基于IL-25/NF-κB信号通路探讨益气温阳护卫汤对支气管哮喘大鼠气道炎症的改善作用

目的 基于IL-25/NF-κB信号通路探讨益气温阳护卫汤对支气管哮喘大鼠气道炎症的作用机制。方法 将60只大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组(0.2 mg/mL)和益气温阳护卫汤低、中、高剂量组(1、2、4 g/mL),每组10只,采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝配制的混悬液进行腹腔注射,建立哮喘模型,造模后连续灌胃给药2周。每天观察各组大鼠饮食、精神状态、毛发、呼吸等情况,全自动血液分析仪对大鼠肺泡灌洗液(BALF)进行炎症细胞分类计数,HE染色观察肺组织病理变化,免疫组化(IHC)法检测肺组织IL-25蛋白表达,ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平,RT-qPCR检测肺组织IL-25、TRAF6 mRNA表达,Western blot法检测肺组织IL-25、TRAF6、IκBα、p-IκBα、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织严重受损,大量炎性细胞浸润;BALF中各类炎症细胞数量、IL-4、IL-5、IL-13水平升高(P<0.01),肺组织IL-25、TRAF6 mRNA表达,IL-25、TRAF6、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,益气温阳护卫汤各剂量均可改善肺组织炎性细胞浸润情况,降低BALF中各类炎性细胞数量、IL-4、IL-5、IL-13水平(P<0.05,P<0.01),降低肺组织IL-25、TRAF6 mRNA表达,IL-25、TRAF6、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达(P<0.01)。结论 益气温阳护卫汤可以抑制支气管哮喘大鼠气道炎症,其作用可能与抑制IL-25/NF-κB信号通路活化,减少炎症因子表达有关。

基于TGF-β_(1)/Smad3信号通路探讨益气温阳护卫汤防治支气管哮喘的作用机制

目的:探讨益气温阳护卫汤(YWHD)调控转化生长因子(TGF)-β_(1)/Smad同源物3(Smad3)信号通路对支气管哮喘大鼠气道炎症的作用及机制。方法:60只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、地塞米松组及YWHD低、中、高剂量组,每组10只。支气管哮喘大鼠模型采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)氢氧化铝混悬液1 mL致敏,2%OVA雾化吸入激发。每天雾化OVA前1 h,正常组给予生理盐水,地塞米松组给予3 mg·kg^(-1)药液,益气温阳护卫汤低、中、高剂量组分别以3、6、12 g·kg^(-1)灌服。观察大鼠一般情况及肺功能;收集大鼠肺泡灌洗液(BALF)和血清,计数肺泡灌洗液中炎性细胞,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中免疫球蛋白E(IgE)和BALF中炎性因子水平;苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)和碘酸雪夫(PAS)染色分别观察肺组织病理形态学变化、胶原沉积和气道黏液分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中TGF-β_(1)/Smad3相关mRNA和蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠吸气总气道阻力(RL)升高而动态顺应性(Cdyn)明显降低(P<0.05,P<0.01);血清IgE水平、肺泡灌洗液中炎性细胞计数及其炎症因子水平显著增加(P<0.01);肺组织有大量炎性细胞浸润、胶原沉积和黏液分泌明显增多;肺组织TGF-β_(1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Smad3磷酸化的表达水平显著增加(P<0.01)。与模型组比较,地塞米松组和益气温阳护卫汤高剂量组显著降低哮喘大鼠的气道阻力(P<0.01),改善其肺动态顺应性(P<0.05);血清IgE水平、肺泡灌洗液中炎性细胞计数和炎症因子水平显著降低(P<0.05);肺组织病理损伤得到改善;肺组织TGF-β_(1)、α-SMA及Smad3磷酸化的表达降低(P<0.01)。结论:益气温阳护卫汤降低支气管哮喘大鼠气道炎症,改善肺组织病理损伤及气道重塑,可能与TGF-β_(1)、α-SMA蛋白及Smad3磷酸化水平下调有关。