植物形态学及SSR标记在药用植物遗传分析中的应用

植物形态学在遗传多样性分析中具有直接性与简便性,直接反映遗传的变异系数;而SSR是建立在PCR基础上的1种新型DNA分子标记,具有含量丰富、多态性高、共显性和检测方法简单等优点,在药用植物遗传分析上具有广泛的应用前景。作者对遗传多样性的定义和研究方法,以及植物形态学和SSR分子标记在药用植物遗传多样分析中的应用进行了简要概述。

优良广西莪术株系筛选及其挥发油成分比较

对150个广西莪术株系单株产量及挥发油含量进行考察,选取产量和挥发油含量较高的广西莪术株系,并比较筛选单株挥发油化学成分。结果共筛选出的12个优质广西莪术株系,总共鉴定出35种化学成分,其存在共有挥发油成分,又存在非共有挥发油成分。玉13/C106、玉14/C29、玉18/B97的株质量和挥发油主要化学物质含量均较高,为优质的广西莪术品系。

广西莪术优良种质资源植株形态和药材性状的对比分析

目的:对比分析品质优良的广西莪术的植株形态、药材性状特征,明确优良种质广西莪术的植株形态和药材性状的特征;为选育高产优质的广西莪术品种以及建立广西莪术种质资源数据库提供依据。方法:测量21份优良种质植株苗期、成熟期的外观形态,分析成熟期采收的各种质药材的性状特征。结果:测得苗期、成熟期各种质植株的株高、叶片数、叶长和宽、叶舌长、叶鞘长、叶鞘宽和叶柄长数据;叶鞘、叶柄颜色呈多样;叶片被毛稀疏植株较多,叶基呈偏斜和楔形以及叶端呈细尾状渐尖和短渐尖形状;各种质材料苗期、成熟期生长外观形态差别较大,有明显的种间差异;比较各种质药材性状特征的异同。结论:广西莪术植株形态与药材性状具有丰富的多样性,其植株形态和药材性状与其产量和挥发油含量无直接关系,但各种质材料的植株形态和药材性状代表各植株的外观特征,在选育良种时可作为形态特征来甄别。

广西莪术SSR-PCR反应体系优化和引物筛选研究

以广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang)嫩叶为材料,采用单因素和正交试验设计建立和优化SSR-PCR反应体系和反应程序,对最适宜退火温度(Tm)进行筛选优化,对17对已公布的姜黄属通用性引物进行扩增试验,筛选出多态性好、条带清晰的引物。结果表明,建立了适合广西莪术SSR分析的反应体系和扩增程序,即在15μL体系中,DNA模板为30 ng/μL,3μL,Mix(包含DNTP、Mg2+、1×buffer、Taq酶)为5μL,dd H2O为6μL,引物为各0.5μL时,分析效果较好,扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性30 s,根据不同引物的退火温度复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;最后72℃延伸5 min;反应结束后,4℃保存。同时筛选出在试验材料中能产生较清晰主带的引物共12对,初步验证了应用SSR分子标记分析在广西莪术遗传多样性的可行性。

广西莪术EST-SSR标记开发

目的利用NCBI公布的姜黄EST序列,挖掘SSR位点,开发近缘种广西莪术EST-SSR标记。方法下载NCBI公布的姜黄EST序列,利用SSR-FINDER搜索SSR位点,采用Primer5.0设计SSR引物,挑选30个表现型差异较大的广西莪术进行有效性及多态性检测。结果 12 678条EST序列含有SSR位点1 243个,其中二核苷酸、三核苷酸重复序列最多,分别占50.36%,31.54%,以AT/TA和CT/GA出现频率最高。利用Primer5.0设计引物共325对,PCR检测表明,104对引物可以扩增出稳定清晰的带型;在至少30份不同种质广西莪术中检测到48对SSR引物具有多态性,占设计引物的38.09%。结论姜黄EST资源中含有高频率的SSR位点,且EST-SSR标记开发效率较高。

医用臭氧联合中西医治疗膝骨性关节炎的研究进展

膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)是以膝关节软骨退变、甚至关节磨损、骨质增生或韧带变性等为主要病理变化,以疼痛和功能活动受限甚至畸形为主要临床表现的关节疾病,是发生在中老年群体的常见疾病。目前,临床上采用医用臭氧治疗联合西医、中医方法治疗膝骨性关节炎有确切疗效,是一种安全、经济、患者易于接受的治疗手段。本文主要对膝骨性关节炎的发病机制,医用臭氧在膝骨性关节炎的治疗机制及近年来在中医、西医联合医用臭氧治疗膝骨性关节炎的临床疗效进行总结,为膝骨性关节炎的治疗提供借鉴。

适用于SSR分析的广西莪术DNA提取方法考察

目的：获取适片j于广两莪术简单序列重复（SSR）分析的高质量DNA，为陔品种的遗传多样性研究提供参考。方法：选择广西莪术嫩叶为材料，采用经典十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和改良CTAB法提取广西莪术总DNA，考察手工和机器研磨的差异性，采用UV检测DNA浓度和纯度，DNA作为模板进行聚合酶链反应（PCR）扩增，引物选择clest SSR-01，clest SSR-03，clest SSR-06，clest SSR-08，clest SSR-14，clest SSR-15，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA扩增效果。结果：改良CTAB法所提DNA的A260nm／A280nm 1.8-2.0，蛋白质、多糖、RNA等物质去除较彻底，DNA符合PCR扩增结果要求，使用姜黄属通用引物能扩增出清晰条带。经典CTAB法所提DNA的A260nm／A280nm 1.50-1.60，含较多杂质，无法用于PCR扩增等分子生物学研究。结论：改良CTAB法提取所得DNA质量较好，可有效上除次生代谢产物对DNA的干扰，适用于广西莪术SSR分子标记和遗传多样性分析。

桂郁金EST资源的SSR信息分析及EST-SSR标记开发

目的:分析桂郁金EST中SSR位点分布规律,开发桂郁金EST-SSR引物,探讨EST-SSR用于桂郁金品种遗传多样性的可行性。方法:从NCBI公共数据库下载姜黄属EST序列(expressed sequence tag,EST)12 678条,利用MISA软件对其进行SSR位点查找,选出符合条件的序列,采用Primer 5.0软件设计EST-SSR引物,利用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳研究这些EST-SSR引物PCR扩增的特点,进一步验证开发结果的合理性与有效性。结果:下载得到的12 678条EST序列中,共有926条序列包含SSR位点,占整个EST数据库的7.30%,其中SSR位点所占比例最大的是二核苷酸重复序列,三核苷酸和四核苷酸次之,分别为623(50.90%)个,388(31.70%)个和125(10.21%)个。根据筛选得到的微卫星序列共设计了165个EST-SSR引物对,选择其中92分以上的24个合成。PCR检测表明,21个引物对(87.50%)可以扩增出稳定清晰的带型;在6份不同种质桂郁金中检测到13对EST-SSR引物有多态性,占设计引物的54.17%。利用13对验证的EST-SSR引物对20个桂郁金品种进行了亲缘关系分析。结论:桂郁金EST-SSR标记开发的效率较高,是桂郁金SSR标记开发的重要措施,对于桂郁金品种鉴定和遗传多样性分析以及育种等方面具有重要的意义。

广西莪术EST-SSR标记开发及其在遗传多样性分析中的应用

目的:分析姜黄表达序列标签(EST)中简单重复序列(SSR)位点的分布特点,开发近缘种广西莪术EST-SSR引物,探讨EST-SSR用于进行广西莪术遗传多样性分析及分子育种的可行性。方法:下载NCBI中公布的姜黄EST 12 678条,利用SSR-FINDER搜索SSR位点,筛选符合条件的序列,采用Primer 5.0设计SSR引物,挑选30个表现型差异较大的广西莪术种质进行引物有效性及多态性检测,对50份广西莪术种质进行遗传多样性分析。结果:12 678条EST序列含有SSR位点1 243个,其中二核苷酸出现频率为50.36%,三核苷酸31.54%,四核苷酸10.30%,以AT/TA和CT/GA出现频率最高。利用Primer 5.0设计引物共325对,聚合酶链式反应(PCR)检测表明,104对引物可以扩增出理想PCR产物,在至少30份不同种质广西莪术中检测到48对SSR引物具有多态性,占设计引物的38.09%。遗传多样性分析研究,聚类分析结果表明50份广西莪术种质在相关系数0.7处,聚类为2类,遗传相似性系数变化范围较窄。结论:姜黄EST资源中含有高频率的SSR位点,且EST-SSR标记开发效率较高。本研究开发了48对广西莪术EST-SSR标记,并筛选出富含SSR位点的候选序列,用聚类图验证了植物之间的亲缘关系,为广西莪术遗传多样性分析和分子育种研究提供参考。