GII.8和GII.9型诺如病毒P蛋白糖结合特征研究

目的了解GII.8和GII.9型诺如病毒P蛋白的糖结合特征。方法利用大肠杆菌系统获得GII.8和GII.9诺如病毒P颗粒蛋白,通过寡糖和唾液结合实验,研究P颗粒蛋白与组织血型抗原等糖的相互作用,再采用序列比对和结构比较,分析GII.8和GII.9糖结合位点的序列和结构特征。结果GII.8 P蛋白与所检测的寡糖无明显结合,与部分人A/B/O型别唾液样本有结合。GII.9 P蛋白结合H双糖,与人A/B/O型别唾液有很好结合。序列和结构分析均显示GII.8 P蛋白具有与GIII.9相似的潜在糖受体结合位点,其位点与流行株GII.4等型别的糖受体区区相近。结论非流行株GII.8和GII.9 P蛋白与不同组织血型抗原的结合能力不同,提示可能会造成流行的差异,需要对非流行株开展持续的分子监测。

GⅡ.4基因型香港株P蛋白受体结合特征的研究

分析GⅡ.4基因型中国香港株(GⅡ.4 HongKong,GⅡ.4 HK)P颗粒蛋白与组织血型抗原的相互作用方式以探索GⅡ.4 HK的受体结合特征。利用大肠杆菌蛋白表达系统得到GⅡ.4 HK及GⅡ.4 Sydney的P颗粒蛋白,通过寡糖和唾液结合实验研究其与不同组织血型抗原的结合特异性;对序列和结构进行分析,比较P蛋白的结构和功能特征。成功制备到GⅡ.4 HK与GⅡ.4 Sydney的P颗粒蛋白,GⅡ.4 HK和GⅡ.4 Sydney P颗粒与人A、B、AB、O型唾液均有结合,也与含fucose的H双糖寡糖有很好的结合。GⅡ.4 HK与GⅡ.4 Sydney流行株具有相似的组织血型抗原结合特征,但结合能力弱于GⅡ.4 Sydney流行株,GII.4 HK在多个抗原位点有氨基酸改变,可能引起抗原改变,有必要对GⅡ.4 HK流行情况的持续监测。

人A组轮状病毒G1P[8]基因型VP7蛋白的表达及其抗体制备

目的表达和纯化人A组G1P[8]轮状病毒VP7蛋白(G1 VP7);制备VP7多克隆抗体并进行抗体功能鉴定。方法利用杆状病毒系统表达G1 VP7蛋白,通过亲和层析法进行蛋白纯化。将纯化后的G1 VP7蛋白免疫新西兰大白兔制备兔多抗血清,纯化得到G1 VP7兔多抗。通过免疫印迹(Western blot,WB)、酶联免疫吸附(ELISA)和免疫荧光试验进行多抗功能验证。结果利用杆状病毒表达系统获得人A组G1P[8]轮状病毒可溶VP7蛋白,并且G1 VP7蛋白主要以三聚体形式存在;制备得到G1 VP7多抗,ELISA结果显示VP7多抗具有较高的效价;WB和ELISA实验表明VP7多抗能够识别多个G型轮状病毒的VP7;免疫荧光试验结果进一步显示G1 VP7多抗可以结合不同A组轮状病毒,包括Wa株(基因型G1P[8])、DS-1(基因型G2P[4])、SA11(基因型G3P[2])、人G9P[8]株。此外,双夹心ELISA初步结果显示包被VP7多抗可以检测到轮状病毒临床样本。结论本研究成功得到可溶G1 VP7蛋白并制备VP7多抗;G1 VP7多抗可以结合多种G型轮状病毒,为不同G型轮状病毒检测方法的建立奠定基础。

A组P[15]型牛轮状病毒VP8*蛋白多糖结合特异性研究

目的研究A组P[15]型轮状病毒VP8*蛋白的多糖结合特异性。方法利用大肠杆菌表达系统制备A组P[15]型牛轮状病毒毒株的VP8*蛋白,通过寡糖结合实验、生物膜层干涉实验及血凝等方法研究其与不同糖的结合。结果A组P[15]型牛轮状病毒VP8*蛋白结合Neu5Ac和Neu5Gc唾液酸,与α2,3和α2,6方式连接的唾液酸糖也有较好的结合。此外,P[15]VP8*蛋白可以凝集人和动物的红细胞。结论唾液酸可能是A组P[15]型轮状病毒的糖受体。与猴P[3]、猪P[7]轮状病毒相似,牛P[15]VP8*蛋白与唾液酸结合,并且序列和结构分析显示它们具有相同的糖结合位点。

大曲中产果胶酶微生物的分离鉴定及其产酶活力评价

为深入研究大曲中微生物的组成及其产果胶酶特性,本研究对泸州老窖酿酒大曲中微生物进行分离鉴定,得到细菌15株(其中包括6株高温菌株),真菌5株(其中包括3株高温菌株)。以桔皮粉为唯一碳源发酵诱导菌株产果胶酶并采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS)测定酶活,筛选出了两株酶活力最高的菌株,分别为细菌Q-B2和真菌Q-F5。利用16SrDNA以及ITS鉴定高产果胶酶菌株种属,证明与Q-B2及Q-F5最相近种属分别为鹑鸡肠球菌(Enterococcusgallinarum)和嗜热子囊菌(Thermoascusaurantiacus)。本研究为加深对大曲中微生物的组成认识提供理论依据。进一步探索本实验中分离所得微生物产果胶酶的性质,对P-Q-B2(Q-B2所产果胶酶)的酶学性质进行测定,结果显示,P-Q-B2的最适pH为3,最适温度为50℃,在pH为3以及5~11的区间内,剩余酶活力都在40%以上;该酶在30~50℃具有良好的热稳定性,证明其在实际生产中具有良好的应用潜力。