思路.

百日咳系列抗原的酶联免疫检测法建立及其在组分百日咳疫苗吸附原液中的应用

目的:建立百日咳毒素、百日咳丝状血凝素、百日咳黏附素3种抗原含量检测方法,用于组分百日咳疫苗吸附原液的检测。方法:制备抗百日咳毒素、抗百日咳丝状血凝素和抗百日咳黏附素3种兔多克隆抗体,利用棋盘滴定法确定检测条件,建立双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行方法学的验证。结果:3种酶联免疫吸附法的线性相关良好(R^(2)>0.98),线性检测范围分别为1.25~20,2.5~40,0.625~10ng·mL^(-1);该方法的检测准确度高(回收率均在95%~115%),精密度良好(CV<10%)。结论:本研究建立了百日咳系列抗原的酶联免疫吸附法,可用于组分百日咳吸附原液解吸附方法及吸附原液稳定性的研究。