产气荚膜梭菌磷脂酶C的重组表达及其脱胶应用

将产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)磷脂酶C(Cp-PLC)基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了重组表达,并对重组Cp-PLC表达条件进行了优化。结果表明:当菌体生长至OD600为1.0时,添加8 g/L乳糖在30℃下诱导32 h,得到的重组Cp-PLC的酶活最大,为398.35 U/mL;重组Cp-PLC用于菜籽毛油脱胶的最佳条件为温度57℃、pH 5.0、加酶量600 U/kg、反应时间1.5 h;在最佳条件下,菜籽毛油的磷含量可降至5.66 mg/kg,能够满足物理精炼的要求。

金黄色葡萄球菌磷脂酶C克隆表达及其脱胶应用

该实验对金黄色葡萄球菌磷脂酶C(phospholipase C,PLC)基因在大肠杆菌(E.coil BL21(DE3))中进行重组表达。通过发酵优化,最终在30℃条件下,利用0.001 mmol/L IPTG诱导表达10 h,重组酶活达到47.4 U/mL。利用该重组PLC对大豆毛油进行脱胶处理,确定了最佳脱胶条件为:50℃、1 200 U/kg油、pH 4.7,反应时间2 h,最终可使大豆毛油中磷含量从266 mg/kg降低至3.5 mg/kg,能够完全满足物理精炼要求。金黄色葡萄球菌磷脂酶C的重组表达及其在大豆毛油的脱胶应用为酶法脱胶技术的开发提供了理论支持。

稻草水解液与乙腈的双水相分配特性

研究了稻草水解液中的糖在乙腈-水双水相体系中的分配行为,首先重点考察了双水相的形成,分析了乙腈与稻草水解浓缩液的体积比和温度等对糖的分配系数影响。乙腈体积分数低于50%时不能形成双水相。当V乙腈:V样品等于2或者3时,在25℃下实验,上层富含乙腈相中有葡萄糖、还原糖以及多糖同时存在,特别是当V乙腈:V样品等于3时,81.56%的葡萄糖提取到乙腈相中。在0℃下实验,上层富含乙腈相中都只检测到多糖。

磷脂酶C对大肠杆菌细胞膜通透性的影响

本文在大肠杆菌(E.coli BL21 DE3)中分别克隆表达了产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)和单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)来源的磷脂酶C(PLC)基因,并系统研究了内源表达的重组PLC对大肠杆菌BL21(DE3)内外膜通透性的影响。结果表明内源表达的产气荚膜梭菌和单核细胞增生性李斯特菌重组PLC对宿主菌内膜通透性影响较大,但对宿主菌外膜通透性的影响相对较弱。此外,本文对两种不同来源重组表达的磷脂酶C蛋白进行了分离纯化,分析了外源添加重组磷脂酶C对大肠杆菌BL21(DE3)细胞膜通透性的影响。结果表明外源PLC对大肠杆菌外膜通透性影响较大,而对内膜通透性影响相对较小。综上所述,产气荚膜梭菌和单核细胞增生性李斯特菌来源的磷脂酶C可以改善大肠杆菌细胞膜的通透性,为进一步提高大肠杆菌工程菌株蛋白异源表达提供新的思路。