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基于环介导等温技术检测人甲流H1N1病毒的响应面优化分析
1
作者
蔡文凯
郝宗杰
+1 位作者
苏业俣
林艺平
《中国当代医药》
CAS
2024年第16期116-121,共6页
目的为了建立人甲型流感H1N1病毒的环介导等温扩增(LAMP)体系,本研究以H1N1病毒核酸扩增效率为指标,通过响应面分析优化探讨LAMP检测H1N1流感病毒的最佳反应条件。方法根据Box-Benhnken响应设计原理,对影响LAMP反应关键因素(甜菜碱浓度...
目的为了建立人甲型流感H1N1病毒的环介导等温扩增(LAMP)体系,本研究以H1N1病毒核酸扩增效率为指标,通过响应面分析优化探讨LAMP检测H1N1流感病毒的最佳反应条件。方法根据Box-Benhnken响应设计原理,对影响LAMP反应关键因素(甜菜碱浓度、引物浓度、反应温度)进行三因素三水平响应面法优化。同时选取60例确诊甲流临床核酸样本和60例健康受试者核酸样本,分别采用聚合酶链反应(PCR)技术和LAMP检测技术进行比对评估(评估指标包括灵敏度、特异性、准确度)。结果响应面回归模型能较好地预测LAMP检测效果与甜菜碱浓度、引物浓度和反应温度之间的关系,经过优化LAMP反应体系提高检测灵敏度和缩短反应时间。同时与PCR检测结果相比,LAMP检测实现100%的灵敏度、98.9%的特异性和99.2%的准确度,检测下限可达100 copies/ml。结论本研究建立的H1N1甲流LAMP检测是一种高效、灵敏、特异性高且不需要复杂设备的检测方法,适用于基层医疗卫生机构或居家自测,对季节性甲流病毒监测及暴发时应急检测具有重要意义。
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关键词
响应面分析法
环介导等温扩增
甲流H1N1检测
即时检测
下载PDF
职称材料
响应面法优化LAMP反应冻干保护剂配方的研究
2
作者
蔡文凯
祝珊珊
+2 位作者
郝宗杰
苏业俣
林艺平
《海南医学》
CAS
2024年第13期1889-1894,共6页
目的筛选出适用于甲流病毒环介导等温扩增技术(LAMP)的最佳冻干保护剂组合,建立起可在室温下长时间储存的甲流病毒核酸检测体系,为甲流现场快速检测和分级诊疗提供技术支持。方法以LAMP核酸扩增活性为评价指标,在单因素试验的基础上利...
目的筛选出适用于甲流病毒环介导等温扩增技术(LAMP)的最佳冻干保护剂组合,建立起可在室温下长时间储存的甲流病毒核酸检测体系,为甲流现场快速检测和分级诊疗提供技术支持。方法以LAMP核酸扩增活性为评价指标,在单因素试验的基础上利用三因素三水平的响应面法,探究冻干保护剂(海藻糖、牛血清白蛋白和甘露醇)对LAMP试剂的保护效果并优化冻干保护剂的组合。结果采用Box-Behnken试验结果进行回归模型拟合,LAMP试剂的保护剂最佳配方组合为7.64 wt%海藻糖、0.43 wt%牛血清白蛋白和0.85 wt%甘露醇。经真空冷冻干燥且加入保护剂后的LAMP试剂将以脱水形式贮存,可在常温下长期保持活性,使用时加水复溶即可。为了检验保护剂的稳定性,真空冷冻干燥后的LAMP试剂分别置于25℃和37℃下贮存,第0天、4天、8天、12天、16天、20天取出分别进行LAMP扩增活性检测。添加最优保护剂组合的LAMP冻干试剂其核酸扩增活性远大于添加单一保护剂或未添加冻干保护剂组。结论添加最优保护剂组合能够延长LAMP试剂的贮存时间和保持试剂的稳定性。
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关键词
响应面分析
环介导等温扩增技术
真空冷冻干燥
冻干保护剂
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职称材料
题名
基于环介导等温技术检测人甲流H1N1病毒的响应面优化分析
1
作者
蔡文凯
郝宗杰
苏业俣
林艺平
机构
厦门医学院药学系
武汉兰丁云医学检验实验室有限公司检验科
厦门市集美区疾病预防控制中心检验科
出处
《中国当代医药》
CAS
2024年第16期116-121,共6页
基金
湖北省武汉东湖高新区“3551光谷人才计划”(N480)。
文摘
目的为了建立人甲型流感H1N1病毒的环介导等温扩增(LAMP)体系,本研究以H1N1病毒核酸扩增效率为指标,通过响应面分析优化探讨LAMP检测H1N1流感病毒的最佳反应条件。方法根据Box-Benhnken响应设计原理,对影响LAMP反应关键因素(甜菜碱浓度、引物浓度、反应温度)进行三因素三水平响应面法优化。同时选取60例确诊甲流临床核酸样本和60例健康受试者核酸样本,分别采用聚合酶链反应(PCR)技术和LAMP检测技术进行比对评估(评估指标包括灵敏度、特异性、准确度)。结果响应面回归模型能较好地预测LAMP检测效果与甜菜碱浓度、引物浓度和反应温度之间的关系,经过优化LAMP反应体系提高检测灵敏度和缩短反应时间。同时与PCR检测结果相比,LAMP检测实现100%的灵敏度、98.9%的特异性和99.2%的准确度,检测下限可达100 copies/ml。结论本研究建立的H1N1甲流LAMP检测是一种高效、灵敏、特异性高且不需要复杂设备的检测方法,适用于基层医疗卫生机构或居家自测,对季节性甲流病毒监测及暴发时应急检测具有重要意义。
关键词
响应面分析法
环介导等温扩增
甲流H1N1检测
即时检测
Keywords
Response surface methodology
Loop-mediated isothermal amplification
Influenza A H1N1 detection
Point-of-care test
分类号
R373.13 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
响应面法优化LAMP反应冻干保护剂配方的研究
2
作者
蔡文凯
祝珊珊
郝宗杰
苏业俣
林艺平
机构
厦门医学院药学系
出处
《海南医学》
CAS
2024年第13期1889-1894,共6页
基金
武汉光谷3551人才计划项目(编号:N480)
厦门医学院口腔生物材料福建省高校工程研究中心资助研究经费项目(编号:XMMC-KQ202202)。
文摘
目的筛选出适用于甲流病毒环介导等温扩增技术(LAMP)的最佳冻干保护剂组合,建立起可在室温下长时间储存的甲流病毒核酸检测体系,为甲流现场快速检测和分级诊疗提供技术支持。方法以LAMP核酸扩增活性为评价指标,在单因素试验的基础上利用三因素三水平的响应面法,探究冻干保护剂(海藻糖、牛血清白蛋白和甘露醇)对LAMP试剂的保护效果并优化冻干保护剂的组合。结果采用Box-Behnken试验结果进行回归模型拟合,LAMP试剂的保护剂最佳配方组合为7.64 wt%海藻糖、0.43 wt%牛血清白蛋白和0.85 wt%甘露醇。经真空冷冻干燥且加入保护剂后的LAMP试剂将以脱水形式贮存,可在常温下长期保持活性,使用时加水复溶即可。为了检验保护剂的稳定性,真空冷冻干燥后的LAMP试剂分别置于25℃和37℃下贮存,第0天、4天、8天、12天、16天、20天取出分别进行LAMP扩增活性检测。添加最优保护剂组合的LAMP冻干试剂其核酸扩增活性远大于添加单一保护剂或未添加冻干保护剂组。结论添加最优保护剂组合能够延长LAMP试剂的贮存时间和保持试剂的稳定性。
关键词
响应面分析
环介导等温扩增技术
真空冷冻干燥
冻干保护剂
Keywords
Response surface analysis
Loop-mediated isothermal amplification
Vacuum freeze-drying
Lyophilised protective agent
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于环介导等温技术检测人甲流H1N1病毒的响应面优化分析
蔡文凯
郝宗杰
苏业俣
林艺平
《中国当代医药》
CAS
2024
0
下载PDF
职称材料
2
响应面法优化LAMP反应冻干保护剂配方的研究
蔡文凯
祝珊珊
郝宗杰
苏业俣
林艺平
《海南医学》
CAS
2024
下载PDF
职称材料
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