特异性下调葡萄糖调节蛋白78表达对肝细胞癌侵袭和转移能力的影响

为了研究特异性下调葡萄糖调节蛋白(Grp)78对肝细胞癌侵袭和转移能力的影响。通过小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调人肝细胞癌细胞株BEL7402中Grp78的表达,并应用Transwell法和划痕法对肝细胞癌侵袭、转移能力的改变进行分析,应用免疫沉淀技术和GST-pulldown技术分别对黏着斑激酶(FAK)的磷酸化水平和小GTPase RhoA的活性进行研究,应用免疫印迹技术检测E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达。结果发现,Transwell实验和划痕实验结果显示特异性下调Grp78表达可以抑制肝细胞癌的侵袭和转移,免疫沉淀结果显示特异性下调Grp78表达可以降低FAK的磷酸化水平,GST-pulldown实验结果表明特异性下调Grp78表达可以上调RhoA的活性。免疫印迹实验结果表明特异性下调Grp78可以下调N-钙黏着蛋白、波形蛋白的表达,上调E-钙黏着蛋白的表达。结果表明特异性下调Grp78在体外可以抑制肝细胞癌的侵袭和转移,这种抑制作用是通过FAK脱磷酸化和抑制肿瘤的上皮-间叶转化实现的。

肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化,免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50μg/L)可以促进FAKY397位点的磷酸化,对FAK的表达没有影响.应用PI3K抑制物LY294002处理后,FAKY397的磷酸化水平显著降低.HGF处理后,FAK主要位于细胞边缘,呈簇状分布,应用PI3K抑制物,FAK在细胞内弥散分布.HGF处理后,Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加,而经LY294002处理后,Src激酶与SrcY416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中,HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.

非折叠蛋白质应答对人胚肾细胞293A迁移特性的影响

为了研究非折叠蛋白质应答对器官发生的影响 ,应用衣霉素诱导非折叠蛋白质应答并观察其对人胚肾细胞系 2 93A迁移特性的影响。在实验中 ,应用划痕法对细胞迁移进行观察 ,并应用细胞黏附实验、荧光染色技术、扫描电镜技术及免疫印迹实验分别对细胞黏附特性、微管及微丝、细胞表面边缘的突起及小分子GTPase的表达水平进行研究。结果表明 ,非折叠蛋白质应答可以抑制细胞迁移 ,进一步的研究发现 ,非折叠蛋白质应答可以降低细胞的黏附能力、引起细胞骨架的重排、抑制伪足的形成并降低RhoA的表达水平。这提示 ,非折叠蛋白质应答可能通过抑制应激细胞的迁移为应激细胞的功能修复赢得了时间 。

葡萄糖调节蛋白78反义核酸对HEK293细胞粘附和迁移的影响

为了研究葡萄糖调节蛋白78(Grp78)对细胞迁移和粘附的影响,应用Grp78反义寡核苷酸(Grp78AS-ODN)处理人胚肾细胞HEK293,对细胞的迁移和粘附特性进行分析。结果发现应用Grp78反义核酸处理细胞可以抑制HEK293细胞的迁移,促进细胞与底物间的粘附。进一步研究发现,应用Grp78反义核酸处理细胞可以促进粘着斑的形成,并引起小GTPaseRhoA在细胞膜和细胞浆中的重新分布。上述结果表明,特异性下调Grp78的表达可以抑制细胞迁移,促进细胞与底物间的粘附。

特异性下调葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌粘附特性和细胞外基质降解的影响

我们以前的研究表明特异性下调葡萄糖调节蛋白78(Grp78)可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移。为了进一步研究该抑制作用的分子机制,我们应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调肝细胞癌细胞系BEL7402中Grp78的表达,并对细胞的粘附、伸展和细胞外基质降解情况进行研究,结果发现特异性下调Grp78可以促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展。我们的研究还显示特异性下调Grp78的表达可以抑制基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达及分泌,这些说明特异性下调Grp78可以抑制细胞外基质的降解。对机制的研究发现特异性下调Grp78表达可以抑制c-jun的磷酸化。这些结果表明特异性下调Grp78可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移,这种抑制作用可能是通过促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展和细胞外基质的降解实现的。

EGCG对中波紫外线诱导HaCaT细胞p53基因和蛋白表达的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)照射诱导永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53 mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,并以200μg/mL EGCG处理照射后的HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测各处理条件下p53 mRNA和/或p53蛋白的表达水平。结果:30 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53 mR-NA和p53蛋白表达逐渐增加,4 h达到峰值,4 h后随照射剂量增加而增加,24 h后有所恢复;加入EGCG可下调UVB诱导的表达作用。结论:UVB照射对HaCaT细胞p53 mRNA和p53蛋白的诱导表达有时效性与量效性,EGCG可下调UVB照射的这种诱导作用。

Grp78表达对人肝细胞癌细胞外信号调节激酶1/2活性和表达的影响

目的通过检测葡萄糖调节蛋白78(Grp78)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2在肝细胞癌手术切除组织中的表达,并在SMMC-7721细胞中干预Grp78的表达,探讨Grp78对ERK1/2激酶的调控作用。方法应用免疫组织化学方法(IHC)和免疫印迹法检测47例肝细胞癌手术切除组织样本中Grp78,ERK1/2的表达和ERK1/2磷酸化水平;在高表达Grp78的肝细胞癌细胞系SMMC-7721中,通过用小RNA干扰Grp78的表达来探讨Grp78表达水平,改变对ERK1/2活性及表达的影响。结果在肝细胞癌组织样本中,Grp78的表达情况与ERK1/2和磷酸化ERK1/2的表达明显呈正相关。在SMMC-7721细胞中Grp78高表达促进ERK1/2的磷酸化,应用RNA干扰特异性下调Grp78高表达细胞中Grp78水平可以抑制ERK1/2的磷酸化。结论Grp78参与调解ERK1/2信号通路,并且在肝细胞癌临床治疗方面可能成为潜在的治疗靶点。

卵巢癌p16基因的纯合性缺失、突变及表达异常的研究

目的 :研究p16基因的纯合性缺失、突变及表达异常与卵巢癌的发生是否存在相关关系。方法 :采用PCR SSCP检测卵巢癌 p16基因的纯合性缺失和突变 ;采用RP PCR定性及半定量分析p16基因 ;采用免疫组化技术检测 p16蛋白。 结果 :3 2例卵巢癌中检测到 1例外显子 1突变 ,未检测到 p16基因的纯合性缺失 ;RT PCR分析卵巢癌中p16基因mRNA均有表达 ,半定量分析卵巢癌与正常卵巢组织中 p16基因mRNA表达水平无差别 ;免疫组化检测 9例卵巢癌中的 p16蛋白为阴性 (2 8.2 % )。 结论 :卵巢癌的发生与 p16基因的纯合性缺失和突变无相关关系 。

大学人文管理刍议

人文管理既是大学管理的潮流和趋势,又是高校各项工作全面发展和维护广大师生员工正当权益的现实需要。当前大学实施人文管理面临的问题有:重制度管理,轻人文管理;缺乏高素质的管理队伍;缺乏合理的管理机制。今后进一步推进大学人文管理,应创设良好的人文氛围;加强管理人员的人文素养;建立科学的人文管理机制。

糖尿病性大疱病一例

糖尿病性大疱病一例苏荣健（南京医科大学第一附属医院皮肤科，南京２１００２９）关键词糖尿病；大疱病糖尿病病人因长期慢性病变导致一系列并发症，其中继发皮肤大疱病者报道较少，我科发现１例，现报告如下。患者，男，７１岁，糖尿病史１０年，予饮食控制或口服“优降...

猪附红细胞体特异性基因的克隆和PCR诊断方法的建立

根据2003年Hoelzle发表的猪附红细胞体的基因组序列(AJ504999)设计一对特异性引物,对病料样品进行PCR扩增并将其产物克隆到pMD18-T载体后测序,结果表明扩增出的片段为603bp,同源性分析表明该序列与参考基因组序列同源性为100%,反映出我国分离株与国外株其基因无差异,特异性和敏感性试验表明,所建立的PCR诊断方法与常见的支原体、细菌及原虫无交叉反应,能检测到猪附红细胞体血液基因组DNA最低量为0.65ng/mL,该方法具有快速、特异、敏感等特点,为猪附红细胞体病的快速诊断及流行病学调查提供了新的手段。

猪CFL2b基因在成肌细胞中的表达及对肌球蛋白重链基因表达的影响

猪CFL2b基因主要在骨骼肌中表达,对肌肉的发育和肌纤维的形成具有一定作用。为了解猪CFL2b基因与肌纤维性状的相关性,利用定向克隆和基因转染技术获得能稳定表达猪CFL2b基因的成肌细胞株,荧光显微镜观察及Western Blotting检测CFL2b基因在成肌细胞中的表达;应用实时定量PCR技术对细胞内肌球蛋白重链基因(MyHC)的表达变化进行检测。结果显示:CFL2b基因对MyHC的表达有明显影响,其中MyHC2x基因和MyHC2b基因的表达明显上调,MyHC1/slow的表达变化不明显。表明CFL2b基因与猪的肌纤维性状密切相关,推测猪CFL2b基因的高表达可能导致猪的不良肉质性状,可以考虑将CFL2b基因作为猪肉质性状的候选基因。

羊附红细胞体巢式PCR检测方法的建立及临床应用

根据GenBank上发表的羊附红细胞体16SrRNA基因序列(登录号AF338268)设计2对引物,用巢式PCR方法扩增16SrRNA的部分序列,将目的片段克隆并测序。测序结果与AF338268相似性达99%以上,只有3bp的差异。该方法与猪附红细胞体、羊肺炎支原体、链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌均无交叉反应,能检测到的最低DNA量为25fg。用于检测的28份临床样本中,23份为阳性。所建立的巢式PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于羊附红细胞体病急性感染和隐性感染的早期诊断,为该病的临床检测、流行病学调查、进出口检疫和实验室研究提供了新的技术手段。

P38和ERK1/2在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨p38(mitogen-activated protein kinase p38,p38)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular reg-ulated kinase 1/2,ERK1/2)在不同分化程度肝细胞癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,以及两者的相关性。方法通过免疫组化(Envision)法,检测52例肝癌组织及l0例癌旁正常肝脏组织中p38和ERK1/2的表达。结果:p38和ERK1/2在肝癌组织中均有表达,与正常组比较差异有显著性,且阳性率的高低与其分化程度有关,p38在肝癌组织中的表达随分化程度的增高阳性率降低(P<0.05);ERK1/2在中、低分化的肝癌组织分别与高分化相比差异具有显著性(P<0.05)。但低分化与中分化的肝癌组织比较虽也有差异但无统计学意义(P>0.05)。癌组织中p38和ERK1/2的表达呈中度正相关(r=0.703,P<0.05)。结论HCC中,p38和ERK1/2表达和活性增加,且存在一定的相关性。

附红细胞体病研究综述

对附红细胞体病(Eperythrozoonosis)的病原形态特征、病原分类、发病机制、流行病学、体外培养、治疗及预防等研究成果进行了综述,以期对该病的病原学及防治研究提供参考。

肝细胞癌组织中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达变化及意义

目的观察肝细胞癌(HCC)中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化EnVision法检测45例HCC患者肿瘤组织及6例癌旁正常肝脏组织中的E-cadherin、N-cadherin和Vimentin。结果与对照组相比,观察组E-cadherin阳性表达率升高,N-cadherin、Vimentin阳性表达率降低(P均<0.05);观察组中高分化者与中分化者及中分化者与低分化者相比,E-cadherin阳性表达率升高,N-cadherin、Vimentin阳性表达率降低(P均<0.05)。HCC组织中E-cadherin、Vim-entin表达呈负相关(r=-0.107,P<0.05);N-cadherin与Vimentin表达呈正相关(r=0.578,P<0.05)。淋巴结转移与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.08,P<0.05);与N-cadherin、Vimentin表达呈正相关(r=0.222、0.282,P均<0.05)。结论 HCC组织N-cadherin、Vimentin表达增高,而E-cadherin表达降低。HCC细胞存在上皮—间叶转化,且与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有关。

川芎嗪对中波紫外线诱导黑素细胞黑素生成的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对不同剂量中波紫外线(UVB)诱导正常人黑素细胞黑素合成的影响,并初步探讨其机理。方法:常规分离培养正常人黑素细胞,分别用30mJ/cm2、90mJ/cm2的UVB照射细胞,然后加入100μg/ml、300μg/ml、600μg/ml的TMP孵育至72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果:30mJ/cm2的UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP能显著抑制该效应,并呈剂量依赖性;90mJ/cm2的UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP则能减轻其细胞毒作用,并也表现为剂量依赖性,以600μg/ml的TMP作用最为显著,差异有统计学意义。结论:TMP不但能抑制低剂量UVB照射诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,而且还能减轻高剂量UVB照射对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。

人外周血白细胞端粒DNA长度与年龄的定量关系

目的探讨人外周血白细胞端粒DNA长度变化规律及其与年龄的关系,为法医学推断年龄提供理论依据。方法抽取西藏那曲地区0-81岁健康人外周血样本105例,其中男性53例,女性52例,采用Southern杂交法检测其端粒限制性片断平均长度。各年龄组性别差异作t检验,端粒长度与年龄的关系作相关及回归分析。结果人外周血白细胞端粒长度随年龄增长逐渐缩短,且存在性别差异;得到推断年龄回归方程：Y=-16.539X＋236.287±9.832。结论人外周血白细胞端粒DNA长度与年龄存在明显相关性,为法医学在分子水平上推断个体年龄提供了可能。

羊附红细胞体小鼠模型的建立

[目的]用人工感染的方法构建羊附红细胞体小鼠模型,并对其进行鉴定。[方法]将注射地塞米松的昆明小鼠以腹腔注射方式人工感染羊附红细胞体,通过镜检、巢式PCR检测、临床症状观察、剖检及病理形态学观察对感染情况进行鉴定。[结果]羊附红细胞体小鼠模型已成功建立。[结论]可以用昆明小鼠建立羊附红细胞体实验动物模型,不仅有助于该病的诊断,而且为羊附红细胞体流行病学、致病力、免疫学以及有效药物筛选等方面的研究提供了一种合适的动物模型。