毕赤酵母作为基础研究的新兴模式生物研究进展

毕赤酵母Komagataella phaffii已经被广泛应用于生物技术行业,近年来,其作为模式生物的潜力逐渐受到关注。目前,酿酒酵母是最常用酵母模型,毕赤酵母与酿酒酵母在2.5亿年前分化,相比酿酒酵母,毕赤酵母进化速度较慢,更多保留了古代酵母祖先的特征,还具有利用甲醇作为唯一碳源生长的能力,这些特征使其成为研究真核生物分子细胞生物学的有价值模式生物。本文总结了毕赤酵母基础生物学方面的研究成果,包括甲醇同化、过氧化物酶体生成、交配与产孢行为,以及蛋白质分泌、脂质合成和细胞壁形成等过程,旨在全面且系统地综述毕赤酵母作为模式生物的研究进展。

覆施稻壳对大棚黄瓜长势及防控黄瓜疫病的影响

研究覆施不同稻壳量对大棚黄瓜团棵期、盛花期、初果期、盛果期和末果期的长势影响及防控黄瓜疫病的效果。在覆施不同稻壳量后,分别测定黄瓜在每个生长期的土壤温度、棚内相对湿度、株高和茎粗、根系干重和根系活力及黄瓜疫病病情指数等指标。结果表明,与对照相比,覆施25 kg稻壳对大棚黄瓜15 cm处的土壤温度效果最好,且盛果期的温度增幅最快;棚内相对湿度显著下降;黄瓜株高、茎粗、根系干重和根系活力等指标明显提高,黄瓜疫病发生程度显著减轻,以覆施25 kg稻壳处理时黄瓜长势及抗病性最显著,提高了黄瓜产量。该方法成本低、易操作,节时省力,若因地制宜,适量施用,将对保护地黄瓜无公害栽培具有重要作用。

一种融合人口统计属性的协同过滤算法

协同过滤算法基于用户-物品评分矩阵预测目标用户对物品的评分,然而评分稀疏性限制了该技术的发展;另一方面,用户人口统计属性反映用户偏好,能够用来判断用户之间的相似度.基于此,提出一种融合人口统计属性的协同过滤推荐算法.首先对用户基于人口统计属性聚类,进而定义物品的类内流行度,通过在传统相似度计算方法上融合物品类内流行度,体现用户在人口统计属性上的相似度,以此来提高最近邻寻找的准确性.在Movie Lens数据集上的实验结果表明,与传统协同过滤方法比较,本文提出的方法能够有效提高推荐精度.

辣椒疫霉菌诱导辣椒酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病是在世界范围内广泛分布的毁灭性病害之一,对我国辣椒生产造成严重的经济损失。为深入研究辣椒疫霉的致病机制,寻找辣椒疫霉在辣椒体内的互作蛋白,利用SMART同源重组交换技术,在酵母菌株Y187中构建了被辣椒疫霉侵染不同时期辣椒的cDNA文库。文库质量评定结果显示cDNA文库的滴度为1.13×10~6 CFU/m L,文库的库容量为1.7×10~7 CFU,文库的重组率为96%,插入片段平均长度在1Kbp左右。该文库的构建为研究辣椒疫霉的致病机制、辣椒的抗病机制及寻找药物靶标位点奠定基础。

利用酵母双杂交技术筛选卵菌效应因子互作蛋白概述

蛋白质是生命活动的执行者,其通过与 DNA、RNA、蛋白质、脂类以及多糖等物质结合形成复合体以参与信号转导、防卫反应等复杂的生命活动,因此研究蛋白质之间相互作用可为揭示生命现象本质提供依据。酵母双杂交(Yeast two hybrid, Y2H)系统是筛选互作蛋白最常用的方法,它具快速、灵敏、简便、高效、广泛的优点。卵菌是一类危害严重的植物病原菌,可分泌效应因子,直接或间接与寄主体内的蛋白发生作用从而促进病原菌侵染与定植,引起寄主发病或者干扰、抑制寄主的抗病反应,但目前对于病原卵菌效应因子的寄主靶标以及效应因子增加寄主对病原菌的敏感性机制知之甚少,因此,利用酵母双杂交技术筛选植物病原卵菌效应因子互作蛋白,为探明其致病机制显得尤为重要。

辣椒疫霉效应分子RxLR19781与其互作蛋白的酵母互作一对一验证

辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病是毁灭性土传病害,短期内暴发成灾,该病害严重发生常给辣椒生产造成严重损失。植物病原卵菌分泌大量的胞内效应分子,即RxLR效应分子,能干扰寄主植物细胞的正常生理代谢和功能,在病原卵菌侵染寄主及与寄主植物互作过程发挥着重要的作用。酵母双杂交(Yeast two hybrid,Y2H)系统是研究蛋白质相互作用最常用的方法,它既可以在cDNA文库中筛选互作的未知靶标蛋白,同时还可以验证两个目的蛋白之间的互作关系。本研究分别以辣椒疫霉c DNA基因组,辣椒cDNA基因组为模板,克隆了辣椒疫霉效应因子Rx LR19781以及其疑似互作蛋白泛素连接酶E2 10和辣椒脂质转移蛋白EARLI 1,并将它们分别成功构建到PGBKT7和PGADT7载体上。运用酵母共转化技术,将带有AD载体的互作蛋白和带有BD载体的效应因子共同转化到酵母感受态Y2HGold中,对它们是否存在互作关系进行了深入研究。结果表明,两个疑似互作蛋白都与效应因子RxLR19781互作。但由于酵母双杂交存在一定的假阳性,因此该效应分子与互作蛋白的互作有待进一步深入的研究。

毕赤酵母表达系统发展现状及其优化策略

毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前生物工程中最流行和最标准的一种重组蛋白生产工具。毕赤酵母系统产蛋白质的优势主要在于重组蛋白在内质网中的适当折叠和胞外分泌功能。此外,由于毕赤酵母本身几乎不产生分泌蛋白,因此重组蛋白的纯化过程相对于其它系统而言较简便。虽然毕氏酵母表达系统的优势较突出,并适用于生产实践,但由于其目标蛋白产量不高,因此需要对构建好的表达菌株进行一定程度的过程优化。本文综述了毕赤酵母近些年的发展现状和提高其外源蛋白表达量的相关策略及产业化研究进展,并展望了此系统的产业化发展前景,为进一步的研究提供理论依据。

稻壳覆施技术对棚内湿度的调控效果以及番茄长势和晚疫病抗性的影响

为了明确稻壳覆施技术对大棚番茄长势以及抗病性的影响,在大棚番茄缓苗期于行长8 m、行距0.9 m的番茄行间,分别覆盖施用经反应堆处理的稻壳0(未覆施,CK)、10、15和20 kg,研究了不同用量稻壳覆施对棚内相对湿度的调控效果,以及番茄长势和晚疫病发生为害的影响。结果表明:试验用量的稻壳覆施后,番茄生育期棚内相对湿度均较CK显著降低,湿度随着稻壳用量的增加而逐渐降低,其中稻壳用量20 kg处理降湿效果最好,湿度降幅为40%左右;株高、茎粗、叶面积、根系活力、根系干重和光合效率均>CK,其中稻壳用量20 kg处理效果最好;番茄晚疫病病情指数明显降低,病情指数随着稻壳用量的增加而逐渐降低,其中稻壳用量20 kg处理防病效果最好,相对防效为44.9%。在大棚内采用稻壳覆施技术,可有效降低棚内空气相对湿度,增强番茄长势,明显抑制番茄晚疫病的发生与为害。