人乳头瘤病毒16型E6和E7细胞毒性T淋巴细胞表位的预测与筛选

目的以人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7癌蛋白为靶抗原,通过生物信息学方法及小鼠体内实验,筛选出能被人与鼠主要组织相容性复合体(MHC)共呈递的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)优势表位。方法在美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站上获取HPV16 E6和E7的参考蛋白序列,通过免疫表位数据库(IEDB)网站中的MHC-Ⅰ加工和MHC-Ⅰ结合方法,预测出人类白细胞抗原(HLA)-A*02:01、HLA-A*11:01、HLA-A*24:02限制性和C57BL/6小鼠H-2b限制性的CTL表位,根据评分筛选出两者共同呈递的CTL表位。同时,构建表达HPV16 E6和E7的DNA疫苗(pVAX1-E6E7Com),免疫小鼠后分离脾淋巴细胞,以预测得到的CTL表位作为抗原,与小鼠脾淋巴细胞共培养40 h后,通过酶联免疫斑点法来评估各CTL表位诱导的特异性T细胞免疫应答的能力。所有实验数据均通过单因素方差分析和Dunnett t检验进行组间比较。结果预测筛选获得10条人鼠共呈递的抗原肽。酶联免疫斑点法检测结果表明,实验组的每种表位均能诱导小鼠淋巴细胞产生特异性免疫应答,与阳性参考肽(E7-^(49)RAHYNIVTF^(57))相比,实验组中每种表位差异均无统计学意义(均P>0.05),其中E6-^(38)VYCKQQLL^(45)(175.60±52.88)、E6-^(49)VYDFAFRDL^(57)(202.20±108.50)、E6-^(86)YCYSLYGTTL^(95)(157.00±44.46)和E7-^(77)RTLEDLLMGTL^(87)(162.20±49.35)激发的特异性斑点数比阳性参考肽E7-^(49)RAHYNIVTF^(57)(156.20±97.40)的斑点数量多。结论通过这种生物信息学方法预测和筛选得到的10个CTL表位均具有一定的免疫原性,可作为HPV16型治疗性疫苗的优势候选表位。