多重实时荧光定量聚合酶链式反应在芝麻酱掺假鉴别中的应用

目的研究基于分子生物学技术,建立多重实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测芝麻酱中的植物源性成分,实现芝麻酱的快速掺假鉴别,突破单标准单物种检测的局限性。方法该研究以芝麻2S albumim mRNA基因、花生Ara b2基因、大豆Lectin基因、玉米adh1基因设计特异性引物和探针,优化反应体系,建立多重实时荧光定量PCR技术检测芝麻酱中的芝麻源性成分、花生源性成分、大豆源性成分、玉米源性成分,并应用于市售的芝麻酱样本检测分析。结果该方法高效低成本,特异性好,对小米、绿豆等10种非目标源性成分无特异性扩增;对芝麻源性成分、花生源性成分、大豆源性成分、玉米源性成分的最低检出限为100 pg/μL,具有较高的灵敏度;应用建立的方法,对市售21份芝麻酱样本进行检测分析,检测结果与标签标注不符合的有4份,标签标注符合率为80.95%,与参比方法检测结果一致。结论建立的多重实时荧光定量PCR技术对加工成品的检测具有较好的适用性,为芝麻酱的掺假鉴别提供了一种新的分子生物学方法。

椰毒假单胞菌酵米面亚种灭活条件研究

目的:降低湿米粉中椰毒假单胞菌酵米面亚种污染风险,防止湿米粉米酵菌酸中毒事件发生。方法:采用加热和紫外的方法对椰毒假单胞菌酵米面亚种的灭活条件进行研究。结果:加热和紫外均可以杀灭椰毒假单胞菌酵米面亚种。结论:湿米粉企业可以使用加热或紫外的方法来防止产品被椰毒假单胞菌酵米面亚种污染。

食品中霉菌计数实验室内部比对的实验方法与结果分析

为了对实验室食品霉菌计数检测人员检测过程与结果进行人员比对,确保实验室保持良好的检测水平,提升结果的可靠性。本文根据内部质量控制的技术要求,按照食品安全国家标准GB 4789.15—2016《食品微生物学检验霉菌和酵母计数》对质控样品进行检测,对2名实验人员的实验结果进行分析,对其进行能力评定。结果显示,2名实验人员的实验结果分别为6 CFU/mL和8 CFU/mL,均在特性区间内(2~22 CFU/mL)。人员之间的复现性为0.13,小于复现性限R=0.45,满足标准要求。由此得出,定期进行人员比对,是确保实验室质量管理体系持续改进的有效措施之一,要将质量控制落实到整个检测活动中,保证工作质量水平逐步提高。

不同食品标准中沙门氏菌分类方案比较

沙门氏菌是最常见的食源性致病微生物之一。目前国内的部分出版物存在对于沙门氏菌的定义分类紊乱以及学名应用不规范的情况。本文回顾了沙门氏菌在不同时期的定义与分类方法的变化过程,对沙门氏菌在不同食品标准中的分类进行阐述,以期为食品检验和科研中沙门氏菌的相关应用提供参考依据。

平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较研究

目的找出平板倾注法与纸片法2种检测食品菌落总数方法之间的相关性,判断2种方法有无显著性差异。方法样品处理按GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》进行处理,平板倾注法取样品稀释液接种平皿倾注琼脂、纸片法取样品稀释液接种细菌计数纸片。用上述2种方法对市场上随机抽取30份饼干及糕点和2份质控样品进行菌落总数检测,最后做统计学分析(t-test)。结果倾注法与纸片法检测结果无显著差异(P>0.05)且对不同菌落数区间(0~100CFU/g、100~1000CFU/g、1000~10000 CFU/g)都适用。2份质控样品评价结果为满意。结论纸片法可用于食品菌落总数的快速检测,缩短检测流程,提高工作效率。

微生物检验实验室文件控制研究

目的深入调研文件控制的管理现状。方法分析实验室在文件的理解、获取和执行方面存在的问题,结合工作实际,查阅文件管理方面的文献,采取分类管理、文件跟踪等措施,增强文件的执行力。结果分析对比现有标准对于文件控制的相关条款,总结了相关著作对于文件控制的理解和做法;结合档案管理的理论,对于文件控制提出一种设想。结论提出了使用分类标记、跟踪监督促的方法促进文件控制的管理工作。

双重实时荧光PCR法鉴别大西洋鲑鱼和虹鳟鱼

目的建立双重实时荧光PCR法同时鉴别大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的检测方法。方法在现有单一物种检测方法的基础上,应用多重实时荧光PCR检测技术对大西洋鲑鱼和虹鳟鱼同时进行检测,并对PCR反应时间和反应温度进行优化。结果该方法通过1管PCR反应实现对大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的同时鉴别,反应时间缩短至1 h以内,方法的特异性好,灵敏度可达到0.1%(DNA质量分数)。结论该方法检测效果好、时间短、成本低,可为监管部门解决三文鱼市场监管问题提供技术手段。

MPN法检验大肠菌群的实验分析

为比较多管稀释方法中5管法和6管法检验大肠菌群的差异,本文分别使用5管法和6管法对不同浓度、不同菌株的阳性污染水样进行检测,并对MPN结果进行统计和分析。在高浓度实验中,所有实验管均能够表现出产酸产气的典型大肠菌群生化特性。在中浓度实验中,结合多个平行试验结果,5管法和6管法的数据离散程度未表现出较大差异。在低浓度试验中,6管法比5管法表现出更高的灵敏度;6管法比5管法表现出更高的灵敏度、精确度和准确度。

LAMP和MALDI-TOF-MS技术在检测食品中沙门氏菌方面的应用

当前沙门氏菌国家标准检测方法(国标法)不能满足食品安全监管高效性的需求。为提升食品中沙门氏菌检测效率,本文分别采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对2份未知样品A和B进行沙门氏菌检验,通过对比国标法的检测结果,评价每种检测方法的效率和准确性。结果发现,3种方法对2份样品的检验结果均为沙门氏菌阳性,说明3种检验方法均具有较好的准确性、可靠性和一致性。其中,利用国标法分离筛选出8株沙门氏菌,经血清型鉴定为肠炎沙门氏菌;MALDI-TOF-MS法鉴定为肠炎沙门氏菌种肠炎亚种I,并明确了菌株的特征性离子峰;LAMP法无法定位具体沙门氏菌种。3种方法中,LAMP操作最简单,所用时间最短(2 d),其次是MALDI-TOF-MS方法(4~5 d),国标方法所用时间最长(5~7 d)。结果表明,在检测大批量沙门氏菌样品或突发的应急检验时,采用LAMP法快速筛选、国标法验证、MALDI-TOF-MS法辅助检测的策略,可提高样品检测的准确性和效率。本文的研究结果可以为大批量样本沙门氏菌检测规程的建立提供重要技术参考。

饮用水中肠球菌筛选培养基特异性的比较及检测标准评价

本文以肠球菌属中具有代表性的4个种共10株菌为培养对象,基于涂布法和滤膜法研究阳性肠球菌菌株在常用肠球菌筛选培养基中的回收率,发现KF链球菌琼脂对阳性肠球菌菌株的生长稳定性最好,其次是胆汁—七叶苷—叠氮化钠琼脂,mEI琼脂适宜采用滤膜法,Slanetz和Bartley氏培养基适宜采用涂布法。采用不同肠球菌标准对自然水样中的肠球菌进行检测,计算肠球菌的假阳性率,发现GB 8538-2016和SN/T 1933.2-2007准确度较高,ISO 7899-2000假阳性较高。利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,发现假阳性菌株主要为嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌、放射根瘤菌等。结果表明,GB 8538-2016中的筛选培养基更适合肠球菌的快速筛选,其标准方法的检测准确度更高。

植物类过敏原多重核酸检测技术研究进展

本文针对植物类过敏食品安全问题,综述了麸质类、花生类、大豆类和坚果类等4类植物过敏原成分核酸检测技术研究情况,并介绍了多重PCR技术、基因芯片技术、宏基因测序技术的应用,以期为植物类食品过敏原检测技术开发及食品安全风险防控提供参考。

广州市售熟食、凉拌菜中沙门氏菌污染风险和耐药性、毒力性研究

研究旨在评估广州市售熟食和凉拌菜中沙门氏菌的污染风险及耐药和毒力情况。选取2020年5~7月广州市大型超市、农贸市场、小餐饮店、小摊贩共20处地点,采集熟食和凉拌菜共计272份,依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行沙门氏菌检验,开展血清分型,采用微生物全自动化鉴定及耐药性分析仪VITEK检测耐药性,采用PCR检测毒力基因。结果显示,271份样品中沙门氏菌检出率为3.3%(9/271),其中熟食类检出率为4.0%(8/199),凉拌菜检出率为1.4%(1/72)。在各场所中,小餐饮店检出率为10.6%(7/66),农贸市场检出率为2.2%(2/89),大型超市检出率为0%(0/96),小摊贩检出率为0%(0/20)。9株沙门氏菌血清型鉴定结果为S.Derby德尔卑血清型(4株)、S.Nchanga恩昌家血清型(4株)、S.Rissen里森血清型(1株)。20种抗生素耐药性分析显示9株沙门氏菌耐药谱为二代头孢类和氨基糖苷类抗生素。12种毒力基因检测研究发现来自小餐饮店手撕鸡样品检出的沙门氏菌携带9种毒力因子。广州市售熟食和凉拌菜中沙门氏菌检出率处在范围内,但风险仍值得进一步关注,尤其是小餐饮店的食品安全情况,研究检出带有质粒毒力基因及存在多重耐药的沙门氏菌,熟食类沙门氏菌风险需要高度重视。