晚期骨关节炎患者膝关节滑膜间充质干细胞的体外成骨分化

背景:间充质干细胞是组织工程中常用的种子细胞,而来源于人膝关节滑膜组织的间充质干细胞能否作为骨组织修复与再生中合适的种子细胞还需要进一步验证。目的:观察晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织来源的间充质干细胞体外向成骨细胞定向分化的潜能,对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。方法:无菌条件下从行全膝关节置换的晚期骨关节炎患者膝关节腔内获取滑膜组织,Ⅰ型胶原酶消化分离获得有核细胞。以最适密度接种(200个有核细胞/cm2),挑选单细胞克隆,筛选出滑膜间充质干细胞。基础培养基培养,传至第3代时改换为含地塞米松、β-甘油磷酸钠和抗坏血酸的成骨诱导培养基诱导培养。结果与结论:体外分离培养的滑膜间充质干细胞早期可形成葵花样细胞集落,克隆样生长。传代至第3代,细胞呈成纤维细胞样生长,形态均一。滑膜间充质干细胞成骨诱导后呈典型的"铺路石样"成骨细胞形态,诱导至第7天碱性磷酸酶染色呈强阳性,碱性磷酸酶活性表达也在诱导7 d时达最高峰;诱导21 d茜素红染色可见大量钙结节形成;同时反转录PCR检测到Ⅰ型胶原、Runx2、骨结合蛋白和骨桥蛋白的表达在诱导后增加,21 d时表达最高。从晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织分离获得的滑膜间充质干细胞,在体外可成功诱导分化为成骨细胞,所诱导生成的细胞具有典型的成骨细胞特性。提示滑膜间充质干细胞有望成为骨组织工程理想的种子细胞来源,在骨组织的再生修复中发挥重要作用。

大鼠椎间盘髓核来源间充质干细胞的体外分离及培养鉴定

背景:目前椎间盘髓核组织的细胞组成和特性仍未阐明。目的:旨在建立大鼠椎间盘髓核来源间充质干细胞的体外培养体系,并对其体外多项分化潜能进行鉴定。方法:体外培养SD大鼠盘髓核来源间充质干细胞,取第3代细胞进行三系诱导分化,将成骨、成脂和成软骨分化作为实验组,基础细胞培养作为对照组。结果与结论:低密度培养获得的髓核来源细胞早期可形成葵花样细胞集落,克隆样生长。第3代后,细胞形态趋向均一,呈成纤维细胞样生长。成骨诱导28 d,实验组茜素红染色阳性,且RunX2、osteopontin及osteocalcin表达较对照组显著增高(P<0.05);成脂诱导21 d,实验组油红O染色阳性,C/EBPα及PPARγ2表达较对照组显著增高(P<0.05);成软骨分化诱导21 d,实验组番红O快绿染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性,aggrecan和Col2a1表达较对照组显著增高(P<0.05)。可见成年SD大鼠椎间盘髓核组织中可分离培养出体外呈克隆样生长的细胞群,且有向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞发生定向分化的潜能。

骨关节炎治疗相关基因研究进展

骨关节炎最显著的特征为关节软骨进行性变性与破坏,目前用传统的理疗、药物治疗和外科手术的方法都不能很好地实现关节软骨损伤的修复,更无法阻止关节软骨进行性退变过程。骨关节炎基因疗法是将与之相关的外源性遗传物质(目的基因)通过一定的方式和途径导入软骨、滑膜细胞,改善这些靶细胞的基因缺陷,或使之获得新的生物学行为和功能,从而达到治疗骨关节炎的目的。骨关节炎治疗相关的目的基因可分为抑制炎性细胞因子、MMP表达的目的基因和促进生长因子表达的目的基因两大部分,其中对IL-1Ra基因和IGF-1基因的研究相对较为系统而深入。随着对骨关节炎发病机制认识的不断深入和基因治疗技术的飞速发展,将有越来越多的目的基因应用于骨关节炎软骨退变基因治疗的实验与临床研究。该文就骨关节炎治疗相关目的基因的选择依据、作用机制、当前研究现状与特点作一综述。

PFNA与Gamma-Ⅲ钉治疗不稳定型股骨粗隆间骨折的对比研究

目的探讨股骨近端防旋髓内钉(PFNA)与Gamma-Ⅲ钉治疗不稳定型股骨粗隆间骨折(IFF)的临床疗效。方法2008年5月～2010年5月我院骨科住院IFF患者86例,根据手术方法的不同分为PFNA组42例和Gamma-Ⅲ钉组44例。比较两组的手术操作时间、术中出血量、住院时间和骨折的临床愈合时间。参考Parker髋关节功能标准对髋关节功能结局进行评判,并观察两组的术后并发症。结果所有患者的伤口均一期愈合,未出现伤口严重感染和皮缘坏死。两组的手术操作时间分别为(70.0±16.5)min、(82.5±22.5)min,术中出血量分别为(120±30)mL、(150±40)mL,骨折愈合时间分别为(13.2±2.5)周、(14.5±2.0)周,两者比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两组住院时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组的髋关节功能优良率分别为88.1%和88.6%,两组的术后并发症发生率分别为4.8%(2/42)和6.8%(3/44),两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PFNA与Gamma-Ⅲ钉均可作为治疗老年不稳定型IFF患者的理想方法,PFNA手术操作更简单、手术创伤相对小,更具有优势。

人IL-1受体拮抗蛋白重组逆转录病毒载体的构建、鉴定及在骨关节炎软骨细胞中的表达

目的构建含人IL-1受体拮抗蛋白(IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra)逆转录病毒表达载体(PLXRN-IL-1Ra),体外转染人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞,研究其相关特性。方法利用细菌内同源重组技术快速构建PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒重组质粒,经测序及酶切鉴定正确后转染PT67细胞,包装成为重组PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒,并使用小鼠肾成纤维细胞系NIH/3T3对病毒进行滴度测定。实验分为3组:未转染组(A组)、PLXRN空质粒转染组(B组)、PLXRN-IL-1Ra转染组(C组),病毒感染人OA软骨细胞后,RT-PCR检测细胞内IL-1Ra基因的转录和表达;ELISA法检测细胞培养上清液中人IL-1Ra蛋白表达。结果酶切鉴定及基因测序证实重组逆转录病毒质粒中含有人IL-1Ra cDNA,测定包装的病毒滴度为3×104CFU/mL。原代软骨细胞体外培养呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色见细胞内有紫色异染颗粒。RT-PCR结果显示在C组出现311bp人IL-1Ra mRNA片段,A、B组未见人IL-1Ra mRNA的表达带,GAPDH在各组均有表达。ELISA检测发现C组细胞上清有一定量的人IL-1Ra表达,蛋白浓度为(60.47±15.13)ng/L,A组和B组均无人IL-1Ra表达。结论构建的IL-1Ra逆转录病毒表达载体成功地感染人OA软骨细胞,并在体外获得稳定表达,为将表达人IL-1Ra基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了实验依据。

自体激活富血小板血浆干预兔骨髓间充质干细胞体外成软骨分化的研究

背景:自体富血小板血浆激活后可释放多种生长因子,可以促进骨髓间充质干细胞的增殖与分化。目的:观察自体激活富血小板血浆对体外培养的兔骨髓间充质干细胞向成软骨细胞分化的影响。方法:取兔股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞;取第3代骨髓间充质干细胞,分别应用体积分数10%自体激活富血小板血浆和体积分数10%胎牛血清培养液进行体外培养,观察其向成软骨细胞分化情况。结果与结论:分离培养的兔骨髓间充质干细胞呈长梭形,传代后细胞生长迅速。流式细胞仪检测发现第3代细胞高表达CD29、CD44,而低表达CD45。免疫荧光细胞化学染色显示经自体激活富血小板血浆诱导的骨髓间充质干细胞表达Ⅱ型胶原;实时荧光定量PCR检测发现经自体激活富血小板血浆诱导的骨髓间充质干细胞Ⅱ型胶原α1链基因和聚集蛋白聚糖基因表达明显高于经胎牛血清诱导的骨髓间充质干细胞(P<0.01)。可见自体激活富血小板血浆具有促进兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞方向分化的潜能。

糖尿病患者肌腱病变研究现状

糖尿病患者合并肌腱病变,尤其是跟腱损伤时,常常并发足底溃疡,最终发展成为糖尿病足。目前关于糖尿病患者肌腱病变的研究已从最初简单的大体形态改变、生物力学特性变化等逐步发展到组织病理学和分子生物学水平。

纤维环穿刺法建立兔椎间盘退变模型

目的:拟建立一个有效的可重复的椎间盘退变模型。方法:取健康成年新西兰大白兔40只,体质量2.5～3.0 kg,雌雄不限,随机分为纤维环穿刺组和对照组,每组20只。经腹膜外入路暴露L4/5、L5/6两个椎间隙,采用21号针头从椎间隙侧前方刺入L4/5、L5/6椎间盘的纤维环,深度控制在5 mm。对照组仅分离暴露椎间盘,不做任何处理。术后1、2、4、6、8周每组随机选取4只兔子行MRI、HE染色及Ⅱ型胶原免疫组化观察退变椎间盘的变化。结果:MRI观察发现,纤维环穿刺组术后椎间盘T2信号强度呈持续减弱趋势,椎间隙高度也不断下降。从术后2周开始两组差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色观察发现,随着时间进展,纤维环穿刺组髓核细胞逐渐减少,8周时组髓核组织几乎完全变性,被纤维软骨组织替代。Ⅱ型胶原免疫组化染色示,纤维环穿刺组Ⅱ型胶原表达随时间呈进行性下降,从术后第2周开始两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:纤维环穿刺法可以诱导兔椎间盘缓慢退变,为深入研究椎间盘退变机制及治疗手段提供可靠的动物模型。

慢性腱病模型大鼠肌腱干细胞体外成脂和成肌腱的分化能力

背景:慢性腱病是一种常见的肌腱退行性病变,好发于运动员以及肌腱过度劳损的人群。由于慢性腱病的发病机制尚未阐明,临床上还缺乏有效的治疗手段。目的:体外研究比较慢性腱病大鼠和正常大鼠来源肌腱干细胞成脂、成肌腱分化能力。方法:从慢性腱病大鼠以及正常大鼠髌腱中分离培养原代肌腱干细胞,传代培养至第3代,体外观察细胞形态学变化。将两种来源肌腱干细胞(P3)单层培养至细胞融合,分为2组,成脂诱导组用成脂诱导培养基培养,对照组用基础培养基培养。成脂诱导分化21 d后,将两种来源肌腱干细胞的成脂诱导组和对照组分别行油红O染色定量分析。实时荧光定量PCR检测各组细胞成脂性基因C/EBPα和PPARγ2的m RNA的表达。将两种来源的肌腱干细胞体外单层培养至70%-80%融合时,行实时荧光定量PCR检测慢性腱病来源肌腱干细胞以及正常肌腱干细胞成肌腱相关基因Col1a1,Scx,Tnmd和Dcn的m RNA的表达。结果与结论:肌腱干细胞体外培养至第3代时,正常肌腱来源的肌腱干细胞保持细长纺锤形的典型的干细胞形态,而慢性腱病来源的肌腱干细胞虽然形态发生改变,但仍保持纺锤形形态。肌腱干细胞(P3)体外成脂诱导分化21 d后,慢性腱病来源的肌腱干细胞胞体变大、变圆,可见大量油红O染色阳性的细胞,油红O染色阳性率显著高于正常大鼠(P=0.004)。实时荧光定量PCR结果显示,慢性腱病大鼠来源肌腱干细胞的成脂性基因(C/EBPα和PPARγ2)m RNA的表达均显著高于正常大鼠(P=0.004),肌腱特异性基因Col1a1,Scx,Tnmd以及Dcn m RNA表达量均明显低于正常大鼠(P=0.009)。说明与正常大鼠来源的肌腱干细胞相比,慢性腱病来源的肌腱干细胞体外成肌腱分化的能力减弱,而成脂分化的能力增强,此结果为进一步揭示慢性腱病发病机制提供了细胞生物学依据。

老年髋部骨折手术室快通道的建立与实践

东南大学附属中大医院老年髋部骨折多学科综合诊疗协作组(MDT)定义老年髋部骨折为年龄≥65岁、低能量损伤造成的髋部骨折,包括股骨颈骨折、股骨转子间骨折和股骨转子下骨折。随着全球人口老龄化,老年髋部骨折发病率越来越高,据预计,2050年全球老年髋部骨折病人将达到600万以上,其中亚洲将占50%以上[1⁃2],中国作为人口大国,将面临更严峻的人口老龄化带来的挑战。

老年髋部骨折病人围手术期营养干预策略的研究进展

据学者预测,我国在2015~2100年面临“银色海啸”的冲击,预计2055年我国老年人口将增加至3.84亿[1]。髋部骨折是老年人最常见的骨折之一,手术治疗是髋部骨折主要的治疗手段。老年髋部骨折的预后受多种因素的影响[2],营养状态在其中起着举足轻重的作用[3-4]。但是,众多研究表明,40%~70%髋部骨折病人入院时就存在营养不良风险或者营养不良[5-8]。

新型冠状病毒肺炎疫情下加速康复外科理念在老年髋部骨折急诊快通道中的应用效果

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情下加速康复外科(ERAS)理念在老年髋部骨折急诊快通道中的应用效果。方法对COVID-19疫情期间东南大学附属南京中大医院创伤骨科于2020年3月至2021年3月与2021年4月至9月分别通过急诊常规救治流程(对照组)和依据ERAS理念实施优化的急诊快通道流程(快通道组)收治的老年髋部骨折患者197例的临床资料进行回顾性分析和比较。其中对照组154例,快通道组43例。记录两组患者入院等待时间、48 h完成手术百分比、入院疼痛数字评分(NRS)和止痛方式、血红蛋白(Hb)值、血气分析结果(低氧血症发生率)、住院时间和术后并发症发生情况并进行比较。结果快通道组患者住院等待时间大于对照组,入院Hb值低于对照组,总住院时间小于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001,P=0.008,P=0.001);两组患者术后住院时间和入院NRS疼痛评分差异均无统计学意义(均P>0.05)。与对照组相比,快通道组入院后无进一步镇痛措施患者比例有上升趋势,需静脉用药镇痛患者比例有下降趋势,术前等待时间呈下降趋势,入院48 h内手术率有上升趋势,术后肺炎、泌尿系感染和谵妄等3种并发症发生率呈下降趋势,但差异均无统计学意义。快通道组和对照组患者完善血气分析比例分别为100%和4.55%。老年髋部骨折患者术前低氧血症发生率为51.2%。结论依据ERAS理念对老年髋部骨折患者急诊救治流程进行优化,建立快通道,可以及时发现患者术前存在的问题,降低患者总住院时间,促进患者的康复。

景泰县:项目建设激活县域经济发展

“十一五规划”指出,要以实现科学发展为出发点和落脚点,促进经济社会全面协调可持续发展和人的全面进步。我国幅员辽阔,各地的区位条件、气候因素、资源状况和产业基础等千差万别。因此,发展县域经济应立足当地实际,做好“有所差别”的文章,选准适合自身特点的发展路子,形成自己的特色与优势。

锚钉微创治疗膝关节内侧副韧带损伤的疗效观察

目的探讨小切口锚钉治疗膝关节内侧副韧带（MCL）损伤临床疗效。方法回顾性分析2013年1月至2015年12月18例Ⅲ。膝关节内侧副韧带损伤患者的临床资料，所有患者均采用锚钉固定。结果术后随访6-15个月，患者膝关节功能明显改善，复查DR片显示膝关节间隙对称，锚钉在骨内未出现松动、移位等情况。结论锚钉固定治疗膝关节内侧副韧带损伤能恢复韧带的原有解剖结构，且能提供足够的生物力学支持，具有操作简便、创伤小、固定可靠、并发症少等优点，是治疗膝关节内侧副韧带损伤的一种有效方法。

老年髋部骨折患者术前营养状况的研究进展

随着社会老龄化进展,老年髋部骨折的发生率逐渐增加。老年髋部骨折具有并发症多、花费巨大、致残率高和死亡率高等特点,严重影响老年髋部骨折患者的健康和生活。影响老年髋部骨折患者预后的因素很多,其中营养状况是老年住院患者预后的重要影响因素。作者回顾既往研究所提供的证据,对老年髋部骨折患者的术前营养状况、术前营养不良的主要影响因素及其对老年髋部骨折患者的影响、营养干预对老年髋部骨折患者预后的临床意义等作一综述,为老年骨科临床工作者提供思路和参考。

ERAS理念下踝关节骨折诊疗方案优化的专家共识

踝关节骨折是创伤骨科常见骨折之一。通过引入加速康复外科(enhanced recovery after surgery,ERAS)理念,对围手术期处理措施进行全面优化,可以进一步提高患者诊疗效果。为规范ERAS临床路径在踝关节骨折中的应用,基于前期研究经验,以循证医学证据为依据,经过全国专家组反复讨论,编制该专家共识,供全国创伤骨科医师在临床工作中参考。该共识适用于所有进行择期手术治疗的成人新鲜踝关节骨折患者。共识共包含25条推荐意见,就踝关节骨折患者急诊处理、术前准备、术中处理以及术后恢复进行了全面介绍。

吸烟与骨骼肌肉系统疾病

吸烟对骨骼肌肉系统有着不利的影响,可导致骨量的减少和骨折的延迟愈合,然而其发病机制较为复杂。尼古丁作为烟草中的主要成分,对成骨细胞和破骨细胞有着毒性作用。吸烟可以引起背部疼痛,增加类风湿关节炎的发病率。作者对近年吸烟与骨骼肌肉系统疾病的研究进展作一综述,为临床医生治疗骨骼肌肉系统疾病的吸烟患者提供理论依据。

超声引导下髂筋膜间隙阻滞在老年患者全髋关节置换术中的应用

目的探讨术前行超声引导下髂筋膜间隙阻滞在老年患者全髋关节置换术中的应用效果。方法回顾性分析择期在全身麻醉下行全髋关节置换术的老年患者98例,男40例,女58例,年龄≥65岁,BMI 16~28 kg/m^(2),ASAⅡ或Ⅲ级。根据术前是否行髂筋膜间隙阻滞分为两组:髂筋膜间隙阻滞组(F组,n=43)和对照组(C组,n=55)。根据性别、年龄、BMI、ASA分级、基础疾病、手术方式进行倾向评分匹配。收集手术时间、麻醉时间、术中出血量、术中舒芬太尼和瑞芬太尼用量、术后2、6、12、24、48 h静息和活动时NRS评分、首次下床活动时间、住院时间、术后48 h镇痛满意度评分、术后48 h内患者自控静脉镇痛(PCIA)有效按压次数以及术后48 h内PCIA舒芬太尼用量。记录术后输血、入ICU以及相关不良反应(包括肺部感染、尿路感染、心律失常、术后恶心呕吐、尿潴留、瘙痒、呼吸抑制、嗜睡)的发生情况。结果匹配后F组和C组各纳入患者43例。F组术中舒芬太尼和瑞芬太尼用量明显少于C组(P<0.05)。F组术后2、6 h静息时NRS评分以及术后2、6、12、24、48 h活动时NRS评分明显低于C组(P<0.05)。F组首次下床活动时间、住院时间明显短于C组(P<0.05),F组术后48 h镇痛满意度评分明显高于C组(P<0.05),F组术后48 h内PCIA有效按压次数以及PCIA舒芬太尼用量明显少于C组(P<0.05)。F组术后恶心呕吐及尿潴留的发生率明显低于C组(P<0.05)。两组手术时间、麻醉时间、术中出血量、术后12、24、48 h静息时NRS评分、术后输血、入ICU以及肺部感染、尿路感染、心律失常、术后瘙痒、嗜睡发生率差异均无统计学意义。结论术前行超声引导下髂筋膜间隙阻滞能为老年患者全髋关节置换术后提供良好镇痛,减少镇痛药物的使用,提高镇痛满意度,同时促进患者术后早期恢复。

加速康复外科理念下肱骨髁间骨折诊疗规范专家共识

肱骨髁间骨折是一类常见且复杂的骨折,治疗难度大,并发症多。目前对于此类骨折的治疗获得了较大的进展,但仍存在很多不规范的地方,尤其在围手术期处理方面。在加速康复外科(ERAS)理念的指导下,对围手术期处理流程进行全面优化可以进一步提高治疗效果。因此,经全国创伤骨科专家讨论,以循证医学证据为基础,以ERAS理念为指导,特制定该共识,为医务人员在治疗此类骨折时提供指导。该共识适用于需采用手术治疗的新鲜、闭合肱骨髁间骨折患者。

髂筋膜阻滞在老年髋部骨折围术期镇痛中的应用

随着人口老龄化的加剧,髋部骨折发生率日趋升高。髋部骨折好发于老年病人,且骨折后疼痛程度剧烈、持续时间较长,如不及时手术,会影响病人远期生存率,给病人家庭及社会带来沉重负担。老年病人由于生理储备功能下降、合并症及药物使用情况复杂,其对疼痛的反应有差异且疼痛评估难度较大。因此,为获得令病人满意的手术效果,降低不良事件的发生风险,良好的围术期镇痛至关重要。在高龄髋部骨折病人的镇痛模式中,神经阻滞技术与传统镇痛方案(阿片类、非甾体类药物)相比,能够显著减少恶心呕吐、呼吸抑制、胃肠道出血等相关不良反应,镇痛效果显著。超声引导下髂筋膜阻滞(FICB)作为神经阻滞中的重要组成部分,操作简单,不良反应少,病人满意度较高,为老年髋部骨折病人提供了安全有效的围术期镇痛管理。