4种茉莉病毒一步法多重RT-PCR检测技术的建立

茉莉生长过程中普遍受到多种病毒的复合侵染。由于缺乏病毒与症状关系的系统研究,仅通过症状很难准确分辨茉莉被何种病毒侵染,所以建立快速精准诊断多种茉莉病毒病的检测技术具有重要应用价值。本研究建立了一种可同时检测4种茉莉病毒——茉莉T病毒(jasmine virus T,JaVT)、茉莉C病毒(jasmine virus C,JaVC)、茉莉H病毒(jasminevirus H,JaVH)和茉莉A病毒(jasmine virus A,JaVA)——的一步法多重逆转录PCR(one-step multiplex reverse transcription-PCR,RT-PCR)体系,其最优反应体系为:在总体系20.0μL中,JaVT、JaVC、JaVH和JaVA的上下游引物浓度分别为200、150、100和150nmol·L^(-1),One-step Enzyme Mix:0.2μL,2x反应缓冲液:10.0μL,模板量:1.0μg;多重RT-PCR参数设定为:RNA反转录50℃30min;预变性94℃2min;94℃变性30s;55℃退火30s;72℃延伸45s,30个循环;72℃整体延伸10 min。研究结果表明建立的一步法多重RT-PCR可同时高效精准地检测4种茉莉病毒,极大地提高了检测效率,可被广泛应用于实验室精准、高效检测和田间茉莉病毒病的检测。