小剂量环磷酰胺对正常小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞的调节作用

目的比较多次与单次应用小剂量环磷酰胺(CTX)对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及功能的影响,明确小剂量CTX可否多次用于下调Treg细胞。方法 C57BL/6小鼠32只,随机分为正常对照、单次、两次及三次CTX注射组共4组,各组每10天腹腔注射20 mg/kg CTX或等体积PBS,末次给药后3 d,流式细胞技术测小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比;同时3-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法比较各组脾细胞中T、B细胞增殖功能,中性红吞噬试验比较各组巨噬细胞吞噬功能。结果各实验组小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比显著低于对照组(P<0.05),而各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能明显高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。应用CTX后Treg细胞数量与T、B细胞增殖功能及巨噬细胞吞噬功能呈线性负相关。结论多次与单次小剂量应用CTX对小鼠Treg细胞数量的下调作用无差异,下调Treg细胞后对免疫细胞的调节功能也无差异,小剂量CTX可多次用于下调正常小鼠Treg细胞。

WT1-235肽体外抗肿瘤效应的研究

目的探索WT1肽体外抗肿瘤效应。方法合成含HLA-A*0201锚定位点的9个氨基酸的WT1-235肽。PCR-SSP法筛选HLA-A*0201健康供者并鉴定细胞株HLA-A基因型别,RT-PCR鉴定靶细胞株WT1表达与否。体外分离HLA-A*0201型别的外周血单个核细胞(PBMCs),培养树突状细胞(DC),负载WT1肽并刺激活化同源淋巴细胞,进行体外CTLs杀伤靶细胞的细胞毒试验。结果荷肽DC活化的CTLs对高表达WT1的HLA-A*0201型别细胞株SW48的杀伤效应高于不表达WT1的HLA-A*0201型别的人T细胞,也高于表达WT1但非HLA-A*0201型别的K562细胞(P<0.05)。结论 WT235-242肽具有体外抗肿瘤效应并受MHC限制。

肿瘤超声抗原疫苗联合低剂量环磷酰胺在小鼠体内抗肿瘤效应的研究

目的探索肿瘤超声抗原疫苗联合低剂量环磷酰胺(CTX)的抗肿瘤效应。方法 C57BL/6雄性小鼠48只,随机分为PBS对照组、CTX组、FBL3超声抗原疫苗组、FBL3超声抗原疫苗联合CTX组。按程序免疫3次后,每组随机取4只小鼠,流式细胞术比较脾细胞中CD4+CD25+Treg及CD8+T细胞比例,MTT法比较脾细胞杀伤FBL3功能,各组其余小鼠接种FBL3肿瘤细胞,观察成瘤时间及肿块大小。结果超声抗原疫苗不能诱导CD8+T细胞比例升高(P>0.05);CTX可下调Treg细胞数量(P<0.05);疫苗和CTX均可提高脾细胞体外肿瘤杀伤率并能缩小肿块体积、延长小鼠成瘤时间,两者联合显示更强的抗肿瘤效应。结论肿瘤超声抗原疫苗联合小剂量CTX可能通过提高体液免疫或固有免疫发挥抗肿瘤效应。

甲氨蝶呤联合益赛普治疗类风湿风湿关节炎

目的评价甲氨蝶呤联合益赛普治疗类风湿关节炎（RA）临床疗效以及安全性.方法随机将90例类风湿关节炎患者分为2组：联合治疗组45例,口服甲氨蝶呤10～15 mg 1次/周,益赛普50 mg 1次/周,皮下注射;对照组45例单用甲氨蝶呤10～15mg 1次/周.疗程为3月,对2组的临床症状及实验室指标改善情况进行评价.结果2组的临床症状即关节疼痛数、关节肿胀数的改善均有良好效果,联合治疗组优于对照组;2组治疗后血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）均明显降低,且联合治疗组优于对照组.安全性方面,联合用药组一例出现肺部感染,停药及给予消炎药后好转.1例最初出现注射局部皮肤红肿伴瘙痒,3d后自行消失,未影响患者正常用药.对照组1例于服用甲氨蝶呤第2日出现头晕及胃肠道不适,1例出现口腔溃疡,1例化验血常规白细胞降低.结论甲氨蝶呤联合益赛普治疗类风湿关节炎疗效肯定,不良反应少,且明显较单用甲氨蝶呤组效果好.

黄芪枳实汤辅助乳腺癌化疗对患者营养、免疫及生活质量的影响

目的:观察黄芪枳实汤辅助乳腺癌化疗对患者营养状态、免疫功能及生活质量的影响。方法:选择2018年3月~2019年7月河北工程大学附属医院收治的女性乳腺癌患者120例,随机数字表法分成观察组与对照组,各60例。对照组给予常规化疗,观察组在化疗基础上采用黄芪枳实汤辅助治疗。结果:观察组临床治疗总有效率为73.33%,与对照组的66.67%比较无差异(P>0.05)。观察组治疗后血清ALB、Hb、CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)高于对照组,而CD8^(+)低于对照组(P<0.05)。观察组胃肠道反应、血液毒性反应发生率分别为30.00%、26.67%,与对照组的35.00%、31.67%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后特异模块、身体机能、社会活动评分及总分高于对照组(P<0.05)。结论:采用黄芪枳实汤辅助乳腺癌化疗,减轻化疗药物对营养状态、免疫功能的负面影响,进一步改善生活质量。

来氟米特与艾拉莫德联合治疗老年活动性类风湿关节炎效果分析

分析老年活动性类风湿关节炎患者接受来氟米特联用艾拉莫德在临床中的治疗效果。方法 收取医院治疗的100例确诊活动性类风湿关节炎的老年患者参与研究,他们就诊的实际均在2021年10月-2022年10月,基于单双号抽签法分组,单号中有50例老年患者,全部给予来氟米特治疗,双号中包括另外50例老年患者,全部给予来氟米特+艾拉莫德治疗,通过五项不同类型的临床指标对整体治疗效果展开评估。结果 观察组联合用药方法所取得的疗效明显高于对照组单药治疗方案所取得疗效,分别是96.0% VS 78.0%(P<0.05)。观察组治疗后老年患者关节功能明显改善,而不良症状明显减轻,比对照组治疗更好(P<0.05)。观察组血清炎性因子水平明显比对照组炎性因子水平更低,从CRP、IL-8及IL-17等指标上均有所体现,指标有统计学意义(P<0.05)。观察组接受治疗后骨代谢水平调节效果均比对照组骨代谢水平调节效果更好,多项指标差异显著(P<0.05)。观察组联合用药方案的安全性明显比对照组单药方案安全性更高,老年接受度更好(P<0.05)。结论 老年活动性类风湿关节炎患者接受来氟米特+艾拉莫德共同治疗后关节功能明显好转,骨代谢得到调节,炎性因子水平明显降低,整体疗效十分理想,并不会增加药物不良反应产生,有效性、安全性兼具,是一项值得推广的应用。

超声抗原树突状细胞瘤苗抗肿瘤效应的体外研究

目的 探讨结肠癌肿瘤超声抗原致敏的树突状细胞（DC）疫苗体外对结肠癌细胞的杀伤作用.方法分离HLA-A＊0201型健康供者的外周血单个核细胞（PBMC）,重组人细胞因子rhGM-CSF、rh IL-4、rh TNF-α体外诱导DC成熟,负载SW480超声抗原后体外刺激同一供者的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）前体,MTT法检测CTL杀伤SW480（HLA-A＊0201阳性）、K562（HLA-A＊0201阴性）的细胞毒实验.结果在效靶比20∶1、10∶1、5∶1、2.5∶1作用时,CTL对SW480的杀伤率分别为51.12%、46.67%、52.60%、40.00%;对K562的杀伤率分别为29.26%、31.98%、39.46%、31.30%,证明在各种效靶比作用时,CTL对SW480的作用均强于K562（P＜0.05）.结论肿瘤超声抗原致敏的DC瘤苗能激发具有特异杀伤功能的CTL,并且体外杀伤靶细胞具有MHC限制性.

人巨细胞病毒PP65322-561片段的原核表达及功能鉴定

目的构建人巨细胞病毒（HCMV）PP65，控～矧蛋白片段的原核表达载体PQE30-PP65，并表达蛋白。方法PCR扩增HCMVPP65第976～1686位核苷酸片段；构建重组表达质粒PQE30-PP65转化M15并表达蛋白；PCR、SDS-PAGE及Western blot鉴定重组载体及表达产物；ELISA检测目的蛋白的抗原性。结果构建了PQE30-PP65表达载体，在M15菌株中成功表达PP65勉娟。蛋白，蛋白浓度达到2．2g／L并与pp65单克隆抗体及HCMVIgG阳性血清反应良好。结论成功构建PQE30-PP65表达载体，表达的目的蛋白具有良好的抗原性。

WT1蛋白CTL表位肽基因载体的构建与鉴定

目的构建WT1(Wilms’tumor gene 1)蛋白CTL表位肽基因载体,并检测其在293T细胞中的转录。方法设计分别含WT1-126肽、WT1-235肽以及这两种肽的基因载体,并加入Th通用表位Pan-DR-Th(PADRE),应用蛋白酶体切割软件PAProC和NetChop优化各表位和间隔序列,DNA疫苗在线预测工具DyNAVacS优化真核密码子后,人工合成核苷酸序列,分别插入pUC57载体,构建pUC57-WT1质粒,测序鉴定后,酶切回收各目的片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒,转染293T细胞,RT-PCR检测各目的基因在293T细胞中的转录。采用无内毒素质粒大量提取试剂盒提取各重组质粒,采用紫外分光光度计测定质粒的纯度和浓度。结果各重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证实构建正确;重组质粒携带的目的基因可在293T细胞中成功转录;各重组质粒DNA的纯度均合格,浓度在864.6～883.9μg/ml之间。结论成功构建了WT1蛋白CTL表位肽基因载体,并能在真核细胞中正常转录,为下一步在小鼠体内探讨特异性不同的CTLs群发挥抗肿瘤作用的机制奠定了基础。

风湿免疫病并发血小板减少76例临床分析关键探索

总结风湿免疫病并发血小板减少患者的临床特点,为临床此类疾病的综合诊治提供依据。方法 研究对象为76例风湿免疫病并发血小板减少患者,接诊及治疗时间为2020年2月-2022年2月,整理患者的相关资料,并逐一分类整理,包括主要类型、血象特点、骨髓情况、出血情况、不同患者预后、治疗药物等。结果 风湿免疫病并发血小板减少中占比最高的为系统性红斑狼疮、干燥综合征;大部分患者均出现不同程度的皮肤或黏膜出血问题;血象方面,患者主要存在贫血、白细胞异常、血小板异常情况;骨髓细胞形态学方面,部分患者细胞正常、部分患者细胞存在异常情况。通过为患者使用甲氨蝶呤,干燥综合征患者、混合性结缔组织病患者的骨髓产板差,其余骨髓均恢复正常。部分患者采取常规治疗措施效果不理想,通过指导患者使用来氟米特治疗,患者综合疗效进一步提高。结论 风湿免疫病中的系统性红斑狼疮、干燥综合征容易并发血小板减少,有较高的出血风险,并伴有骨髓形态异常情况,常规治疗效果通常不够理想,可通过联合来氟米特进一步帮助患者提升综合疗效,保证患者的健康。

合唱对小学生音乐素质训练初探

本文初步探讨合唱对儿童音乐素质训练的重要性及应注意的几个问题。用合唱训练小学生音乐素质,演唱过程当中,个性服从于共性,个人服从于群体,每个队员都要使自己的声音与集体的声音统一,任何表现个体性格的举动都会给整体带来损害,并有可能会影响合唱群体的统一和协调,甚至造成负面的影响。

浅析童谣与少儿歌曲的发展

童谣是人初教育的第一形式,将人类对世界的真善美认识一代一代传下去,少儿歌曲在童谣的基础上扩大了对青少年的教育内容促使他们更加深刻地认识社会,同时帮助他们树立正确的人生观。童谣儿歌作为一种教育补充手段,在青少年的教育过程中起着非常重要的作用。