建立CRISPR/Cas9慢病毒系统高效敲除人源AIP1基因

旨在构建AIP1基因CRISPR/Cas9敲除体系,获得高效、稳定、永久性AIP1敲除的人胚肾细胞株(293T)。针对AIP1的外显子设计3个20 bp的sg RNA(sp1、sp2和sp3)。与PX458载体连接,构建PX458-sg RNA敲除表达载体。T7E1实验评估敲除效率。将敲除效率最高的sg RNA与lenti CRISPRv2慢病毒载体连接,构建lenti CRISPRv2-sg RNA敲除表达载体,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中,收集病毒上清液转染293T细胞。对敲除成功的293T细胞通过有限稀释法构建敲除AIP1基因的稳定细胞株。Western blot测定转染后293T细胞中AIP1蛋白的表达量。结果显示,测序证实AIP1的3个靶序列分别正确插入PX458表达载体中,T7E1实验证实AIP1sg RNAsp2靶向敲除效率最高;成功构建lenti CRISPRv2-sg RNAsp2 AIP1敲除表达载体,并包装病毒,感染293T细胞;Western blot证实获得稳定的AIP1基因表达缺失的293T细胞株。建立了能稳定敲除AIP1基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统,成功获得AIP1敲除的293T稳定细胞株。

深部热疗联合化疗在晚期小细胞肺癌中的疗效观察

目的探讨深部热疗结合化疗在晚期小细胞肺癌中的临床效果。方法将80例晚期小细胞肺癌患者随机平均分成治疗组和对照组,每组各40例。2组患者均采用依托泊苷联合顺铂常规化疗治疗,治疗组患者在化疗同时给予肺部原发病灶深部热疗;比较6周期后两组患者的缓解率、无进展生存期、体能变化及不良反应。结果治疗组患者的缓解率为85.0%,对照组患者的缓解率为67.5%,治疗组缓解率显著高于对照组(P<0.05);治疗组的无进展生存期明显高于对照组(P<0.05);治疗组KPS评分较化疗前明显增加(P<0.05),对照组KPS评分较化疗前比较差异无统计学意义;2组患者的恶心、呕吐、及骨髓抑制程度明显低于对照组,但均无统计学意义(P>0.05)。结论晚期小细胞肺癌患者在化疗的同时联合深部热疗可显著提高患者的化疗疗效,延长患者生存时间,减轻患者化疗的不良反应,提高患者生存质量。

土贝母苷甲对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨土贝母苷甲对人肺腺癌细胞(A549)增殖及凋亡的影响。方法应用MTS法检测土贝母苷甲不同浓度、不同时间对A549细胞增殖的影响;使用1μg/mL土贝母苷甲处理A549细胞48 h作为处理组,对照组加入培养基培养48h;使用流式细胞仪分别检测两组细胞的周期分布及细胞凋亡率;并使用Western blot检测两组细胞凋亡相关通路Caspase蛋白的表达。结果MTS实验结果显示各组细胞随着土贝母苷甲浓度的增加A549细胞的增殖速度降低,并在培养48h后,各组细胞的增殖能力出现显著差异(P<0.05);流式细胞仪检测土贝母苷甲处理A549细胞48 h后比对照组细胞凋亡率显著增高(P<0.05);处理组A549细胞更多的阻滞于G0/G1期(P<0.05);Western blot检测各组细胞Caspase通路蛋白表达显示处理组比对照组Caspase-9、Caspase-3和Parp蛋白表达增加(P<0.05)。结论土贝母苷甲可抑制人肺腺癌细胞增殖,并诱导人肺腺癌细胞凋亡,具有一定的抗肿瘤作用,为中医药土贝母在临床应用中奠定基础。

中医药治疗骨转移癌痛的进展

疼痛是肿瘤骨转移患者难以忍受的症状之一,具有顽固性、持续性、进行性加重等特点,发病机理尚不明确。西医治疗方案以三阶梯止痛药为主,联合放化疗等个性化治疗;中医治疗包括中药口服、中药外敷、针灸、穴位贴敷、中药注射、埋线等多种方式,起到活血化瘀止痛等功效。且中医治疗价廉惠民、无成瘾性、操作便捷、毒副反应少,因此成为骨转移癌痛治疗的研究热点。中西医联合用药可增强止痛效果,实现优势互补,且作用持久,明显提升患者生活质量。本文综述了骨转移癌痛的中医治疗进展,为后续研究提供参考。

清热凉血解毒方灌肠治疗宫颈癌放疗所致放射性肠炎急性期的临床观察

目的清热凉血解毒方灌肠治疗宫颈癌放疗所致放射性肠炎急性期的临床观察。方法选取2018年10月—2019年10月期间在唐都医院中西医结合肿瘤科就诊宫颈癌中晚期需放疗宫颈病灶患者64例,按照随机数字表法分为对照组和治疗组,每组各32例,两组患者均给予蒙脱石散与双歧三联活菌口服,对照组给予康复新液灌肠,治疗组给予清热凉血解毒方灌肠。两组患者连续治疗15 d后,观察比较症状缓解率、放射性损伤分级、中医证候量表评分、血清超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)及不良反应情况。结果治疗后治疗组患者缓解率为93.75%(30/32)明显高于对照组缓解率87.50%(28/32),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组放射性损伤0级与1级患者例数明显多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后中医证候评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后SOD水平均较治疗前升高,IL-6、NO水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组SOD水平明显高于对照组,IL-6、NO水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者口服思密达及益生菌及灌肠未出现不良反应,治疗前后生命体征、二便常规、肝肾功能等未出现变化。结论清热凉血解毒方灌肠治疗宫颈癌放疗所致放射性肠炎急性期具有良好的疗效。

百合地黄汤加减对非小细胞肺癌化疗及PG-SGA水平的影响

目的:研究百合地黄汤加减对非小细胞肺癌化疗及肿瘤患者主观整体营养状况评估水平的影响。方法:选取2017年5月至2020年5月我院收治的98例非小细胞肺癌患者作为研究对象,采用随机数字表法随机分为试验组(n=50)和对照组(n=48),对照组采用单纯非小细胞肺癌化疗方案进行治疗,试验组在对照组基础上采用百合地黄汤加减进行治疗。对比2组患者治疗后的临床疗效,对比2组患者治疗前后3个月中医证候积分、肿瘤患者主观整体营养状况评估量表(PG-SGA)营养评分,以及在治疗3个月期间出现的毒副反应。结果:试验组总有效率62.00%(31/50),高于对照组总有效率41.67%(20/48),差异有显著性(P<0.05);治疗3个月后,2组患者中医证候积分均显著降低,且试验组中医证候积分明显更低(P<0.05);治疗3个月后,2组患者PG-SGA均降低,且相比于对照组,试验组PG-SGA评分明显更低(P<0.05),提示肿瘤患者营养得到更好改善;相比于对照组毒副反应发生率54.17%(26/48),试验组毒副反应发生率34.00%(17/50)明显更低(P<0.05)。结论:百合地黄汤加减能够提高非小细胞肺癌化疗的治疗效果,并提高中医证候积分,改善肿瘤患者PG-SGA水平及患者的营养不良状态,降低毒副反应。

养阴清热解毒方治疗急性放射性食管炎的临床观察

目的探讨养阴清热解毒方在治疗急性放射性食管炎(acute radiation esophagitis,ARE)中的应用。方法选取2019年1月—2019年12月期间在空军军医大学唐都医院住院的食管鳞癌患者60例,依据患者的就诊顺序随机将其分为联合治疗组和对照组,每组各30例。对照组予以西医常规治疗,联合治疗组在对照组西医常规治疗基础上予以养阴清热解毒方治疗,并对两组患者临床疗效、急性放射性食管炎的发生情况及程度差异、炎性因子白介素-8(Interleukin 8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平的变化情况进行观察比较。结果治疗后联合治疗组ARE发生率为86.67%(26/30),对照组ARE发生率为96.67%(29/30),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后联合治疗组临床总有效率96.67%(29/30)高于对照组73.33%(22/30),两组比较差异有统计学意义(P<0.05),说明养阴清热解毒方能提高临床治疗ARE的疗效。两组患者治疗后炎性因子TGF-β1、TNF-α、IL-8水平均优于治疗前(P<0.05),且治疗后联合治疗组炎性因子TGF-β1、TNF-α、IL-8水平优于对照组(P<0.05),说明养阴清热解毒方可降低炎性反应。结论养阴清热解毒方能有效减低急性放射性食管炎的发生率,减轻患者炎性反应。

针刺联合穴位贴敷治疗中重度癌性疼痛临床研究

目的观察针刺联合穴位贴敷治疗中重度癌性疼痛的临床疗效,以期为临床治疗中重度癌性疼痛提供有效治法。方法将60例中重度癌痛病患者采用随机对照分组分为治疗组30例和对照组30例,对照组按照癌痛三阶梯止痛治疗给予奥施康定口服,治疗组在对照组基础上采用针刺“足三里、合谷、昆仑”结合阿是穴穴位敷贴治疗,连续治疗7 d,观察治疗前后两组KPS(功能状态)、NRS(疼痛评分)、SDS(抑郁评分)、SAS(焦虑评分)、爆发痛发生频次、炎性因子(前列腺素E-2、白介素-6、肿瘤生长因子、缓激肽)、胃肠道不良反应等。结果①两组治疗后疼痛缓解率比较,治疗组显效率为70.0%,对照组显效率为36.6%,显效率具有统计学意义(P<0.05);②治疗后两组便秘发生情况未见明显差异(P>0.05),与对照组相比,治疗组恶心,呕吐的发生率低,具有统计学意义(P<0.05);③治疗后两组KPS评分、SDS、SAS、平均爆发痛次数均较治疗前改善,两组对比具有统计学意义(P<0.05);④两组治疗后前列腺素E-2、白介素-6、肿瘤生长因子、缓激肽水平值低于对照组,两组对比具有统计学意义(P<0.05)。结论针刺联合穴位贴敷治疗中重度癌性疼痛确有良好疗效,值得临床应用推广与研究探讨。

止痛散结贴外用联合奥施康定治疗骨转移中重度疼痛临床研究

目的观察止痛散结贴外用联合奥施康定治疗骨转移中重度疼痛的临床观察,以期为临床治疗骨转移中重度疼痛提供有效治法。方法将60例骨转移中重度疼痛根据随机数字表法分为治疗组30例和对照组30例,对照组给与癌痛三阶梯治疗进行奥施康定滴定与治疗,治疗组在对照组基础上给止痛散结贴外用,连续治疗5天,观察两组疼痛缓解率、NRS(疼痛评分)、血清炎性因子(前列腺素E 2、β-内啡肽、缓激肽)、不良反应等。结果①两组治疗后治疗组总有效率为90.0%,显效率为66.7%,对照组有效率为83.3%,显效率为46.6%,两组治疗在总缓解率方面对比具有统计学意义(P<0.05);②两组治疗后两组治疗前后前列腺素E 2(PGE 2)、β-内啡肽(β-EP)、缓激肽水平、NRS变化比较,两组对比具有统计学意义(P<0.05);③两组在治疗后不良反应方面,两组对比具有统计学意义(P<0.05)。结论止痛散结贴外用联合奥施康定治疗骨转移中重度疼痛确有良好疗效,值得临床应用推广与研究探讨。

应用慢病毒系统建立高表达FTO蛋白的SV-HUC-1稳定细胞株

目的:构建慢病毒转染的肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)高表达体系,并建立稳定、高效、长久高表达FTO的人永生化膀胱移行上皮SV-HUC-1稳定细胞株,为研究FTO基因在膀胱癌发生及进展中的作用打下基础。方法:从SV-HUC-1细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA。以cDNA为模板应用PCR技术扩增FTO编码基因,将其连接入PLEX-puro表达载体(PLEX-puro-FTO),并转化至感受态大肠杆菌JM109中。对氨苄青霉素和博来霉素双重筛选的阳性克隆进行测序,鉴定插入正确后抽提质粒,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SV-HUC-1细胞,48小时后加入终浓度1μg/ml的嘌呤霉素进行药物筛选,10天后得到稳定细胞株,用Western blot测定转染后SV-HUC-1细胞中FTO蛋白的表达水平。结果:测序结果证实目的片断正确插入PLEX表达载体中,成功构建了PLEX-puro-FTO高表达载体;稳定转染高表达载体SV-HUC-1细胞的FTO蛋白表达显著高于转染空载体细胞。结论:成功构建了PLEX-puroFTO重组慢病毒质粒,并获得FTO蛋白高表达的SV-HUC-1稳定细胞株。