新型Bcl-2小分子抑制剂的设计、合成与初步活性评价

目的设计并合成一系列新型Bcl-2小分子抑制剂,测试其对Bcl-2和Bcl-2 G101V(Bcl-2突变体)与BH3-only蛋白相互作用的抑制活性,初步探究其构效关系,为后续相关研究提供参考。方法以临床化合物BGB-11417为先导化合物,通过骨架跃迁等方法,设计新型含螺环结构的Bcl-2小分子抑制剂。以苯甲醛为原料,通过取代、环化和偶联等反应合成目标化合物,并通过1H NMR和LC-MS进行结构确定。采用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)评价目标化合物对Bcl-2和Bcl-2 G101V(Bcl-2突变体)与BH3-only蛋白相互作用的抑制能力。结果共合成8个新型螺环Bcl-2小分子抑制剂,其中29a[IC_(50)(Bcl-2):0.8 nmol·L^(-1),IC_(50)(Bcl-2 G101V):55.41 nmol·L^(-1)],29d[IC_(50)(Bcl-2):0.27 nmol·L^(-1),IC_(50)(Bcl-2 G101V):18.65 nmol·L^(-1)]对Bcl-2和Bcl-2 G101V与BH3-only蛋白的相互作用有较好的抑制活性。结论建立了一种新型螺环Bcl-2小分子抑制剂合成方法,发现了对Bcl-2和Bcl-2 G101V(Bcl-2突变体)与BH3-only蛋白相互作用有较好抑制活性的新化合物,其中29d具有进一步研究的价值。

欣力康胶囊对血液性肿瘤细胞的增殖抑制作用研究

目的 探索欣力康胶囊在血液肿瘤上应用的可能性,以拓展欣力康胶囊的应用范围。方法 采用MTS比色法检测欣力康胶囊对8株人血液性肿瘤细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测欣力康胶囊对急性髓系白血病MV-4-11细胞周期阻滞和凋亡促进的作用;采用蛋白免疫印迹法检测欣力康胶囊对MV-4-11细胞内pro-Caspase 3、cleaved-Caspase 3以及NF-κB p65蛋白水平的影响;依托MV-4-11皮下移植瘤裸小鼠模型,考察欣力康胶囊对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。结果 欣力康胶囊对MV-4-11、RS4;11、MM.1S、RPMI-8226、Mino、Jeko-1、OCI-LY10和TMD8细胞增殖抑制的IC_(50)值分别为(54.05±6.33)、(125.33±2.46)、(655.87±7.95)、(153.33±8.50)、(188.70±9.11)、(180.87±7.31)、(186.10±6.55)、(253.53±8.88)μg·mL^(-1);欣力康胶囊可促进MV-4-11细胞凋亡,且具有浓度依赖性,当质量浓度达到500 μg·mL^(-1)时凋亡率为(99.41±0.36)%(P<0.001),而对细胞周期影响较弱;欣力康胶囊可促进MV-4-11细胞中凋亡相关蛋白pro-Caspase 3的剪切,下调NF-κB p65,且呈一定的浓度依赖性;临床用药浓度(1000 mg·kg^(-1))的欣力康胶囊能够显著抑制荷MV-4-11皮下移植瘤小鼠的肿瘤生长,其抑瘤率为57.28%。结论 欣力康胶囊对8种血液性肿瘤细胞株的增殖均有一定的抑制作用,其中对人急性髓性白血病MV-4-11细胞的增殖抑制作用最优,其机制主要是抑制NF-κB通路以及促进细胞凋亡,且在体内药效上,临床用药浓度的欣力康胶囊可显著抑制荷MV-4-11皮下移植瘤小鼠肿瘤的生长。以上结果提示欣力康胶囊可用于血液性肿瘤的辅助治疗。

契税 新税制改革浅析

契税是我国一个古老的税种,最早起源于东晋的“估税”,后历代沿袭,不断改进。契税在群众中有很深的影响,素有“地凭文契官凭印”、“买地不税契、诉讼没凭据”之说。 新中国成立后,中央人民政府政务院曾公布《契税暂行条例》,但1956年实行社会主义工商业改革以后,契税税源逐步减少,直至后来,全国契税工作基本处于停顿状态。党的十一届三中全会以后,随着社会和经济秩序的恢复,城乡房产转移事件日益增多,各地随之恢复了契税工作,契税收入在近几年有较大幅度增加。但由于近年来房地产市场发展较快,土地、房屋权属转移金额成倍增加,交易形式也有很大变化,1950年颁布的旧《条例》已经显然不能适应新形势的需要。1997年7月7日,国务院第224号令公布了《中华人民共和国契税暂行条例》(以下简称新《条例》),于当年10月1日起施行。 新《条例》与过去的旧《条例》相比,主要有以下修订:

组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)抑制剂分子水平高通量筛选模型的建立

旨在建立分子水平HDAC6小分子抑制剂的高通量筛选模型,用于新型HDAC6特异性小分子抑制剂的发现。建立HDAC6的昆虫表达系统,分离纯化HDAC6蛋白,利用底物Boc-Lys(Ac)-AMC对纯化的HDAC6进行测活,并对测活体系进行优化,以SAHA为阳性抑制剂,确定适合高通量筛选的酶及底物浓度,反应时间等。首先构建HDAC6昆虫真核细胞表达载体,转入昆虫细胞中表达,并利用GST亲和柱纯化获得较高纯度的GST-HDAC6融合蛋白;建立体外HDAC6分子测活方法,表明昆虫表达的GST-HDAC6融合蛋白具有去乙酰化酶活性,并通过对多种参数优化使得Z’因子达到0.60,表明分子水平的HDAC6小分子抑制剂高通量筛选体系成功建立。

肌醇需求酶1(IRE1)激酶抑制剂高通量筛选模型的建立

运用昆虫蛋白表达体系成功表达纯化得到高纯度的内质网单次跨膜蛋白肌醇需求酶1(IRE1)细胞质区域段,并建立基于均相时间分辨荧光(HTRF,Homogeneous Time-resolved Fluorescence)原理的激酶活性检测体系,优化激酶抑制剂的高通量筛选模型.该模型Z′因子等于0.58,CV值等于7.5%,符合高通量筛选要求,表明高通量筛选模型建立成功.本工作为进一步发现IRE1激酶抑制剂及其后续研究工作奠定坚实基础.

组蛋白赖氨酸甲基转移酶DOT1L抑制剂分子水平高通量筛选模型的建立

类端粒沉默干扰体1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)是一种能够催化组蛋白H3第79位赖氨酸(H3K79)发生甲基化修饰的表观遗传调控酶,是第一个被发现不含有SET结构域的赖氨酸甲基转移酶.H3K79位点的甲基化程度能够影响和调控某些特定基因的表达,与急性髄性白血病(acute myelocytic leukemia,AML)的发生与发展密切相关.为建立一种分子水平DOT1L小分子抑制剂的高通量筛选模型,以EPZ-5676为阳性化合物,探讨最佳反应酶浓度、底物浓度及反应时间等,并对优化后的反应体系进行检测和确认.通过对多种参数优化使得高通量筛选体系的Z'因子达到0.54,表明已成功建立了DOT1L小分子抑制剂高通量筛选模型.

适应财税体制改革 做好农业特产税征管工作

农业特产税是农业特产农业税的简称.它是根据今年1月30日国务院第143号令发布的《国务院关于对农业特产收入征收农业税的规定》,对从事农业特产品生产和收购部分农业特产品的单位和个人征收的一种税.为了贯彻实施国务院令,最近省政府第47号令发布了《浙江省实施【

对我省农业特产税制实施情况的调查

今年初,国务院第143号令发布了《国务院关于农业特产收入征收农业税的规定》,决定取消产品税,将原农林牧水部分产品税与原农林特产农业税归并、统一开征农业特产税。我省根据国务院令及财政部有关规定制定了实施办法并以省政府令(第47号)形式颁发各地执行。最近,我们对全省贯彻执行农业特产税新税制情况及有关问题进行了一些调查。

牢记总书记嘱托 传承好红色基因

江淮四月，春风拂面，又到了映山红盛开的季节。两年前的4月24日，习近平总书记来到六安市金寨县视察。在参观革命博物馆时他深情地说，“我们要沿着革命前辈的足迹继续前行，把红色江山世世代代传下去”。