利用细菌表面展示技术强化细胞固定化生产吲哚-3-乙酸

目的利用细菌表面展示技术,以冰晶核蛋白INaA、INaK为锚定蛋白,将负电荷的氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)锚定在大肠杆菌表面(Escherichia coli),增加细胞膜表面携带的负电荷,与改性后带正电荷的生物炭吸附以强化生物炭固定化细胞的功能。利用2 mol·L^(-1)的FeCl_(3)改性玉米秸秆生物炭使其呈正电性,将改性生物炭与细胞表面负电荷增加的重组菌株进行静电吸附,重组菌株EPA03与对照菌株相比吸附率提高31.75%。将此策略应用在固定化细胞高效生产IAA的菌株中,在全细胞催化连续循环中,菌株EPA03连续循环中能连续反应6个循环,IAA积累量比对照菌株提高了42.85%。

一株来自可口革囊星虫产纤溶酶菌株的筛选与鉴定

对野生可口革囊星虫肠道细菌进行分离,共获得10株细菌.通过琼脂-纤维蛋白平板法初筛,以透明溶圈为筛选标记,初筛出产纤溶酶菌株4株.对初筛的菌株发酵培养,培养液经琼脂-纤维蛋白平板法复筛,筛选出纤溶酶活力较高的菌株XC5.通过形态特征观察及16S rDNA序列比对分析,鉴定菌株XC5为芽胞杆菌属的Bacillus oryzaecorticis.该菌株在生长18 h后检测到最高纤溶酶活力为601.4 U·mL-1.该试验丰富了海洋来源纤溶酶菌株的菌种资源,并为其后续相关研究提供了基础.

养殖可口革囊星虫纤溶酶分离纯化及酶学特性研究

采用盐析、Q-SepharoseFastFlow阴离子和SephcrylS-100凝胶层析等方法,从养殖可口革囊星虫食道、肠、体液中分离纯化纤溶酶,确定该酶在肠中的位置,研究温度(4、37、50、60、70℃)、pH(3、4、5、6、7、8、9、10)和金属离子(Na^(+)、K^(+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)、Fe^(2+)、Cu^(2+)、Al^(3+))对酶活性的影响,以及体外溶解血凝块的能力。试验结果表明,从肠中分离纯化出有较强溶解纤溶蛋白能力的蛋白酶,命名为可口革囊星虫纤溶酶,其活性为4343.12 U/mg,是粗提物酶活性的13.82倍,但酶总活性回收率只有3.83%。SDS-PAGE电泳结果表明,该纤溶酶纯度较高,分子质量约为32ku。在37℃以下及pH6~9时,酶稳定性较好;Mg^(2+)能提升该纤溶酶的活性(P<0.05),Fe^(2+)、Cu^(2+)、Al^(3+)能显著抑制该酶活性(P<0.05);该酶对体外血凝块溶解率达到88.09%。试验结果表明,养殖可口革囊星虫肠内也具有活性较强的纤溶酶,为其纤溶酶的开发应用提供保障。

纳米二氧化硅固定化酶的研究进展

酶是活细胞产生的具有催化功能的蛋白质,人们可以利用酶来酿酒、制作食物以及生产各种工业用品,还可以诊断和治疗各种疾病。游离酶在工业生产和其他实际应用中存在许多局限性,如性能不稳定、易失活、耐热性低等。固定化游离酶是克服上述问题的有效手段之一。在众多的固定化酶载体中,纳米二氧化硅因其具有高表面积、强机械稳定性、制备简单、无化学反应和绿色环保等特点而被认为是固定化酶的优良基质。文章主要阐述了纳米二氧化硅固定化酶的不同方法,总结了不同类别的纳米二氧化硅固定化酶的固定效果,同时对复合纳米二氧化硅材料对固定化酶的应用前景及其存在的挑战进行了探讨。