消炎退热颗粒清热抗炎作用的网络药理学分析及其主要成分的含量测定

目的运用网络药理学方法分析消炎退热颗粒清热抗炎的作用机制,并采用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)技术测定其8种主要活性成分。方法通过Swiss Target Prediction数据库筛选退热颗粒入血成分的靶点,利用CTD数据库获取符合发热的疾病主要靶点,借助String平台进行蛋白相互作用(PPI)分析;通过DAVID数据库进行GO功能与KEGG通路富集分析,然后用Cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络,并对关键化合物-靶点进行分子对接验证。采用UPLC-MS/MS法测定消炎退热颗粒中靛玉红、异甘草素、甘草素、甘草酸、甘草苷、秦皮乙素、咖啡酸、绿原酸的含量。采用WATERS ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);以0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸-5 mmol·L^(-1)甲酸铵(B)为流动相进行梯度洗脱,以多反应监测(MRM)模式进行测定。结果网络药理学及分子对接筛选出消炎退热颗粒中靛玉红、秦皮乙素和咖啡酸等16个潜在的活性成分,获得转录因子(JUN)、黏着连接蛋白β1(CTNNB1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)等10个核心靶点,通路富集分析发现其清热抗炎作用主要涉及白细胞介素17(IL-17)和缺氧诱导因子1(HIF-1)等信号通路;分子对接实验表明主要活性成分与关键靶点对接呈现良好的亲和力。含量测定结果表明,各成分在各自的浓度范围内具有良好的线性关系(r>0.999),精密度、准确度和稳定性良好。16批样品中8种成分的含量分别为0.94~3.41、0.99~5.61、0.80~5.84、85.48~141.11、4.30~10.09、152.35~271.80、11.31~26.94、1.99~5.58μg·g-1,其中,2个厂家样品中靛玉红、甘草素、异甘草素、甘草苷和绿原酸的含量具有显著性差异。结论该研究初步揭示了消炎退热颗粒多成分、多靶点、多途径发挥清热抗炎的作用机制;建立了消炎退热颗粒多成分的含量测定方法,为其药理学研究和质量控制提供了参考依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS鉴定参芪降糖胶囊在大鼠体内的代谢产物

目的研究参芪降糖胶囊在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中的代谢产物及其代谢途径。方法采用UHPLC-Q-Exactive OrbitrapMS技术,以0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,并采用ESI离子源,分别在正、负离子模式进行全扫描和二级质谱扫描,获得化合物的一级和二级质谱数据,结合文献报道、对照品裂解规律及药物代谢反应规律,对大鼠ig参芪降糖胶囊混悬液后的生物样品进行分析鉴定。结果在大鼠体内共鉴定出125个化合物,包括47个原型成分(PA1~PF)和78个代谢产物(MA1~ME14),其中2个为新代谢产物,分别为MC15(五味子甲素双脱甲基后葡萄糖醛酸化产物)和MD3(去氢茯苓酸的硫酸酯化产物),4个为新化合物,分别为MC14:(6R,7R)-2,3,10,11-tetramethoxy-6,7-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydrodibenzo[a,c][8]annulene-1,7-diol、MC16:(6R,7R)-2,3,10-trimethoxy-6,7-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydrodibenzo[a,c][8]annulene-1,7,11-triol、MD1:(R)-2-((3R,3a R,6S,7S,9b R)-6-(2-carboxyethyl)-3a,6,9b-trimethyl-7-(prop-1-en-2-yl)-3a,4,6,7,8,9bhexahydro-3H-cyclopenta[a]naphthalen-3-yl)-6-methylhept-5-enoicacid和MD4:(3S,5R,10S,13R,14R,16R,17R)-4,4,10,13,14,17-hexamethyl-2,3,4,5,6,10,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthrene-3,16-diol。结论参芪降糖胶囊在大鼠体内的代谢途径主要涉及脱羟基、脱甲基、脱水、水解、还原氢化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化和多种反应类型的复合反应等。初步阐明了参芪降糖胶囊的体内代谢特征,同时为探索其生物活性成分及作用机制提供参考。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS和网络药理学探讨归脾丸抗焦虑作用机制

目的阐明归脾丸中的化学成分,并初步探究其抗焦虑作用机制。方法采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)技术对归脾丸中化学成分进行准确定性,并结合网络药理学和分子对接分析归脾丸抗焦虑的重要成分、关键靶点及通路。结果鉴定出苯丙素类、黄酮及其苷类、萜类及其苷类、生物碱类、有机酸类、挥发油类、寡糖酯类、氨基酸类、其他类等9类共116种化合物,网络药理学和分子对接深入挖掘得到归脾丸抗焦虑的9个重要成分、10个核心靶点和15条焦虑症相关信号通路。结论预测归脾丸可能通过调节5-HT、GABA等神经递质的水平,HPA、HPG等内分泌系统以及降低炎症因子的表达发挥抗焦虑作用,充分体现了多成分、多靶点、多通路协同作用发挥抗焦虑作用的特点。

基于HPLC指纹图谱和网络药理学的消炎退热颗粒质量标志物(Q-Marker)预测

目的基于指纹图谱和网络药理学方法,分析预测消炎退热颗粒质量标志物(quality markers,Q-Marker)。方法采用HPLC法,以秦皮乙素为参照,建立20批消炎退热颗粒的指纹图谱。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)对20批样品进行相似度评价,确定共有峰。通过与单味药材溶液和混合对照品溶液色谱峰进行对比,对共有峰进行药味归属,并指认化学成分。采用聚类分析进行分类评价,运用有监督模式偏最小二乘法-判别分析筛选出造成组间差异的主要标志性成分。采用网络药理学筛选和分析消炎退热颗粒相关的作用靶点和通路,构建“成分-靶点-通路”网络图,预测消炎退热颗粒的Q-Marker。结果成功建立21个共有峰的指纹图谱,筛选出4个差异成分可作为消炎退热颗粒差异标志物,分别为秦皮乙素、新绿原酸、菊苣酸和咖啡酸,作为网络药理学研究对象。网络药理学结果显示筛选出4种差异成分均可作为潜在Q-Marker。结论建立的HPLC指纹图谱分析方法准确度高、稳定性好,较全面、直观地反映了消炎退热颗粒整体化学成分信息,筛选出4个可作为消炎退热颗粒潜在Q-Marker的化学成分,为消炎退热颗粒质量的全面控制提供参考,同时也为消炎退热颗粒药效关联物质基础的研究及作用机制的探索奠定基础。