人参皂苷Compound K通过Bcl-2相关转录因子1诱导人肝癌细胞SMMC-7721自噬的作用

[目的]探讨人参皂苷Compound K(人参皂苷CK)通过Bcl-2相关转录因子1(Bclaf1)诱导人肝癌细胞SMMC-7721自噬的作用.[方法]取人参皂苷CK(0,20,40,60,80μmol/L)分别作用于人肝癌细胞SMMC-772124,48,72 h,采用MTT法检测人参皂苷CK对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用;人参皂苷CK(40μmol/L)处理人肝癌细胞SMMC-772148 h后,单荧光GFP-LC3质粒转染细胞和透射电子显微镜观察敲除Bclaf1基因对细胞自噬的影响,采用Western blot法检测CRISPR/Cas9技术敲除Bclaf1基因后自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达情况.[结果]人参皂苷CK可抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖,与空白对照组比较,Bclaf1表达量明显减少(P<0.01).人参皂苷CK处理Bclaf1稳定敲除肝癌细胞,自噬更加明显,与空白对照组比较,LC3Ⅱ蛋白表达量显著增加(P<0.01).[结论]人参皂苷CK可通过Bclaf1诱导人肝癌细胞SMMC-7721自噬.

人参皂苷CK调节HIF-1ɑ介导的糖酵解抑制人肝癌细胞增殖作用机制的研究

目的探讨人参皂苷CK(Ginsenoside, CK)抑制低氧诱导因子-1α介导的糖酵解途径抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法利用CCK8法检测CK对人肝癌细胞Bel-7404增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期;免疫荧光法检测HIF-1α的定位;应用比色分析法检测乙酰辅酶A和乳酸含量;CRISPR-Cas9技术敲除HIF-1α基因;Western blot检测CK作用后HIF-1α泛素化相关蛋白及糖酵解关键酶的表达。结果 CK对低氧条件下人肝癌细胞增殖及HIF-1α表达有抑制作用,且能降低细胞乳酸含量,升高乙酰辅酶A的含量,上调RACK1的表达,下调HIF-1α和HSP70、HSP90、HK2、LDHA的表达。结论 CK可以通过抑制低氧条件下人肝癌细胞Bel-7404中HIF-1α介导的糖酵解途径抑制细胞增殖。

人参皂苷CK通过调控ERK1/2通路诱导人肝癌细胞线粒体凋亡作用机制的研究

目的探讨人参皂苷Compound K(人参皂苷CK)通过调控ERK1/2通路诱导人肝癌细胞线粒体凋亡的作用及其机制。方法采用CCK-8、流式细胞术检测不同浓度人参皂苷CK(0,20,40,60,80μmol/L)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的作用;荧光探针法检测人参皂苷CK对肝癌细胞线粒体膜电位的影响;Western blot实验检测线粒体凋亡蛋白及ERK1/2通路相关蛋白的表达。结果人参皂苷CK能够抑制人肝癌细胞增殖,使肝癌细胞线粒体膜电位下降;Western blot结果显示,与对照组比较,线粒体凋亡相关蛋白Cyt-c、Cleaved Caspase-3表达量增加,Bcl-2/Bax下降;与对照组相比,p-ERK1/2的表达量降低,加入ERK1/2通路抑制剂SCH772984后,p-ERK1/2的表达量增加,Bcl-2/Bax下降。结论人参皂苷CK可以通过调控ERK1/2通路诱导人肝癌细胞线粒体凋亡。

珍珠梅黄酮纳米粒调控STAT3抑制脂多糖诱发肝癌细胞炎性作用的研究

目的探讨珍珠梅黄酮纳米粒(5, 2’,4’-trihydroxy-6,7,5’-trimethoxy flavone nanoparticle, TTF1-NP)抑制脂多糖(Lipopoiysaccharide, LPS)诱发肝癌细胞的炎性作用的药理学机制,为TTF1-NP抗肝癌的研究提供理论依据。方法利用LPS诱发人肝癌HepG2细胞炎性反应;转染siRNA-STAT3特异性地抑制人肝癌HepG2细胞STAT3的表达;insulin激活蛋白质激酶B(protein-serinr-threonine kinases, Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路;Western blot法检测细胞炎症因子及磷酸化STAT3及下游的AKT/mTOR通路关键蛋白的表达。结果 TTF1-NP抑制LPS诱发人肝癌HepG2细胞的p-STAT3蛋白的表达;TTF1-NP抑制转染siRNA-STAT3的人肝癌HepG2细胞p-STAT3及p-AKT和p-mTOR蛋白表达,但与si-STAT3组相比,差异不显著;insulin促进转染siRNA-STAT3的人肝癌HepG2细胞p-AKT和p-mTOR及IL-6和IL-8表达,TTF1-NP抑制以上作用。结论 TTF1-NP通过调节STAT3抑制LPS诱导的人肝癌HepG2细胞的炎性反应,这种作用与STAT3介导的AKT/mTOR通路的应答有关。