大鼠脊髓微血管内皮细胞的分离培养与鉴定

脊髓微血管内皮细胞（spinalcord microvascular endothelialcells，SCMECs）参与构成血脊髓屏障，其功能变化与多种脊髓相关疾病相关。目前分离SCMECs的文献很少。本研究拟基于分离多种原代内皮细胞的经验，建立分离纯化SCMECs的方法。

褪黑素抑制白介素-1β诱导的人脐静脉内皮细胞通透性

目的观察褪黑素(MLT)对白介素-1β(IL-1β)诱导的内皮通透性改变的影响。方法用不同浓度的IL-1β和MLT干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。用Transwell系统检测透过单层HUVECs的荧光标记的葡聚糖。用免疫荧光和Western blot检测HUVECs钙黏素(VE-cadherin)的表达。结果与对照组相比,5、10和20 ng/mL的IL-1β分别使HUVECs通透性由1.5±0.1升高为4.8±0.3、5.2±0.4和9.8±0.8(P<0.01);10和100μmol/L的MLT分别使10 ng/mL的IL-1β诱导的通透性从5.2±0.4降至2.8±0.3和2.7±0.3(P<0.01)。IL-1β破坏VE-cadherin在细胞膜上表达的连续性,MLT抑制IL-1β的这种作用。与对照组相比,IL-1β使HUVECs的VE-cadherin表达量由0.91±0.04降至0.42±0.05(P<0.01)。MLT可使其表达量上调至0.69±0.04,显著高于IL-1β组(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。结论 MLT能够通过抑制IL-1β诱导的VE-cadherin表达的降低来保护人脐静脉内皮细胞屏障的完整性。

小鼠脊髓微血管周细胞的体外培养及鉴定

目的应用周细胞培养基（PCM）分离筛选小鼠脊髓微血管周细胞（SCMP）,对其生物学功能进行评价。方法10只3周龄C57小鼠,无菌条件下取脊髓去除软脊膜,剪碎成大约1 mm×1 mm×1 mm。两次酶消化后用含20%牛血清白蛋白的DMEM离心获得微血管。用内皮细胞培养基（ECM）培养,传代2次后改用PCM培养。倒置显微镜观察细胞增殖状况。免疫细胞化学法检测血小板源性生长因子受体β（PDGFRβ）、神经元-胶质抗原2（NG2）、von Willebrand因子（v WF）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。流式检测CD140b、CD31、CD11b和GFAP的表达。将PCM换为10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基,检测细胞α-SMA表达的变化。通过周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测细胞成管能力。结果接种48 h细胞爬出,7~9 d汇合,周细胞和内皮细胞伴随状增殖。改用PCM培养后内皮细胞减少,周细胞呈优势生长。免疫细胞化学表明PDGFRβ和NG2阳性,v WF和GFAP阴性;流式结果表明细胞PDGFRβ的阳性率为95.52%±2.55%,GFAP为0.63%±0.26%,CD31为0.80%±0.26%,CD11b为1.02%±0.35%。10%胎牛血清的DMEM促进细胞分化,α-SMA表达升高。成管实验周细胞与内皮细胞共同形成管腔样结构。结论通过PCM筛选法能够成功获得纯度较高的SCMP,所获得的细胞具备明显的周细胞的形态和功能特征。

荧光显微镜观察封闭式脊髓窗内的大鼠脊髓微循环

目的探讨应用荧光显微镜通过改进的封闭式脊髓窗,观察大鼠脊髓背侧软脊膜微循环状态的可行性及效果。方法用8周龄雄性SD大鼠,暴露T9至T11棘突,咬除T10棘突和椎板,暴露硬脊膜;在T9和T11棘突上安装固定器辅助物。用牙科丙烯酸树脂和玻璃片为原料在T10节段安装改进的封闭脊髓窗。采血并离心(2 000×g)收集红细胞,将100μL压积的红细胞用Dil荧光染料(5 mg/L)体外孵育,静脉注射入体内;用罗丹明6G(0.3 g/L)静脉注射,体内标记白细胞。大鼠脊柱用微循环观测椎体固定器进行固定。用动物活体荧光成像显微系统进行观测和记录。结果通过该系统可以观测大鼠软脊膜上微血管的形态和分布特点、血管密度;可以观测到Dil标记的红细胞在血管内的黏附和流速,观察和记录罗丹明6G标记的白细胞在血管壁的黏附滚动。结论改进式的封闭脊髓窗和微循环观测椎体固定器,可用于对大鼠软脊膜上微血管进行观察和检测。

急性脊髓损伤小鼠体内循环平滑肌祖细胞升高

目的建立两种检测外周血平滑肌祖细胞(SMPCs)的绝对计数方法,评估了方法的观察者内和观察者间差异及初步应用。方法小鼠眼眶取血样本经抗体孵育后使用"裂解/一次洗涤法"处理,流式细胞仪检测。SMPCs定义为c-kit阴性/CD140b阳性/lineage阴性/sca-1阳性。SMPCs计算方法包括"微球法"和"流式直接体积法"。分别在采血后0、24和48 h后进行检测。SCI模型使用Allen's打击装置造模,检测伤后24 h的SMPCs。结果微球法和直接体积法的观察者内可靠系数分别是0.947和0.839;观察者间可靠系数分别是0.911和0.768。SMPCs在血液样本中不稳定,静置24和48 h后丢失较多。SCI后24 h,SMPCs的数量较正常组和假手术组明显升高。结论建立了两种SMPCs绝对计数法,有较好的观察者内一致性和观察者间一致性。应用两种方法能够有效的检测到小鼠SCI后SMPCs的升高,为探讨其变化的意义提供了方法和依据。

益气解毒通络颗粒对乙肝肝硬化患者肝星状细胞标记物VEGF和PDGF-AB的影响

目的:探讨益气解毒通络颗粒剂治疗乙肝肝硬化好转的分子机制,完善该方治疗乙肝肝硬化的理论基础。方法:选取2015年6月至2017年10月在北京中医药大学东直门医院,采用简单随机化分组方法,随机选择符合入排标准的体检中心体检健康者15例,肝炎门诊就诊的乙肝肝硬化患者42例。乙肝肝硬化患者均已规范使用抗病毒药恩替卡韦分散片治疗,入组后予益气解毒通络颗粒治疗6个月;对健康者,乙肝肝硬化患者治疗前、治疗6个月后,分别采集血样,待标本集中后采用酶联免疫吸附法成批检测VEGF、PDGF-AB含量。并将测定结果进行统计分析。结果:结果显示,血清VEGF水平乙肝肝硬化患者治疗前较健康者轻度升高,治疗后较治疗前及健康者均有所下降,但组间比较无统计学意义(P>0. 05);血清PDGF-AB水平乙肝肝硬化患者治疗前较健康者显著降低(P <0. 001),治疗后较治疗前有所升高(P <0. 05)但仍低于健康者(P <0. 05)。结论:VEGF和PDGF-AB水平的变化与乙肝后肝硬化的发病相关,益气解毒通络颗粒能够改善乙肝肝硬化患者血清VEGF和PDGF-AB水平,这可能是其治疗乙肝肝硬化的作用机制之一。

两种电针对脊髓损伤14天后大鼠运动功能、神经元及MEK2、p-ERK1表达的影响

目的基于Raf/Ras/ERK信号通路,探讨两种电针对大鼠脊髓损伤后14天丝裂原激活/细胞外信号调节激酶2(mitogen-activated/extracellular signal-regulated kinase 2,MEK2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1(phosphorylation-extracellular signal-regulated kinase 1,p-ERK1)表达的影响以及对大鼠后肢运功功能和神经元的影响。方法雄性清洁级SD大鼠(60只),随机分为五组,空白组(12只)、假手术组(12只)、模型组(12只)、脉冲电针组(12只)、音乐电针组(12只)。采用改良式的Allen’s打击法复制模型。两组电针组选取"大椎""命门"进行不同电针针刺干预,每天1次,每次20分钟,空白组、假手术组及模型组在治疗组治疗时进行抓取束缚,保证处理条件的相同。脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后14天,采用神经功能评定法——BBB评分对大鼠脊髓损伤进行评估,综合评定大鼠SCI后的运动功能。采用HE染色、尼氏染色方法观察脊髓损伤大鼠损伤脊髓前角组织病理改变。运用免疫组化技术和Western blot技术观察损伤脊髓前角MEK2、p-ERK1含量的变化。结果 BBB评分结果显示,经脉冲电针与音乐电针治疗后,脊髓损伤大鼠后肢活动功能较模型组均有改善(P<0.01),且音乐电针评分高于脉冲电针,但两组比较无统计学差异;HE染色与尼氏染色结果说明脉冲电针与音乐电针组均可修复脊髓前角神经元细胞,增加神经元细胞中尼氏体含量,且音乐电针优于脉冲电针;免疫组化及Western Blot结果说明脉冲电针与音乐电针均可提高脊髓前角神经元中MEK2、p-ERK1的含量,但两者无统计学差异。结论脉冲电针与音乐电针均能诱导SCI大鼠脊髓内MEK2、p-ERK1的表达,促进脊髓损伤后神经修复再生功能,音乐电针作用较脉冲电针略有优势。

优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠血浆MMP-2和MMP-9活性

目的以优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠(SHR)血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9(MMP-9)的活性。方法以含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱法为基础,改变孵育时间、工作液成份,采用不同pH值的孵育液及不同冻融次数的样品,观察对基质金属蛋白酶(MMPs)活性的影响。并以优化的酶谱法检测Wistar及自发性高血压大鼠血浆MMPs的相对活性。结果凝胶孵育时间由42 h缩短为17 h不影响酶谱法检测结果。省略漂洗步骤及洗脱液仅使用2.5%Triton X-100、孵育液中去除NaN3及NaCl且电泳后步骤将去离子水更换为蒸馏水也不影响实验结果。孵育液pH值在7.2～8.8范围内均可用于酶谱法。血浆样品反复冻融多达6次不影响酶谱法检测结果。用优化的酶谱法检测结果显示,与Wistar大鼠相比,SHR大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性显著增高。结论优化酶谱法与常规方法相比更为简便经济,检测大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性所得结果一致。

Wistar大鼠脑和脊髓微血管周细胞的分离、培养、鉴定及其功能差异的比较

探讨Wistar大鼠脑微血管周细胞(brain microvascular pericyte,BMP)和脊髓微血管周细胞(spinal cord microvascular pericyte,SCMP)之间的差异。运用超高速离心法获取脑和脊髓微血管,再用周细胞培养基培养,使周细胞爬出,然后用NG2和PDGFRβ鉴定周细胞,用鬼笔环肽着染F-actin,用流式细胞仪测定细胞周期,用免疫印记分析实验测定周细胞功能蛋白。结果表明:两种周细胞的形态有明显差异,BMP表达的F-actin显著多于SCMP,两种周细胞的细胞周期无显著差异,BMP相比于SCMP表达更多量的α-SMA、NG2和PDGFRβ。更多的了解两种周细胞的异同点,为研究其在中枢神经系统生理和病理状态下的作用奠定基础。

血红素加氧酶-1上调自发性高血压大鼠肝脏MMP-2与MMP-9表达

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对自发性高血压大鼠(SHR)肝脏基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9(MMP-9)表达的影响。方法大鼠随机分为4组:Wistar诱导组(WH)与SHR诱导组(SH)按15 mg/kg每天连续4天腹腔内注射浓度为8 g/L的氯化血红素(hemin)诱导HO-1表达;Wistar对照组(W)与SHR对照组(S)腹腔内注射等体积0.1 mol/L NaOH(pH 8.3)。检测大鼠尾动脉收缩压。免疫组化法分析肝脏HO-1及MMPs表达。明胶酶谱法检测血浆MMP-2及MMP-9的相对活性。结果 WH组与SH组肝脏HO-1、MMP-2与MMP-9表达量均显著高于W组与S组。HO-1诱导可显著降低SHR大鼠血压。S组血浆MMP-2及MMP-9相对活性显著高于W组。WH组与SH组血浆MMP-2及MMP-9相对活性显著高于W组与S组。结论 HO-1可上调SHR肝脏MMP-2与MMP-9表达。

小鼠脊髓损伤后周细胞促进脊髓血管新生

目的探讨脊髓损伤后周细胞对微血管的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为:假手术组、损伤后2、7和14 d组(S2、S7和S14),每组9只。损伤组采用改良Allen's法制作中度脊髓损伤模型。给小鼠颈静脉注入番茄凝集素(LEA),检测灌注微血管面积;用免疫荧光和免疫组化检测微血管面积和数目;用免疫荧光检测周细胞覆盖率。用缺氧条件(95%N2,5%CO2)模拟脊髓损伤的病理条件,用基质胶系统检测内皮细胞成管。结果与假手术组相比,S2组灌注血管面积、微血管面积和数目显著降低(P<0.001)。与S2组相比,S7组微血管数目和面积显著增高(P<0.05);S14组灌注血管面积、微血管数目和面积均显著增高(P<0.05,P<0.01),但平均值仍低于假手术组。与假手术组相比,S2和S7组周细胞覆盖率持续下降(P<0.001)。周细胞与内皮细胞共培养可显著增加缺氧条件下内皮细胞成管长度(P<0.01)。结论脊髓损伤后周细胞可促进脊髓血管新生。

医用针灸治疗操作车的研制

目的设计一种分区收纳合理、操作方便、卫生安全的针灸治疗操作车。方法采用塑钢材料设计,分为上中下4层。其中,上层一侧设置有活动隔板,用来分类放置各种针灸用品,另一侧内置针灸利器桶,便于使用和收纳;中间两层收纳罐具,内置设有水平平板,平板上设计有不同直径大小的通孔,用以防治罐具圆口受到污染;下层为废弃物桶和消毒桶收纳层,设有水平抽拉式静音阻尼滑轨,方便使用和复位。车架底部的四角处安装静音万向轮并有脚刹,可随意移动并固定。结果与普通治疗车相比较,该治疗操作车的物品摆放合理有序,有效解决了治疗罐具污染的问题,缩短了医务人员投放利器的距离,减少了针刺伤发生和医源性污染。结论该针灸治疗操作车使用方便,卫生安全,有效提高了医务人员的工作效率,适用于中医针灸临床。

15d-PGJ_2减弱香烟提取物抑制人脐静脉内皮细胞迁移

目的探讨15-脱氧-Δ12,14-前列腺素J2(15d-PGJ2)对香烟提取物(CSE)抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移的保护作用。方法 "划痕法"检测HUVECs的迁移。毛细管样成管实验检测HUVECs的血管新生。Western blot检测occludin蛋白表达。结果与对照组相比,CSE显著抑制HUVECs迁移,使单个视野划痕内细胞数由629±28降低至364±17(P<0.01),15d-PGJ2干预可使细胞数回升至546±20(P<0.01)。CSE抑制HUVECs血管新生,15d-PGJ2可逆转CSE对HUVECs血管新生的抑制。与对照组相比,CSE使HUVECs occludin蛋白表达量由0.37±0.04降至0.12±0.03(P<0.01)。15d-PGJ2干预可使其回调至0.28±0.04(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.05)。结论 CSE对HUVEVs迁移的抑制作用可能是通过下调occludin蛋白的表达实现的。15d-PGJ2减弱CSE下调occludin表达而逆转CSE对HUVECs迁移的抑制。

从微血管周细胞解析络脉功能的研究思路探讨

络脉是中医重要理论基础之一,对其机制进行的研究取得了丰硕的成果。神经、内分泌、免疫和微循环构成的网络对组织细胞的微环境进行统筹调整,与络脉的功能和结构相似。符合生物-心理-社会医学模式,也符合中医“天人相应”的整体观。周细胞作为微血管调控核心成员,具备多种能力,参与并适应微环境的调整。周细胞现象,具有中医理论“阴阳”、“化”、“调和”等哲学特色,是中西医结合的一个切入点。在中医哲学智慧的指导下,将络脉理论与现代生物医学技术相结合,从周细胞的角度解析络脉功能及在病理生理过程中的作用,将有望对络脉相关疾病做出新的阐释,也为“通络”治疗的环节和靶点提供依据和思路。

单片机在自动控制系统中的可行性分析

目前状况下,自动控制系统已成为工业领域的核心。单片机在自动控制系统中有抗干扰,灵活等特点。通过对单片机软件,硬件的设计原理分析,及灵活性分析,可以确定及提高单片机在系统中的可行性。

不同温度下弹跳金属微粒对圆盘绝缘子表面电荷积聚的影响

气体绝缘开关设备(GIS)和输电线路(GIL)中的金属微粒在电场作用下可弹跳至绝缘子附近,加剧表面电荷积聚,严重时会引发沿面闪络事故。选取126 kV圆盘绝缘子为试样,设计了同轴电极系统,采用Kelvin型静电探头研究了不同温度下(23、40、60℃)弹跳金属微粒对绝缘子表面电荷积聚特性的影响。结果表明:在室温下,绝缘子非平面区的电荷积聚模式与金属微粒的运动模式有着密切的关系;表面电荷积聚量与温度呈正相关;当温度上升至60℃时,运动到地电极垂直面的金属微粒易引发闪络,在与闪络同径向的非平面区会积聚大量的异极性电荷。

振动诱发金属微粒弹跳对圆盘绝缘子表面电荷积聚的影响

绝缘子上积聚的表面电荷是影响直流GIS/GIL绝缘性能的关键因素,金属微粒对表面电荷的积聚具有重要影响。在GIS/GIL的运行过程中,设备振动诱发金属微粒弹跳从而改变电荷的积聚行为,威胁设备的绝缘安全。因此,研究振动诱发的金属微粒弹跳对表面电荷积聚的影响具有重要意义。本文以126 kV圆盘绝缘子为试样,搭建了非周期振动发生装置,测量了振动条件下线形金属微粒的运动轨迹及绝缘子表面电荷的积聚情况,分析了启举方式和微粒最终位置对绝缘子表面电荷积聚的影响。结果表明:微粒以先滚动后启举的方式比直接启举的方式导致表面电荷积聚更明显,并且微粒最终静止在交界区比静止在平面区积聚更多电荷。

CAD/CAM技术在机械设计与制造中的应用

随着计算机技术的不断发展与进步,CAD/CAM技术在日常生活中应用十分广泛,从本质上改变了传统的设计与制造过程,对于促进经济增长、发展新技术都具有十分重要的意义。本文主要介绍了CAD/CAM技术以及它在机械设计制造中的应用。

单片机在电子技术发展趋势下的应用前景

随着我国电子技术的蓬勃发展,单片机这一微型计算机已逐渐作为大部分电子产品的控制核心。从单片机的内部构造出发,与电子技术的发展相联系,探讨在当前形势下的单片机应用前景和未来开发趋势,积极推动电子技术和单片机的共同发展。