甜菜碱对三元育肥猪血清中TP、BUN、IgG含量和ChE活性的影响

旨在研究饲粮中不同甜菜碱水平对三元育肥猪血清中TP、BUN、IgG含量和ChE活性的影响。选取60头3月龄左右、体重相近(49kg±4.04kg)的杜大长三元杂交育肥猪,随机分为4组,对照组饲喂基础饲粮(无甜菜碱),试验组分别饲喂在基础饲粮中添加1 000、1 500、2 000mg/kg甜菜碱的试验饲粮。饲喂试验前后前腔静脉采集抗凝血液,分离血清,全自动生化分析仪测定血清中TP、IgG、BUN含量和ChE活性,应用SPSS23.0软件进行统计学处理与分析。结果表明,3个水平甜菜碱对三元育肥猪血清中BUN含量和ChE活性无显著影响(P>0.05);3个水平甜菜碱可显著提高血清TP含量(P<0.05);在1 500mg/kg甜菜碱水平下,饲喂前后TP与IgG含量变化与对照组相比极显著升高(P<0.01);饲粮中甜菜碱添加量为1 500mg/kg时饲喂效果最好,可促进三元育肥猪蛋白质合成代谢、提高其免疫力,是育肥猪饲粮甜菜碱最适添加量。

不同低蛋白日粮下甜菜碱对三元育肥猪脂类代谢的影响

【目的】研究低蛋白日粮中不同蛋白质水平与甜菜碱水平对三元育肥猪脂类代谢的影响.【方法】选取150头3月龄左右、体质量相近(49±4.04)kg的‘杜大长’三元杂交育肥猪,随机分为10组,对照组饲喂基础日粮(15%蛋白质,无甜菜碱),其余组别按照3×3双因素试验设计,设3个蛋白质水平(13%,14%,15%)和3个甜菜碱水平(0.10%,0.15%,0.20%),分别饲喂9种不同的试验日粮.饲喂试验开始前与结束后每组分别随机抽取5头试验猪前腔静脉采集抗凝血样,分离血清,日立全自动生化分析仪测定血清中TG,TC,HDL-C,LDL-C含量,SPSS23.0软件进行统计学处理与分析.【结果】日粮中蛋白质与甜菜碱水平对三元育肥猪血清中TG,TC,HDL-C,LDL-C含量均具有极显著影响(P<0.01);蛋白质与甜菜碱间的交互作用对血清中TG、LDL-C含量具有极显著影响(P<0.01,|r|>0.3);蛋白质与TC、HDL-C间存在极显著的强正相关性(P<0.01,|r|>0.3),甜菜碱与TC,LDL-C间存在极显著的强正相关性(P<0.01,|r|>0.3).【结论】14%蛋白质水平下,TG、LDL-C含量极显著降低(P<0.01),HDL-C含量极显著升高(P<0.01),有利于试验猪健康生长;0.15%甜菜碱水平下,TG,LDL-C含量极显著降低(P<0.01),HDL-C含量极显著升高(P<0.01),为最适添加量;蛋白质与甜菜碱间可能存在干扰效应.

三种型号ABS塑料对制作绵羊支气管动脉铸型标本的影响

探寻适宜于制备支气管动脉铸型标本的丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)铸型剂材料。选用3种不同型号的ABS(PA-749SK、D-120、PA-717CK)对绵羊支气管动脉铸型标本的制作效果进行比较。结果表明,PA-749SK型ABS制备的铸型标本柔韧性和细密度较好;PA-717CK型ABS制备的标本表面光泽度好,但柔韧性和细密度较差;D-120型ABS制备的标本各项性能介于前两者之间。说明受试的3种型号ABS中,PA-749SK型号的ABS更适用于制作绵羊支气管动脉铸型标本,也可以作为其他细小管道的铸型材料被选用。

猪δ冠状病毒与猪流行性腹泻病毒的受体结合区融合表达及免疫原性分析

为了研发出一种可同时预防猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCo V)和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)两种病毒病的有效二联亚单位疫苗,本研究将PDCo V的受体结合域(receptor binding domain,RBD)与PEDV的RBD基因进行串联,构建至真核表达载体p CDNA3.1(+)中,利用哺乳动物细胞Expi CHO^(TM)表达系统表达纯化出PDCo V-RBD-PEDV-RBD(简写为pd RBD-pe RBD)融合蛋白,以3种不同剂量(10、20和30μg)免疫小鼠,利用ELISA和流式细胞术评估该融合蛋白诱导的体液免疫反应和细胞免疫反应,利用病毒微量中和试验测定免疫小鼠血清对PDCo V或PEDV的中和效价。结果表明,3个不同剂量组在加强免疫后均诱发了高水平的Ig G抗体,不同剂量组间抗体水平没有明显差异,说明10μg的免疫剂量即可达到较好免疫效果。流式细胞术检测结果显示,免疫组的CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例显著升高,CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例相对较低,这符合亚单位疫苗主导机体产生体液免疫反应的预期。同时,对血清中细胞因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的含量进行了检测,结果表明该融合蛋白诱导了良好的体液免疫效果,同时还产生了一定的细胞免疫应答。中和试验结果表明,10μg免疫剂量所诱导的抗体即可在体外有效中和PDCo V和PEDV两种病毒,效价分别为1:179.25和1:141.21。上述研究结果表明,pd RBD-pe RBD融合蛋白10μg免疫剂量即可诱导高水平的体液免疫反应,诱导的抗体可同时中和PDCo V和PEDV两种病毒,说明pd RBD-pe RBD融合蛋白有希望成为一种能同时预防PDCo V和PEDV的有效二联亚单位疫苗。

口蹄疫病毒结构蛋白VP1与细胞间黏附分子ICAM-2重组融合蛋白的表达及免疫原性分析

利用PAS(PCR-based accurate synthesis)方法人工合成融合蛋白基因序列VP1-ICAM-2,通过限制性内切酶Bam HⅠ和HindⅢ将合成的基因序列引入转移载体p Fast-Bac1,从而获得重组质粒pFastBac1-VP1-ICAM-2。然后将其转化至DH10Bac感受态细胞后进行蓝白斑筛选,获得阳性重组杆粒rBacmidVP1-ICAM-2。将阳性重组杆粒转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-VP1-ICAM-2。Western-blot检测结果显示,重组蛋白约57 ku,与预期结果相符且能被FMDV A型阳性血清所识别。将亲和层析纯化的融合蛋白接种豚鼠,对其在豚鼠中的免疫原性进行分析;结果,融合蛋白VP1-ICAM-2能诱导豚鼠产生特异性抗口蹄疫病毒的体液免疫应答和细胞免疫应答。上述研究结果为研制新型口蹄疫亚单位疫苗提供了思路。

猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank中已公布的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)N基因序列设计并合成特异的引物和TaqMan探针,构建质粒标准品,以标准品为模板建立了检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了评价。结果显示,以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪库布病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和口蹄疫病毒为模板时均未检测到荧光信号,表明该方法具有良好的特异性;用2.66×10~6、2.66×10~5和2.66×10~4copies/L这3个不同浓度的质粒标准品进重复试验,循环阈值Ct的变异系数均低于2%,表明该方法具有良好的特异性;标准曲线斜率为-3.461,相关系数为R^2=0.998,表明阈值和模板浓度之间具有良好的线性关系。10倍梯度稀释质粒标准品,检测的最低限度为2.66×10~1 copies/L的质粒DNA,表明此方法具有良好的敏感性。利用该方法对194份临床猪粪便样品进行了检测,结果显示PDCoV阳性率为22.1%,明显高于常规RT-PCR的11.9%,表明该方法可应用于PDCoV的临床诊断及定量检测。