细粒棘球绦虫EgM123基因的原核表达与免疫原性检测

为了验证EgM123表达蛋白的免疫原性功能,建立犬细粒棘球绦虫EgM123基因的原核表达和蛋白纯化体系,为EgM123蛋白单克隆抗体制备与基因重组疫苗的研制提供研究基础。本试验通过构建EgM123基因原核蛋白表达载体及其蛋白表达条件优化、利用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化、SDS-PAGE(聚丙烯酰氨凝胶电泳)和Western blotting(蛋白质印迹)试验对表达蛋白的分子量和免疫原性进行检测,并通过间接酶联免疫吸附(ELISA)方法对所表达的EgM123蛋白的抗原功能进行验证。本试验通过菌液聚合酶链式反应(PCR)扩增和双酶切验证成功构建EgM123基因原核蛋白表达载体;优化出最佳诱导条件为37℃、表达时间为7h下表达量最高;Western blotting显示其在28KDa处均有特异性条带;ELISA显示纯化后的蛋白能很好的与EgM123多克隆抗体结合。上述结果表明EgM123表达蛋白极具免疫原性,可用于免疫BALB/c小鼠制备EgM123单克隆抗体。

PRRSV新疆分离株的ORF5序列分析与同源性比较

采用RT—PCR技术，分别对PRRSV新疆分离株XJ—a，XJ—b，XJ—C的ORF5片段的ORF5基因进行扩增，获得长度为603bp的特异性目片段。ORF5片段序列分析表明，新疆3个分离株的ORF5基因与欧洲型PRRSV毒株序列核苷酸的同源性为56．1％～56．4％，与标准美洲型PRRSV毒株序列的核苷酸同源性达到86．6％～87．2％，与国内部分省市流行株的同源性在96．0％～99．2％。PRRSV新疆分离株属于北美洲型PRRSV的变异毒株，属同一亚型，毒株间也存在一定的差异，具有高度致病性的生物学特征。

新疆规模奶牛场高发疫病的流行病学调查

为了查明新疆规模化奶牛场高发疫病的流行现状,本研究采用流行病学调查问卷和血清学检测方法对规模化奶牛场的疫病发生、危害和技术认知情况进行调查。调查结果表明,犊牛肺炎、腹泻,成母牛流产、产死胎等繁殖障碍发病率较高;未免疫牛群中奶牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻、牛呼吸道合胞体病毒病、副流感病毒病、牛支原体感染等疫病的感染率较高。为了给消费者提供一个安全健康的奶源,必须加强上述疫病的监测及实验室诊断工作,制定一套针对性强、科学有效的疫病防控措施。

猪伪狂犬、猪链球菌、猪副猪嗜血杆菌病混合感染的诊治

1发病情况 本地某规模化养猪场在2009年10月,有部分仔猪发生以发烧、呼吸困难、食欲减退、腹泻、消瘦、关节肿胀、跛行、神经症状为特征的疫情。发病前该猪场注射过猪伪狂犬gE基因缺失苗,怀疑是猪瘟或蓝耳病,紧急接种猪瘟、蓝耳病疫苗,仍不见好转,后又使用抗生素治疗,有个别猪病情好转,

规模化羊场动物疫病防控保健程序评估

随着新疆兵团各个团场养羊业的集约化、规模化不断提升,羊的各种疾病也在不断发生。本文通过对102团规模化羊场开展疫病调查,发现羊场疫病呈现混合感染、隐性感染等特点,介于上述特点,制定相关动物疫病防控保健程序,综合评估其规模化羊场疫病防控保健的科学性、合理性,并提出合理化意见及建议。

牛巴贝斯虫新疆株MSA-2c基因重组质粒的构建、真核表达及其免疫反应性研究

根据GenBank公布的牛巴贝斯虫裂殖子表面抗原MSA-2c基因序列设计引物,采用PCR方法从患病牛的全血基因组中扩增得到798 bp的MSA-2c基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达MSA-2c基因,取其肝脏提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增可得到目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-MSA-2c肌肉注射免疫小白鼠4次后,将获得的抗血清作为抗体,纯化的GST-MSA-2c融合蛋白作为抗原进行Western-blot检测,可得到抗原-抗体结合产生的特异性条带,表明重组质粒具有免疫学活性。

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与表达

采用PCR方法扩增环形泰勒虫Tams1基因,将扩增产物与pUcm-T载体连接,重组质粒经PCR和双酶切鉴定、测序确认后被亚克隆于pGEX-4T-2表达载体中。构建的表达重组质粒经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,克隆的Tams1基因片段长846bp,为一个完整的开放阅读框,编码281个氨基酸,与GenBank中的Tams1基因核苷酸同源性在93.6%～99.8%之间;系统进化树分析表明新疆分离株与印度株、毛利塔尼亚株和北非共和国株进化途径一致,与苏丹株、巴林株进化途径相差较远;推测的蛋白质抗原决定簇预测表明,Tams1基因编码的氨基酸具有13个交叉的抗原决定簇;表达的融合蛋白为56ku,能够被环形泰勒虫多克隆血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为进一步开展牛环形泰勒虫的分子生物学诊断、亚单位疫苗和核酸疫苗的研究奠定了可靠的基础。

牛环形泰勒虫巢式PCR诊断方法的建立

根据GenBank上发表的环形泰勒虫Tamsl基因序列设计2对巢式引物，成功建立了环形泰勒虫病的巢式PCR快速检测方法。验证试验结果表明，PCR扩增产物测序结果与GenBank收录的Tamsl序列同源性在92％～99％，对环形泰勒虫检测具有良好的特异性、重复性以及灵敏度。对新疆焦虫病疫区牛群血样检测发现，巢式PCR检出率为62．2Yoo（61／98），高于常规PCR检出率（58．2％，57／98）和血涂片镜检检出率（35．7％，35／98），提示该巢式PCR方法可用于大规模的环形泰勒虫病的流行病学调查。

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与序列分析

采用PCR技术，从新疆焦虫病疫区感染牛的全血中扩增到Tamsl基因，该基因长度为846bp，编码281个氨基酸。同源性分析表明，该基因与其他9个国际流行虫株的核苷酸同源性为93．6％～99．8％，氨基酸同源性为88．6％～99．6％。系统发育进化树分析表明，新疆分离株同印度株、毛利塔尼亚株、土耳其株、北非共和国株进化途径一致，与苏丹株和巴林株进化途径相差较远。氨基酸抗原决定簇分析发现新疆分离株编码的氨基酸有13个抗原决定簇。

新疆高致病性猪蓝耳病病毒分离与鉴定

从新疆发病仔猪的肺脏和淋巴结内体内分离到1株PRRSV病毒。该病毒能直接在Marc-145细胞上生长,继代培养72 h后产生细胞病变(CPE)。经特异性荧光抗体和ELISA检测均为阳性,RT-PCR方法能扩增出该病毒的400 bp的特异性片段。从该病的流行病学、临床症状、病理学、病原的生物学特征来看,该分离株为猪繁殖与呼吸综合症病毒的变异株。这一结果提示PRRSV毒株变异是引起新疆地区猪场母猪、仔猪大量发病死亡的重要原因,必须引起各级兽医部门和猪场的高度重视。

2017年新疆兵团春季口蹄疫免疫抗体效果评估分析

2017年春季对新疆兵团13个师所辖团场进行口蹄疫免疫抗体监测，并进行免疫效果评估。用口蹄疫液相阻断ELISA方法共检测牛、羊、猪0型、AsiaI型、A型口蹄疫血清样品4407份，三型合格数为4091份，平均免疫合格率为92．83％。根据监测结果与场点分布情况，讨论0型、AsiaI型、A型的口蹄疫免疫抗体监测中存在的问题等并提出建议。

2011年新疆部分猪场主要疫病调查及免疫抗体评估

对本实验室2011年受理检测的92个规模化和散养猪场猪瘟、口蹄疫等血清学监测和流行病学调查信息分析,结果表明,猪瘟平均免疫抗体合格率为76.86%,口蹄疫免疫抗体合格率为60.82%,猪伪狂犬病免疫抗体合格率为51.75%,猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体合格率为55.52%。结合临床诊断及实验室检测,部分猪场存在胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒、链球菌、副猪嗜血杆菌等感染,胸膜肺炎放线杆菌抗体阳性率为48.10%,猪圆环病毒抗体阳性率为53.21%,链球菌抗体阳性率为48.89%,副猪嗜血杆菌抗体阳性率为25.58%。

奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病感染情况调查

[目的]调查4个奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病的感染情况,为进一步进行病原学研究,揭示其致病作用,以及为制定防治措施奠定基础。[方法]选取4个规模化奶牛场,采集死胎、流产胎儿的肺、肝、脾、肾、淋巴结等组织,伴有肺炎症状犊牛的鼻拭子和耳组织,腹泻犊牛粪便,初乳以及冻精样品,共计248份。采用实时荧光RT-PCR/PCR检测方法,对牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)进行检测。[结果]发现BVDV、BPIV-3、IBRV的总阳性率分别为11.29%(28/248)、10.00%(18/180)、9.26%(15/162)。[结论]这4个奶牛场存在BVDV、BPIV-3、IBRV的感染,调查结果为规模化奶牛场繁殖障碍类主要病毒性疫病的防控提供了流行病学数据。

新疆生产建设兵团畜间布病监测分析及防控对策

对兵团2000年以来布鲁氏菌病监测数据分析表明,兵团布病疫情上升较快,有扩大趋势。出现布病疫情的主要原因是,传染源无法彻底清除,家畜的流通市场较混乱,检疫净化措施执行难度大,养殖者对布病知识的了解不够,致使阳性畜不断增加,传染源长期存在。通过检疫、淘汰病畜和培育健康畜群为主导的综合性预防措施,才能防止人间布菌病的发生,最终达到控制和消灭布菌病的目的。

生态养猪发酵益生菌的分离鉴定及体外抑菌试验研究

通过实验室和野外采集(主要在高山松树下蓬松的土壤)样本,经过分离鉴定,分别获得1株地衣芽孢杆菌、3株蜡样芽孢杆菌、1株短小芽孢杆菌、1株乳酸杆菌。采用牛津杯法测定这6株菌对病原菌的抑菌试验,并对分离的6株菌进行动物安全性试验。结果表明:这6株菌对大肠杆菌、葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,且动物试验安全,为生态养猪提供了发酵菌种。

检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以田间分离的轮状病毒CHLY(G6型)作为抗原,建立了犊牛轮状病毒(BRV)抗体检测与监测的间接ELISA方法。田间监测牛轮状病毒感染率为32.91%(26/79),疫苗源性抗体高峰出现在二次免疫后第40天至第60天,抗体持续期为3个月。该方法可用于粪便、血清样品的检测,具有特异性强、快速简便等优点,适合于对轮状病毒特异性抗体的动态监测和批量检测。

新疆家蚕抗菌肽(Cecropin-XJ)对奶牛乳房炎病原的体外抑菌效果观察

利用新疆家蚕抗菌肽对奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌试验进行药效学观察,确定抗菌肽的抗菌谱,为今后选择新药提供资料和依据。挑选乳房炎的主要病原菌进行药敏试验,先确定抗菌肽的最小抑菌浓度,再将抗菌肽和抗生素进行比较。家蚕抗菌肽对奶牛乳房炎常见病原菌中的革兰氏阳性球菌生长有抑制作用,而对大肠杆菌没有生长抑制作用;与抗生素抑菌圈相比,家蚕抗菌肽抑菌圈较小。结果提示抗菌肽没有抗生素抑菌效果强,但抗菌肽可以减少耐药性,为今后抗菌肽与抗生素联合用药提供依据。

奶牛隐性乳房炎与奶牛酮病关系的初步研究

探讨奶牛隐性型乳房炎由大肠杆菌引起的发病情况,对大肠杆菌型奶牛隐性乳房炎和奶牛酮病的关系进行分析,结论表明,奶牛隐性乳房炎的发生与奶牛酮病没有相关性。

新疆规模化奶牛场繁殖障碍类疫病的血清学调查

对新疆南、北疆的6个规模化奶牛场繁殖障碍类疫病进行调查,采集流产、产死胎、弱胎的成年母牛血清155份,应用血清学方法检测牛病毒性腹泻等5种疫病的感染性抗体。结果表明,5种疫病在各牛场不同程度存在,感染性抗体平均阳性率分别为:牛病毒性腹泻75.5%、牛衣原体38.1%、牛传染性鼻气管炎88.4%、牛布鲁氏菌病25.7%、弓形体病26.5%。本研究为规模化奶牛场开展疫病防控提供了依据。

新疆五家渠市引入湖羊疫病流行病学调查

为了掌握新疆五家渠市引入湖羊的养殖情况及健康状况,为后期湖羊引种和养殖提供参考,笔者对新疆五家渠市某规模化养殖场湖羊的发病情况进行了两年半的跟踪调查。结果表明：调查期间湖羊发病主要集中在消化系统、生殖系统和呼吸系统相关疾病,发病率分别占到总发病率的60.40%、60.30%和87.72%,其中尤以羔羊腹泻、妊娠母羊流产和羔羊肺炎严重,提示后期应加强羔羊培育,以及妊娠母羊饲养管理及疾病防控工作。