带形蜈蚣藻硫酸多糖的提取、分析及其抗病毒活性

目的提取带形蜈蚣藻硫酸多糖,研究其理化性质和抗病毒活性。方法用热水浸提、乙醇沉淀法提取带形蜈蚣藻硫酸多糖、再经DEAE C-52纤维素离子交换柱层析得到2个较纯组分。并对其进行了单糖组成和硫酸基含量等理化性质分析。采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)抑制法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,研究带形蜈蚣藻多糖的抗病毒活性。结果带形蜈蚣藻多糖主要由半乳糖组成,还含有少量的葡萄糖、木糖等,其硫酸基含量达到15%以上;该多糖具有较好的抗病毒活性,其中经提纯的两个组分抗HSV-1对细胞病变的半抑制浓度(IC50)分别为7.81,3.91μg.mL-1,选择(指数)SI值分别大于128,256。结论带形蜈蚣藻硫酸多糖抗CoxB3和HSV-1病毒活性均比较好。

千斤拔中黄酮类成分的UPLC/Q-TOF-MS分析

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)对瑶药千斤拔中黄酮类成分进行分析,并对主要成分进行鉴定。方法用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以水(A)/乙腈(B)梯度洗脱,使用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据。结果 10 min内对千斤拔醇提物进行UPLC的快速分离,根据高分辨质谱结果和MS/MS碎片、结合对照品信息和相关文献,鉴定出千斤拔中20种黄酮类成分。结论应用UPLC/Q-TOF-MS技术可以快速有效地分析千斤拔中黄酮类成分及其二级质谱的裂解规律。

干姜油中姜酚类成分的UPLC/Q-TOFMS分析

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOFMS)对干姜油中姜酚类成分进行分析,并对主要成分进行鉴别。方法用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以水(A)-乙腈(B)梯度洗脱,检测波长280 nm,使用APCI离子源,正离子与负离子模式下采集数据。结果鉴定出干姜油中姜酚类化合物8个,分别为:6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚、12-姜二醇、10-姜酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚和10-姜二酮。结论经过超高效液相色谱的分离,借助Q-TOFMS测定的相对分子质量及正负离子信息可以鉴定干姜油中的主要姜酚类成分,为干姜油姜酚类成分的鉴定提供了一种准确有效的方法。

黄芪及其蜜炙品的UPLC/Q-TOF-MS分析

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)进行黄芪及其蜜炙品的成分分析,并比较蜜炙前后主要成分的变化。方法采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以0.1%(体积分数)甲酸-乙腈-异丙醇体系梯度洗脱,使用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据。应用Markerlynx软件进行主成分分析(principal component analysis,PCA),比较药材炮制前后成分变化。结果通过PCA分析,可以很好地区分蜜炙前后的黄芪药材,并鉴定了包括毛蕊异黄酮、芒柄花素、汉黄芪素、3,9-二-O-甲基尼森香豌豆紫檀酚在内的8种蜜炙前后质量分数变化较大的化合物。结论借助UPLC的快速分离和Q-TOF-MS测定的精确分子量信息,结合PCA模式识别方法可以有效地对黄芪药材蜜炙前后化学成分变化进行分析鉴定。

蜈蚣藻和带形蜈蚣藻脂肪酸成分和无机元素含量分析

目的分析蜈蚣藻和带形蜈蚣藻的脂肪酸成分和无机元素含量。方法采用三氯甲烷-甲醇法提取南海大型经济海藻蜈蚣藻和带形蜈蚣藻中的粗脂肪,利用气相色谱-质谱联用仪分析其脂肪酸的组成。采用Optima 2000DV原子发射光谱仪测定蜈蚣藻和带形蜈蚣藻中几种人体必需无机元素Ca、P、Zn、Mg、Fe、Mn、Cu、Cr、Se、Sr和一些有害元素As、Cd、Pb的含量。结果蜈蚣藻和带形蜈蚣藻的粗脂肪含量分别为5.6%和3.4%,其中不饱和脂肪酸含量分别占其总脂肪酸含量的7.18%和1.08%。蜈蚣藻和带形蜈蚣藻的无机元素含量均较丰富,其中人体必需的Fe、Ca、Mg、P、Zn含量较高,而有害元素As、Cd、Pb含量很低。结论蜈蚣藻和带形蜈蚣藻主要的脂肪酸成分为棕榈酸。相比而言,蜈蚣藻的营养价值更高。

瑶药野柠檬根挥发性成分GC-MS分析

目的研究瑶药野柠檬根的挥发性成分。方法采用水蒸气蒸馏法提取野柠檬根的挥发油,并用GC-MS进行测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构检索,应用色谱面积归一化法计算各成分的相对含量。结果从野柠檬根挥发油中分离并检索出37种化学成分,其中相对百分含量大于3%的分别确定为α-法呢烯、榄香醇、β-马啊里烯、β-桉叶醇、Tticyclo[2.2.1.0(2,6)]heptane,1,7-demethyl-7-(4-methyl-3-pentenyl)。结论该植物中37个挥发性成分均为首次报道,占挥发油气化产物的91%。

带形蜈蚣藻的化学成分研究

目的研究南海大型经济海藻带形蜈蚣藻(Grateloupia turuturu)的化学成分。方法利用色谱、红外、质谱和核磁共振波谱等方法对带型蜈蚣藻的化学成分进行分离和结构鉴定并进行抗病毒活性研究。结果从中分离鉴定了6个化合物,分别为棕榈酸(I)、3-β-5-烯-胆甾醇(Ⅱ)、胆甾-4-烯-6-酮(Ⅲ)、胆甾-4-烯-3-酮(Ⅳ)、胆甾-4,6-二烯-3-醇(Ⅴ)和胆甾-4,6-二烯-3-酮(Ⅵ),化合物Ⅱ抗HSV-1病毒效果较好,其IC50达到7.81μg/ml。结论以上均为首次从该海藻中分离得到。化合物Ⅱ具有较好的抗病毒活性。

抗肝炎类瑶族药的研究现状

对瑶族民间抗肝炎植物药进行了较系统的研究和调查,有属于33科47种的植物药有抗肝炎作用。并对其中的野葛花、枸骨叶、白马骨和小紫金牛护肝作用进行了初步的研究。

香菇多糖对人结直肠癌上皮细胞SW837免疫原性死亡相关分子表达的影响

目的:探究香菇多糖对人结直肠腺癌上皮细胞SW837的免疫原性死亡相关分子、免疫检测点相关分子及共刺激分子表达的影响。方法:分别采用0. 04～4 mg/ml香菇多糖处理SW837细胞,CCK8检测细胞存活率并计算IC50值。0. 2～1 mg/ml香菇多糖处理48 h后,流式细胞术检测与分析其对SW837细胞免疫原性细胞死亡相关分子、免疫检查点相关分子和共刺激分子表达的影响。结果:香菇多糖可显著性抑制SW837细胞增殖,且具有浓度依赖性,IC50值为1. 14 mg/ml。香菇多糖诱导免疫原性死亡相关蛋白钙网蛋白、热休克蛋白70、热休克蛋白90表达量升高,免疫检测点相关分子PDL-1、Galectin9、CD155、CD47、CD39和CD80的表达量明显上升。结论:香菇多糖抗结直肠癌作用可能与调节免疫原性死亡相关分子、免疫检查点分子及共刺激分子的表达量升高有关。

毛茛黄酮类成分的UPLC HILIC/Q-TOF-MS分析

目的:建立超高效亲水性液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC HILIC/Q-TOF-MS)对毛茛黄酮类成分进行分析的方法。方法:用ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱,以甲醇∶水=1∶1含10mM乙酸铵(A)/乙腈∶甲醇=95∶5含10mM乙酸铵(B)梯度洗脱,使用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据。结果:根据元素组成分析、二级质谱和相关文献,鉴定、推断出毛茛中11个主要成分,分别是小麦黄素,牡荆素,荭草素,异荭草素,芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖苷-8-C-α-L-阿拉伯糖苷,小麦黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷,芦丁等。结论:经过超高效亲水性液相色谱的分离,借助Q-TOF-MS测定的准确分子量及二级质谱信息可以判定毛茛中的主要黄酮类成分,为毛茛黄酮类成分分析提供了一种快速有效的方法。

UPLC/Q-TOFMS对三七中皂苷类成分的快速化学表征

本文主要运用超高效液相串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC/Q-TOF MS)对三七中皂苷类成分进行快速分离和鉴定。以超高效液相为分离手段,飞行时间质谱仪为鉴定方法,水饱和正丁醇为提取溶剂,以0.05%甲酸水(A)-0.05%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,采用ESI负离子模式进行数据采集。根据实验结果,并结合相关参考文献,二级质谱裂解数据以及元素组成,分离、鉴定出17种皂苷类成分,并发现三七中含有姜糖酯B成分。实验结果表明经过超高效液相的分离,以及Q-TOF MS的二级负离子信息的鉴定,为分析三七中皂苷类成分提供了一种快速、简便、可靠的方法。

基于UPLC/Q-TOFMS的大鼠血浆磷脂成分的快速分析

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC/Q-TOF MS)联用技术,对大鼠血浆磷脂提取液进行分析,建立了一种快速、简便、可靠的血浆磷脂鉴别方法。以经典的氯仿甲醇法为磷脂的提取方法,以10 mmol/L甲酸铵水溶液(A)-含10 mmol/L甲酸铵的乙腈-异丙醇(1∶1)混合溶液(B)为流动相,采用ESI源,分别在正、负离子模式下进行数据采集。根据实验结果,结合二级质谱裂解数据、元素组成、数据库匹配,鉴定出81个成分,其中包括7个PE、7个PI和1个SM,其余均为PC。所建立的液相色谱-质谱联用分析方法,可为大鼠血浆中磷脂成分的鉴别提供一种快速、简便、可靠的分析手段,以及为血浆磷脂代谢组学的研究奠定基础。

实验性大鼠脾气虚证模型的建立及指标检测

目的建立实验性大鼠脾气虚证模型,为相关中药药理学研究提供实验依据。方法采用劳倦伤脾加饮食失节多因素复合法建立中医脾气虚证大鼠模型,并通过体征变化、白细胞计数、淋巴细胞数量、红细胞计数和血红蛋白含量分析、胸腺指数和脾脏指数、D-木糖吸收实验等对所建模型进行评价。结果与对照组比,模型组脾气虚证大鼠体质量减少,毛色枯槁,泄泻;白细胞数、淋巴细胞数、血红蛋白含量、胸腺指数和脾脏指数较对照组均显著降低;脾气虚证大鼠的小肠吸收功能有所减弱。结论实验性脾气虚证模型建立成功,可用于相关中药的药理学研究。白细胞数和淋巴细胞数可作为判定脾气虚证动物模型的灵敏指标。

UPLC/Q-TOF-MS/MS分析蛇床子提取物大鼠体内外化学成分

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(U PLC/Q-TOF MS/MS)对蛇床子超临界提取物的体内外成分进行分析和鉴定。方法用ACQUITY UPLC BEHC18色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,检测波长254 nm,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据;采用与标准品对比和质谱数据分析及检索文献的方法鉴定化学成分。结果检测出蛇床子超临界提取物中9个化合物,其中5个成分经过鉴定确认均为香豆素类,大鼠口服蛇床子提取物的血浆中检测出欧前胡素和蛇床子素两个原形成分。结论 UPLC/Q-TOF MS技术快速有效,具有较高的灵敏度和分辨率,适宜于鉴定中药复杂的体内外活性成分。

干姜超临界CO_2提取物的HPLC指纹图谱研究

目的采用高效液相色谱法建立干姜超临界CO2提取物的指纹图谱。方法采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol/L磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长为225 nm。结果10批干姜提取物经中药色谱指纹图谱评价软件,确定10个共有峰作为指纹特征,相似度均达到0.9以上。结论该法建立的指纹图谱为干姜提取物的质量控制提供基础。

知母降糖有效部位的质量控制方法研究

目的研究知母降糖有效部位的质量控制方法。方法采用薄层色谱法鉴别皂苷和双苯吡酮类成分,高效液相色谱法测定皂苷和双苯吡酮质量分数。结果薄层色谱鉴别结果表明知母有效部位含皂苷类、芒果苷、新芒果苷成分。菝葜皂苷元、芒果苷、新芒果苷分别在0.640~5.120、13.50~216.0、18.88~113.3μg/m L范围内线性关系良好,平均回收率分别为102.25%、97.75%、100.42%。结论经方法学考察,本方法能精密准确地测定知母降糖有效部位主要成分的质量分数,可作为知母降糖有效部位的质量控制方法。

鼠抗人TCR/CD3单克隆抗体的制备及其初步应用

目的应用B淋巴细胞杂交瘤技术,制备鼠抗人CD3单克隆抗体,并用于T淋巴细胞亚类检测。方法以本室纯化的CD3蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得1株抗人CD3单克隆抗体。经间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养腹水的抗体效价。结合SDS-PAGE实验考察单克隆抗体对CD3促T淋巴细胞增殖活性的作用。结果杂交瘤细胞培养腹水的抗体含量为20 mg/mL,效价为10-7,并对T淋巴细胞有促增殖活性,检测正常人外周血阳性T细胞百分率为(73±7)%。结论制备的抗人CD3单克隆抗体具备较高的纯度和活性,可用于T细胞亚类的检测。

人八聚体结合蛋白4(Oct4)cDNA的克隆及其在大肠杆菌和HEK293T细胞的表达

目的克隆人八聚体结合蛋白4(Oct4)c DNA,研究其在原核及真核系统中的表达。方法提取人宫颈癌He La细胞中的总RNA,经反转录PCR获得c DNA,PCR扩增Oct4 c DNA并将其分别克隆入表达载体p ET-22b(+)原核质粒和pc DNATM3.1(+)真核质粒,构建含该序列的重组原核表达载体p ET-22b(+)-Oct4和真核表达载体pc DNA3.1(+)-his-Oct4。然后分别进行双酶切和测序鉴定。前者在E.coli BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白,后者以脂质体介导法转染至HEK293T细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测细菌和细胞中OCT4蛋白的表达水平。结果 PCR扩增得到约1100 bp目的 DNA片段;重组表达质粒p ET-22b(+)-Oct4和pc DNA3.1(+)-his-Oct4经双酶切鉴定和测序分析证明载体构建成功;p ET-22b(+)-Oct4经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后SDS-PAGE分析表明,目的蛋白在宿主E.coli BL21(DE3)中高效表达OCT4融合蛋白,相对分子质量(Mr)约38 000,与其理论Mr基本相符;pc DNA3.1(+)-his-Oct4转染HEK293T细胞经Western blot法检测,证实导入的Oct4成功表达。结论在大肠杆菌和HEK293T细胞成功表达OCT4蛋白。