TK基因重组缺陷山羊痘病毒构建及其生物学特性鉴定

【目的】利用同源重组技术构建TK基因缺陷的山羊痘病毒(GTPV)毒株,为研制出更安全、高效的GTPV弱毒疫苗和病毒载体提供备选毒株。【方法】采用PCR克隆GTPV AV41株TK基因(ORF56)及其侧翼基因组片段,在TK基因内部插入报告基因EGFP和抗性基因gpt表达盒,构建GTPV重组转移载体pTK-Eg。将重组转移载体pTK-Eg与GTPV AV41株共转染Vero细胞,通过空斑纯化筛选阳性重组病毒,鉴定其生长特性和遗传稳定性,并接种山羊评价其安全性和免疫原性。【结果】成功构建获得一株TK基因缺陷的重组病毒vTK-Eg。与亲本毒株GTPV AV41相比,vTK-Eg的生长特性及其形成的细胞病变均未发生显著改变,只是毒价略微下降100.5个数量级;在原代牛睾丸(BT)细胞上连续传代,至少在10代内保持遗传性状和病毒滴度稳定。接种vTK-Eg的山羊精神和食欲均正常,接种后体温升高和局部反应的严重程度均较接种亲本毒株GTPV AV41的山羊有所降低;vTK-Eg与GTPV AV41株诱导山羊产生的GTPV中和抗体水平无明显差异(P>0.05)。【结论】构建的TK基因重组缺陷病毒vTK-Eg具有良好的遗传稳定性和免疫原性,较亲本毒株其安全性也有所提高,可作为研制GTPV基因工程弱毒疫苗和活载体疫苗的备选毒株。

新型鸭黄病毒广西流行毒株的分离和包膜蛋白的序列分析

本试验旨在了解新型鸭黄病毒(duck flavivrus,DFV)广西流行毒株的生物学特性,从发病樱桃谷种鸭群分离到1株新型DFV LG/01/11,并利用设计的引物扩增获得病毒包膜蛋白E基因。结果显示,LG/01/11株E基因全长1503bp,编码500个氨基酸,与国内2010年以来分离的鸭黄病毒核苷酸序列同源性达99.3%～99.6%,没有碱基缺失和插入现象,只有散在的碱基突变。本试验结果为病毒生物学特性分析和遗传变异研究及相关疫病的防控奠定了基础。

山羊痘病毒serpin基因缺失重组毒株的构建和鉴定

通过敲除与山羊痘病毒(GTPV)毒力相关的serpin基因以构建安全性更好的基因工程减毒株和病毒表达载体。采用PCR方法克隆了包含GTPV AV41株serpin基因(ORF149)及其侧翼长为1 745bp的片段,并在serpin基因片段内部分别插入报道基因EGFP和抗性基因gpt表达盒,构建GTPV重组转移载体pSp-Eg。然后将重组转移载体pSp-Eg与GTPV AV41株共转染BHK-21细胞,通过空斑纯化筛选阳性重组病毒,并鉴定其遗传稳定性和生长特性。结果,成功获得一株敲除serpin基因的重组病毒vSp-Eg。该重组病毒在至少10代能稳定表达绿色荧光蛋白,在培养细胞中的生长特性与亲本毒株基本一致,但病毒效价降低1个数量级。结果表明,serpin基因是GTPV的复制非必需基因。

广西重大动物疫病免疫在线管理系统的开发及应用

为了增强动物疫病防控管理水平、提高管理效率,探索在广西推行动物疫病防控的信息化管理,开发了重大动物疫病免疫在线管理平台,建立了覆盖广西的免疫信息数据库,改变了以前费时费力、数据不统一、信息不准确、效率低下的情况。