阿霉素对心肌细胞ACADSB表达和自噬的影响

目的探讨短支链酰基辅酶A脱氢酶(acyl-CoA dehydrogenase short/branched chain,ACADSB)和细胞自噬在阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的心肌细胞氧化损伤过程中的变化。方法细胞水平构建心肌细胞氧化损伤模型,DOX诱导H9c2心肌细胞24 h,实验共分两组,对照组和诱导组,诱导组添加0.5μmol/L的DOX,对照组添加等量的PBS。细胞增殖实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测H9c2心肌细胞活性,丙二醛试剂盒检测H9c2细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,RT-PCR检测SOD 2、Catalase、ACADSB、Atg 5、Atg 7、Beclin 1和ULK1的mRNA变化,蛋白质印迹法和免疫荧光检测ACADSB蛋白的表达,以及检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的变化。结果DOX显著抑制H9c2心肌细胞的活性,增加丙二醛的含量,促进SOD 2和Catalase的mRNA表达,以及抑制ACADSB mRNA和蛋白的表达。DOX诱导自噬相关基因Beclin 1 mRNA表达显著增加,Atg 7 mRNA表达明显降低,而ULK 1和Atg 5的mRNA表达没有变化,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著升高。结论DOX诱导H9c2心肌细胞氧化损伤并且抑制ACADSB的转录活性和蛋白表达,增强自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达,提示ACADSB可作为心肌病治疗的靶点。