携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的多重耐药特征和体外致病性研究

【目的】探究携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的分子流行特点。【方法】检测76株携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的多重耐药谱、系统进化分群及毒力基因,并分析毒力基因与耐药特点、系统进化分群之间的关联性。【结果】药敏结果显示,携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌对氟苯尼考的耐药率最高,达85.53%(65/76);其次是恩诺沙星,为48.68%(37/76);最常见的多重耐药谱为氟苯尼考+恩诺沙星+乙酰甲喹,达10.53%(8/76)。系统进化分群结果显示,主要的亚群为C群和B1群;其中,C群检出率最高,达53.95%(41/76);其次是B1群,为30.26%(23/76);E群、A群、D群和F群的检出率分别为9.21%(7/76)、2.63%(2/76)、2.63%(2/76)和1.32%(1/76);未检测出B2群和分支I群。毒力基因检测结果显示,76株携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌均检出了至少4种毒力因子,且有11株菌同时携带至少11种毒力基因;其中,有13株菌同时检出禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的5个标志性毒力基因(iroN、iutA、hly、OmpT和iss),检出率为17.11%;有11株菌检出ColV质粒的标志基因(cva/cvi、iroN、iucD/iutA、etsAC、OmpT/hlyF和sitA),检出率为14.47%;有28株菌检出耶尔森菌强毒力岛(high pathogenitility island,HPI)的标志基因irp-2和fyuA,检出率为36.82%。【结论】携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌多为多重耐药菌,且多重耐药菌株携带ColV毒力质粒可能性更高;携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的多重耐药与致病性有关联,即携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌具有多重耐药的同时,具有致病的可能性更高。

bla_(CMY-2)阳性禽源奇异变形杆菌的多重耐药特征

【目的】研究bla_(CMY-2)阳性禽源奇异变形杆菌的多重耐药特征,并分析菌株CY32全基因组序列结构。【方法】对5株bla_(CMY-2)阳性禽源奇异变形杆菌进行氟苯尼考和质粒介导氟喹诺酮类耐药基因检测、接合试验和bla_(CMY-2)基因的Southern杂交定位,对其中一株菌CY32进行全基因测序和生物信息学分析。【结果】5株奇异变形杆菌携带的bla_(CMY-2)位于染色体,其中,菌株CY12、CY32、S31和S52携带floR,菌株CY12和CY32携带qnrD。CY32的染色体同时含有SXT/R391型整合性接合元件(integrative and conjugative elements,ICEs)(ICEPmiJpn1)和PmGRI1共2种耐药基因岛。ICEs的可变区包含2个串联的复合型转座子(IS10构成),其中一个复合型转座子携带bla_(CMY-2);CY32的PmGRI1耐药岛含有12个耐药基因。与其他奇异变形杆菌携带的PmGRI1相比,多重耐药区差异最大的区域位于Tn21转座子。此外,CY32包含2个质粒,包括携带floR的IncQ质粒和携带qnrD的非接合质粒。奇异变形杆菌CY32携带15个耐药基因,呈现多重耐药的特性。【结论】奇异变形杆菌经基因岛和质粒获得多重耐药,使治疗奇异变形杆菌感染变得更加困难,应加强对动物源奇异变形杆菌耐药性监测。

新农科背景下教学实验室生物安全HACCP管理体系构建与探索——以河南农业大学动物医学实验室为例

高校实验室作为教学的主要场所,其生物安全管理责任重大。本研究调查、分析了新农科背景下高校动物医学实验室生物安全管理现状,确定了实验室生物安全的关键环节和重要隐患,从实验动物、实验生物材料、实验设备、实验废弃物、实验人员5个关键控制点进行研究,制订HACCP计划,探索创建与时俱进的动物医学实验室生物安全管理技术体系,旨在提高农业院校实验室安全管理能力,助推动物医学一流学科建设,也为同类高校实验室安全管理提供参考。

鸡源携带黏菌素耐药基因mcr-1大肠杆菌的流行情况及耐药性研究

【目的】调查不同年份不同地区携带质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1大肠杆菌的流行情况,并分析其耐药性。【方法】2017、2018、2019、2021年从河南省开封、南阳以及江西省赣州随机收集鸡肛门拭子和粪便样品,对其进行细菌分离培养,挑取疑似菌落进行革兰染色镜检,利用药敏试验检测分离株对常见14种抗菌药的敏感性及多重耐药情况,通过PCR扩增分离株携带的临床常见耐药基因。采用多重PCR对mcr-1基因阳性分离株进行种族系统进化分析。【结果】共分离到724株鸡源大肠杆菌,其中河南省364株,江西省360株。724株分离株对四环素耐药率最高(93.65%),其次为氟苯尼考(87.98%),对阿米卡星和黏菌素较敏感,耐药率分别为4.83%和18.51%。724株菌株中共有96株分离株携带mcr-1基因,其均呈现多重耐药性,对多西环素和氟苯尼考的耐药率均为96.88%。96株携带mcr-1基因分离株中有27株同时携带其他临床耐药基因,其中14株携带fosA3基因,11株携带bla CTX-M-1G基因,13株携带bla CTX-M-9G基因,3株携带bla NDM基因,有11株同时携带磷霉素耐药基因fosA3和超广谱β-内酰胺酶基因。种族系统进化分析结果显示,87株携带mcr-1基因分离株为A群,4株为B1群,5株为D群。【结论】不同年份不同地区鸡源大肠杆菌携带mcr-1基因存在差异,mcr-1基因阳性菌株多重耐药情况较明显,部分携带mcr-1基因的分离株同时携带其他临床耐药基因。持续监测mcr-1基因在不同区域和不同领域的流行情况,有助于更好地了解细菌耐药性的形成和传播规律,进而采取有效的防控措施。

郑州市宠物猫源病原菌毒力基因检测及其耐药性分析

为了解宠物猫源病原菌常见毒力基因的携带情况及其对临床常用抗菌药物的耐药性,采集宠物医院住院猫的鼻拭子、咽拭子和肛拭子进行病原菌的分离纯化、16S rRNA鉴定,通过PCR扩增检测毒力基因,并通过最低抑菌浓度(MIC值)测定判断药物敏感性及耐药性。共分离到16株大肠杆菌、8株葡萄球菌、3株沙门氏菌和14株肠球菌。16株大肠杆菌中毒力基因OmpA检出率最高,达到100%(16/16);≥43.75%的猫源大肠杆菌对头孢噻呋、头孢喹肟、多西环素和氟苯尼考耐药;8株葡萄球菌未检测到毒力基因,≥87.50%的葡萄球菌对头孢噻呋、头孢喹肟、多西环素、庆大霉素和阿米卡星耐药;2株沙门氏菌检测到fliC、gipA、mgtC毒力基因,3株沙门氏菌全部对多西环素、庆大霉素、黏菌素耐药,且2株检测到mcr-1 COL耐药基因;14株肠球菌中毒力基因efaA检出率最高,为78.57%(11/14),≥92.86%的菌株对头孢噻呋和阿米卡星耐药。宠物猫源病原菌除葡萄球菌外均携带多种毒力基因,耐药性突出且存在多重耐药性,对替加环素和黏菌素的耐药机制疑是水平传播所致。

氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆菌病的治疗效果

研究了氟苯尼考单药及与多西环素联合对鸡大肠杆菌的抗菌活性、抗菌后效应(PAE)及对试验性鸡大肠杆菌病的治疗效果.结果表明:氟苯尼考对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为1 6mg·L-1,与氯霉素相同,是甲砜霉素的2 5%;氟苯尼考对鸡大肠杆菌的PAE(1 45～2 07h)显著长于甲砜霉素(P<0 05),呈浓度依赖性.棋盘法测得氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆菌呈无关作用,部分抑菌浓度(FIC)指数值为1 5,联合时的氟苯尼考MIC值是其单独时50%.氟苯尼考以1∶2(质量比)与多西环素联合时,对鸡大肠杆菌的PAE与单药PAE的较大值相近,与相应浓度的单药相比均表现为无相关作用.氟苯尼考3种剂量(10mg·kg-1和20mg·kg-1(肌注)、30mg·kg-1(口服))、或联合用药(氟苯尼考10mg·kg-1+多西环素20mg·kg-1、氟苯尼考20mg·kg-1+多西环素40mg·kg-1(口服))5种治疗方案,对鸡大肠杆菌病的治愈率分别为73 3%,76 7%,73 3%,76 7%,80 0%,感染对照组的死亡率为80 0%.

30株鸡大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

采用2倍稀释法检测30株鸡大肠杆菌对常见药物耐药性,用表型筛选和确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,并分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增以确定其基因型。结果显示23株大肠杆菌为产ESBLs株,占76.7%。PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV阳性率分别为73.9%、43.5%和0%,有7株同时检测出TEM和CTX-M基因(占30.4%),3株未检测出TEM、CTX-M和SHV 3种基因(占13.0%)。药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重,产酶菌对氨苄西林和头孢噻呋的耐药率最高,为95.7%,对氨基糖苷类、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率均高于78%,氨苄西林和三代头孢与酶抑制剂联用或2种不同种类的药物联用均能明显增强抗菌活性。以上结果表明河南省76.7%的临床分离鸡大肠杆菌为产ESBLs株,其基因型主要是TEM和CTX-M,尚无SHV型,β-内酰胺类与酶抑制剂联用或不同种类药物联用是防治鸡产酶大肠杆菌感染的有效措施之一。

鸡大肠杆菌TEM和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

【目的】检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型和基因亚型,了解河南省产酶鸡大肠杆菌ESBLs基因型分布。【方法】对河南省7个地区不同鸡场临床分离28株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增及测序分析,确定其基因型和基因亚型。【结果】21株鸡大肠杆菌检出TEM型基因,2株检出CTX-M型基因,5株检出TEM型和CTX-M型两种基因,未检出SHV型。TEM基因亚型以TEM-1变异型为主,与AY293072(TEM-1)相比同源性为98%—99%,核苷酸序列除发生18T→C沉默突变外,尚有3株分别有另一处碱基发生变化:783G→A(C3菌,序列号为FJ405207)、21T→A(X2菌,序列号为FJ405208)和269G→A(F4菌,序列号为FJ405211),其中前两处为沉默突变,F4菌的碱基突变引起92甘氨酸变为天冬氨酸,为TEM-57型。CTX-M基因亚型包括两种:CTX-M-65亚型4株(C2、C3、C4和K1,序列号分别为FJ405191,FJ405192,FJ405212和FJ405214)和CTX-M-14亚型3株(F2、X3和B5,其中F2菌的相关序列已上传至GenBank,获序列号为FJ405213)。【结论】目前河南省产ESBL鸡大肠杆菌基因亚型以TEM-1变异型为主,CTX-M-65和CTX-M-14型次之。

固体酸催化大豆油与乙醇酯交换制备生物柴油

利用淀粉和对甲基苯磺酸合成了新型碳基固体酸催化剂,并将它应用于大豆油与乙醇的酯交换反应制备生物柴油。考察了反应时间、反应温度、醇油摩尔比、催化剂用量及使用次数等因素对生物柴油收率的影响。结果表明,新型碳基固体酸催化剂对大豆油与乙醇酯交换反应有很高的催化活性,易于分离,具有良好的稳定性。最佳反应条件为:醇油摩尔比为8∶1,催化剂质量分数为7.0%,反应时间8 h,反应温度为80℃,该条件下生物柴油的质量收率可达67.4%。

探析兽医毒理学实验教学中科研素养的培养

兽医毒理学是一门兼具基础和应用学科特点的新兴交叉学科,实验教学是培养学生科研素养和创新能力的主渠道。通过剖析现行实验教学存在的问题,从优化教学模式,开展多元化的混合教学,拓展教育资源等角度,对如何提高本科实验教学的质量展开深入探讨。旨在推进科研与教学在高校本科实验教学中的融会贯通,培养学生的科研素养。

河南省鸡源大肠杆菌耐药性检测

用微量肉汤稀释法检测51株河南省鸡源大肠杆菌对B-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类、氟喹诺酮类和磺胺等6类共14个药物的耐药性.结果表明细菌的多重耐药现象已十分严重,四耐及以上的菌株占总受试菌的96%,76.5%菌株耐6～10种药物,河南省养鸡场最常见的耐药谱为氨苄西林+头孢噻呋+庆大霉素+磺胺甲噁唑/甲氧苄啶+恩诺沙星.

反相高效液相色谱测定动物源食品中大观霉素残留

目的建立反相高效液相色谱法配合电化学检测器测定动物源食品中大观霉素残留。方法用三氯乙酸匀浆抽提以脱去试样中的蛋白，然后用二氯甲烷去除试样中的脂溶性物质，再经LC-SCX阳离子固相萃取小柱净化处理，产物进行检测。流动相为离子对缓冲体系（0.02mol／L柠檬酸：0．004mol／L庚烷磺酸钠，50％NaOH调pH至6．10）：乙腈（体积比为92．5：7．5），流速0.6ml／min，工作电极电压1．0V，柱温35℃，检测波长254nm。结果大观霉素在0．01-10．0μg／ml范围内线性关系良好，相关系数尺=0．99998。结论该法简便、直接、准确。

动物源分离菌异质性耐药研究进展

细菌耐药性的持续发展是全世界公共卫生难题,结果导致临床医学和畜牧业防控耐药菌感染日益困难,不仅严重威胁了人类健康,而且制约了畜牧业的健康持续发展。异质性耐药是细菌耐药发展的中间环节,在一定条件下能发展为稳定耐药菌,从而进一步加重细菌耐药;同时还会导致临床用药治疗失败,延长病程或影响养殖业的经济效益。本文从异质性耐药菌的分类、危害、检测方法与判定标准、流行病学特征及形成机制进行综述,以期为畜牧业临床诊断与研究异质性耐药菌提供理论依据,并为有效遏制细菌耐药发展提供帮助。

固体酸催化酯交换制备生物柴油的研究进展

制备生物柴油最常用的方法是植物油和动物脂肪的均相碱或酸催化酯交换。与石油基柴油相比,从植物油和动物脂肪生产生物柴油的主要瓶颈是生产价格,特别是原料价格。为降低生物柴油成本,应利用廉价原料(如废油脂)、采用连续酯交换工艺并从生物柴油副产品(甘油)中回收高纯度甘油。均相酸催化剂虽反应产率高,但废催化剂会带来环境问题,故固体酸催化剂已成为目前研究热点。简述了固体酸催化酯交换制备生物柴油的研究进展和发展趋势,最后提出了一些建议。

兽医药理学课程思政的探索与实践

《兽医药理学》是动物医学和动物药学专业的一门基础性课程,专业性极强。本文通过深挖兽医药理学这门专业课所蕴含的隐形思政元素,并将这些思政元素有机地融入到课程教学中,让兽医药理学这门课程既能传授专业知识又能进行思想政治教育,使兽医药理学教学与思想政治教育同向发力,从而达到立德树人的效果。

1株鹑鸡肠球菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定

为检测1株临床分离的七彩鸟鹑鸡肠球菌的ESBLs和AmpC酶的基因型,探讨其耐药基因的进化机制;采用两倍稀释法测定此菌株对18种常用药物的敏感性,并用9对特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鹑鸡肠球菌ESBLs和AmpC酶的基因型及基因亚型。结果表明,鹑鸡肠球菌为产ESBLs和AmpC酶菌,除对3代、4代头孢,碳青霉烯类和磷霉素体外敏感外,对其他常用药物均呈现耐药,具有多重耐药特性;该菌所产ES-BLs的TEM序列与AJ847364(TEM-116)序列相比发生了2处碱基突变,即512T→A和695A→C,引起了相应氨基酸的突变171Ile→Lys、232Lys→Thr,是一种新的TEM亚型,GenBank注册号DQ849329;AmpC酶与序列EF078894(ACT-like型)有97%的同源性,GenBank登录号是DQ849330。这表明该株鹑鸡肠球菌ESBLs为一种新TEM亚型,来源于同时分离的鹑鸡克雷伯菌TEM型的ESBLs;ACT型AmpC酶的存在可能与七彩鸟鹑鸡接触过β-内酰胺类药物有关。

49株鸡大肠杆菌OXA型β-内酰胺酶的检测

为了解河南省部分地区临床分离鸡大肠杆菌中OXA型β-内酰胺酶的分布情况,用OXA-1、OXA-2、OXA-1 0等3对特异性引物对临床分离的4 9株鸡大肠杆菌进行PCR检测。结果显示4 9株中共2 1株检出OXA基因,检出率为42.86%,其中5株产OXA-1,9株产OXA-10,5株同时产OXA-1和OXA-10,1株同时产OXA-2和OXA-10,1株同时产OXA-1、OXA-2和OXA-10。

鸡白痢沙门氏菌超广谱β-内酰胺酶基因亚型分析

为研究鸡白痢沙门氏菌的耐药表型及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因亚型,分别采用微量稀释法及PCR扩增、测序比对法对8株分离自河南的鸡白痢沙门氏菌进行耐药表型检测及ESBLs基因亚型分析。结果显示,8株鸡白痢沙门氏菌对氨苄西林、三代头孢、氟苯尼考、恩诺沙星等耐药较为严重,仅对头孢噻呋/舒巴坦(2∶1)、头孢哌酮/他唑巴坦(4∶1)和头孢吡肟高度敏感。PCR检测表明8株受试菌共检出TEM-1(6株)、CTX-M-65(3株)、CTX-M-90(1株)、OXA-1(2株)和OXA-10(1株)5种基因亚型,其中CTX-M-90为国内外首次检出并命名。CTX-M-90的氨基酸序列与CTX-M-14和CTX-M-65相比均仅发生了1处氨基酸变异(80Ala→Val或275Arg→Ser),故CTX-M-90亚型属于CTX-M-9亚群。结果提示8株鸡白痢沙门氏菌不仅多重耐药严重,而且携带的ESBL基因型复杂。

祛痰药药效学实验方法研究

采用紫外分光光度法和目视比色法进行氯化铵药效学试验,比较两种方法作为祛痰药药效学试验方法的可行性。结果表明两种试验方法之间无显著性差异,但紫外分光光度法具有精确性高和简便快速等特点。