铁皮石斛糖蛋白对皮肤炎症期的调控作用及机制

研究铁皮石斛糖蛋白(DOKMG)对皮肤炎症期的调控作用及机制。本文以巨噬细胞株RAW264.7为研究对象,用铁皮石斛糖蛋白刺激巨噬细胞并做时间和浓度依赖性分析,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测炎症因子白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)以及炎症相关的环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)和一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,iNOS)的mRNA表达水平。应用酶联免疫吸附反应(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测巨噬细胞培养上清中炎症因子的表达。采用蛋白印迹(Western blot,WB)分析铁皮石斛糖蛋白对炎症因子蛋白水平表达及核转录因子-κB(Nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路的影响。结果显示,铁皮石斛糖蛋白能在24 h后极显著促进IL-1,IL-6,TNF-α的基因表达(P<0.001),当浓度达到100μg/mL时促进最为明显,IL-1β相比对照组增加了10.09倍,IL-6增加了20.45倍,TNF-α增加了0.95倍。DOKMG对细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-1β有促进作用,且成剂量依赖性,当浓度为100μg/mL时,两者分泌量分别由0.52μg/mL、118.52 pg/mL上升至1.99μg/mL、272.81 pg/mL。DOKMG能显著促进炎症因子蛋白的表达及NF-κB信号通路相关蛋白的磷酸化(P<0.05)。上述结果表明,铁皮石斛糖蛋白通过调节细胞炎症反应来促进伤口愈合,其部分机制与NF-κB信号通路激活有关。

响应面法优化辣木叶蛋白提取工艺及凝集活性研究

辣木叶中含有丰富的蛋白质,但溶解性较差,本研究采用盐析法提取新鲜辣木叶中的蛋白并对其活性进行研究。以新鲜辣木叶为原料,分析提取时间、硫酸铵饱和度、料液比3个因素对蛋白得率的影响,在单因素实验的基础上,通过响应面优化盐析法提取辣木叶蛋白的最佳工艺条件。结果表明:对蛋白得率的影响依次为提取时间>硫酸铵饱和度>料液比,确定的最佳工艺条件为提取时间7 h、硫酸铵饱和度71%、料液比1:9 g/mL,在此条件下辣木叶蛋白得率为13.49 mg/g,与预测结果13.76 mg/g基本相符。辣木叶蛋白的凝集效价为2^(8),D(+)无水葡萄糖是辣木凝集素专一性抑制糖,可以较好地抑制兔红细胞和辣木叶蛋白凝集反应。