表皮生长因子对绵羊子宫内膜上皮原代细胞增殖的影响

通过建立和完善绵羊子宫内膜上皮原代细胞体外培养技术,为研究绵羊母体和孕体之间的相互作用机制建立体外着床模型。采用组织块法分离培养子宫内膜上皮细胞,观察其生长情况,并比较不同表皮生长因子(EGF)浓度对子宫内膜上皮细胞增殖的作用效果。结果显示,组织块培养1~2 d后,组织周围迁出子宫内膜上皮细胞,长满60 mm培养皿需9~12 d;经差时消化法纯化后,F1代绵羊子宫内膜上皮细胞纯度可达90%以上,表明所获细胞可用于后续试验;F2代细胞在不同浓度EGF(0、12.5、25、50、75、100 ng/mL)下培养144、168 h,经检测在144 h,12.5、25和100 ng/mL浓度下D 450 nm值极显著高于对照组(P<0.01),50 ng/mL浓度下显著高于对照组(P<0.05),在168 h,12.5 ng/mL浓度下显著高于对照组(P<0.05),因此,在12.5 ng/mL EGF作用下效果最佳;F3代细胞在0、12.5 ng/mL浓度下培养不同时间(24、48、72、96、120、144、168、192、216 h),经检测D 450 nm值在144 h差异显著(P<0.05),168 h后差异极显著(P<0.01)。因此,在培养液中添加12.5 ng/mL EGF可以更加高效、快速得到子宫内膜上皮细胞。

转hTERT基因牛胎盘滋养层细胞生长及分泌特性研究

本研究旨在培养符合实验要求的牛胎盘滋养层细胞,并探究外源hTERT基因对细胞生长及功能特性的影响。利用联合组织块培养法、胰蛋白酶消化法获得原代牛胎盘滋养层细胞,利用脂质体转染pc1-neohTERT质粒,通过WesternBlot检测细胞角蛋白7(Cytokeratin7,CK7)和波形蛋白(Vimentin)的表达,又通过免疫组化检测胎盘催乳素(Placental Prolactin,PL)和绒毛膜促性腺激素(Chorionic Gonadotropin,CG)等的表达。结果表明:研究中培养获取的原代牛胎盘滋养层细胞90%以上可表达特异性角蛋白CK7,转染质粒后细胞可连续稳定传代15代以上,且CG和PL的分泌量与原代细胞相比无显著差异,证明转染质粒对细胞主要功能及生长特性没有明显影响,细胞可用于后续实验。

SCF对牛子宫内膜上皮原代细胞增殖的影响

探讨干细胞因子(SCF)对体外培养的原代牛子宫内膜上皮细胞的增殖、分化能力的影响。无菌条件下获取牛子宫内膜上皮,采用组织块贴壁法行体外原代培养,经上皮细胞纯化后将所培养的细胞通过免疫荧光进行鉴定,随后接种于细胞培养皿中,分别加入含0、1、10、100 ng/ml SCF的原代培养液。然后采用CCK-8法测定细胞增殖、分化能力。结果显示经组织块贴壁法培养的原代子宫内膜上皮细胞生长缓慢,在加入SCF后细胞生长旺盛、状态良好,细胞形态呈铺路石状。SCF浓度在1、10、100 ng/ml时对子宫内膜上皮细胞均有明显的增殖作用。其中SCF浓度为10 ng/ml时促进作用最明显(P<0.01)。此外。结论SCF对牛子宫内膜上皮细胞有明显的促生长作用,提示SCF可能对怀孕初期母牛容受态更好的建立有积极作用。

雌二醇对哺乳动物子宫内膜血管生成调控的研究进展

随着畜牧养殖业的发展,雌性动物的妊娠问题已经越来越突出。值得关注的是,在畜牧兽医产科临床上,妊娠过程中动物子宫血管的生成不足会导致胚胎着床困难增加、流产和胎儿停止发育等问题。近年来临床及实验室对肿瘤血管生成的作用及生成机制的研究颇多,因肿瘤血管的生长机制与子宫内血管的生长机制存在一定的类似性。所以,借鉴肿瘤血管生成的相关研究,了解血管生成的作用及血管生成的机制,为后期进一步研究雌二醇对反刍动物子宫内膜血管形成的机制奠定基础。

规模化养禽条件下禽流感防治方法研究

鉴于目前国内外致病性禽流感疫情来势汹汹地状况，规模化养殖场在防治疫情方面面临的形势比较严峻，如何采取有效的措施来控制疫情，最大程度地减少经济损失，是当前规模化养禽户需要认真思考并严肃对待的问题，因为是否做好疫情防控措施，对于有效提高养殖效率具有重要作用。本文基于此，提出了相关禽流感的防治方法，以期为规模化养禽户提供一些参考。

褪黑素对低氧环境下牛黄体功能的调节机制

本研究旨在探讨褪黑素对牛黄体功能的调节机制。以牛黄体细胞为研究对象,用氯化钴(CoCl2)建立体外低氧模型,采用蛋白印迹和荧光定量PCR技术分析褪黑素对常氧和低氧条件下缺氧诱导因子HIF1α的调节作用。结果发现CoCl2以剂量依赖的方式促进黄体细胞中HIF1α的表达;在常氧条件下,生理和药理浓度的褪黑素对黄体细胞中HIF1α的表达没有明显影响,而在低氧环境中,褪黑素会抑制HIF1α的表达。这些结果表明褪黑素可以通过抑制缺氧条件下HIF1α的表达进而参与调节黄体功能。