新生大鼠胰腺来源干细胞的分离培养与鉴定

目的从新生大鼠胰腺分离出一种胰腺干细胞,并对其进行初步鉴定。方法采集大鼠胰腺,5.5mg/mlⅣ型胶原酶消化,用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基培养,首次传代时利用差速贴壁分离上皮样细胞和成纤维样细胞。多次纯化上皮细胞,细胞密度为80%进行传代。对第4代的细胞进行免疫荧光染色,诱导向β胰岛细胞分化并利用高糖刺激胰岛素释放。结果新生大鼠胰腺中的胰腺干细胞具有较强的增殖能力,可连续传代。第4代细胞经免疫荧光染色,显示胰十二指肠同源框因子1(PDX-1)、巢蛋白(Nestin)、神经元素3(NGN3)、波形蛋白(Vimentin)、胰岛素(Insulin)和C肽(C-peptide)阳性;经诱导分化后,经双硫腙(DTZ)染色为阳性,同时免疫组织化学显示PDX-1和C-peptide阳性;在糖刺激实验中,当无糖刺激时,细胞组胰岛素释放量为(5.3±1.5)pIU/ml,而诱导后的细胞组胰岛素释放量为(30.0±11.5)pIU/ml,两者比较差异有统计学意义(P=0.035)。结论分离的胰腺细胞是胰腺干细胞。