原代大鼠海马神经元的高效转染

用原代大鼠海马神经元为模型,对新型电转染方法Nucleofector^(TM)与脂质体DOTAP和Lipofectaimine^(TM)的转染效率和转染前后细胞存活率进行比较研究,探讨Nucleofector^(TM)的高效性与可靠性。从E18胎鼠海马中取出神经元进行体外培养,并用神经微丝(NF)抗体进行免疫细胞化学染色鉴定细胞类型。分别用DOTAP,Lipofectamine^(TM) and Nucleofector^(TM)包裹pCMV-eGFP质粒转染原代大鼠海马神经元。神经元的存活率用流式细胞促检测。实验结果表明:DOTAP和Lipofectamine^(TM)的基因转染效率仅为1.55％和2.45％,而Nucleofector^(TM)的转染效率则超过20％;细胞转染前后的存活率在DOTAP组分别为98.37％和88.35％,Lipofectamine^(TM)组分别为98.37％和90.11％,而在Nucleofector^(TM)组中分别为98.37％和51.82％。上述实验数据表明:Nucleofector^(TM)转染技术能高效并安全地转染原代大鼠海马神经元,但死亡率较高。

大鼠短暂脑缺血术后行为学的评价

目的 观察大脑中动脉阻塞 (MCAO) 2h造成的短暂脑缺血大鼠 (MCAO大鼠 )行为学表现。方法 采用插线法阻塞成年SD大鼠大脑中动脉制作短暂脑缺血模型 ,分别对模型大鼠进行神经行为学、四肢协调性及学习记忆能力检查 ;术后第 14天处死大鼠取脑组织进行四氮唑红 (TTC)染色鉴定模型的成功与否。对照组不进行动脉阻塞。结果 术后 1h至第 14天 ,MCAO大鼠与对照组比较 ,在神经行为学、协调性及学习记忆能力等方面均有明显的缺失和障碍 (P <0 0 1)。结论 采用插线法制作的大鼠短暂脑缺血模型操作简单 ;术后动物行为学实验是 1种半定量分析 ,具有敏感、客观的特点 ,能够广泛应用于各种实验研究。

A20基因在神经母细胞瘤细胞系中的抗凋亡作用

目的A20基因是一种肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导下的原始反应基因。其编码的锌指结构蛋白在抑制NF-κB和TNF-α介导的细胞凋亡方面得到了广泛的研究。但对于其在神经系统中的作用研究较少。该实验采用脂质体转染及克隆筛选将A20基因导入神经母细胞瘤(SY-SH-5Y细胞系)中,通过体外实验观察A20-SY-SH-5Y细胞在抗凋亡方面的表现。方法SY-SH-5Y细胞系转染A20基因后,应用肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激,采用流式细胞仪(FACS)测定细胞的死亡率,并进行DNA片断化分析(DNA Ladder)。结果实验表明:转染A20的SY-SH-5Y细胞系在TNF-α的诱导下死亡率小于对照组转染pCDNA3基因的SY-SH-5Y细胞系(P<0.05)。结论A20作为一种在细胞抗凋亡过程中发挥关键作用的基因,能够在神经母细胞瘤SY-SH-5Y细胞系中表现出较强抗凋亡能力,为临床上许多以凋亡为主要表现的神经系统疾病的治疗提供了新思路。

小剂量链脲霉素(STZ)诱导hFasL转基因小鼠发生糖尿病的研究

目的 探讨人类Fas基因配体 (hFasL)和Fas基因在糖尿病的发生过程中的作用。方法 利用hFasL转基因小鼠 ,用低剂量的链脲霉素 (STZ)来诱导糖尿病。应用RT PCR鉴定hFasL在转基因小鼠的胰岛中的表达。利用血糖的测定和免疫组织化学染色的观察来认定糖尿病的病变程度。结果 hFasL转基因小鼠在胰岛组织中可以表达FasL ,通过血糖的测定和胰岛组织免疫组化染色 ,证实它们相对于普通的同品系的小鼠更容易被低剂量的STZ诱导而患病。结论 Fas和FasL在糖尿病的发生过程中起着很重要的作用。

内镜引导下手术切除内耳道内听神经鞘瘤

目的 探讨内镜技术在切除内耳道（IAC）内听神经鞘瘤术中的价值.方法 对4年来21例听神经鞘瘤患者,进行显微手术切除长入桥小脑角部分的肿瘤后,不磨除IAC后壁而直接采用内镜引导下切除IAC的残余肿瘤.术中在切除IAC内肿瘤前、后刺激IAC口处面神经,记录肌电图.术后1～3个月复查MRI及面神经功能评定,得出IAC内肿瘤全切率和面神经解剖保留率.结果 21例患者IAC内肿瘤全切除18例;IAC段面神经解剖保留16例.全部病例无死亡,无术后脑脊液漏.结论 对IAC明显扩大的听神经鞘瘤患者,采用不磨除IAC骨结构,使用合适的成角手术器械,在内镜辅助下直接切除长入IAC内的肿瘤可获得较好的治疗结果,且可避免术后脑脊液漏等并发症的发生.

三叉神经痛的治疗进展

三叉神经痛是一种临床上常见疾病 ,其特点是面部发作性的剧烈疼痛 ,患病率高达 182 .8/10万人。笔者综述了目前临床上比较常用的治疗方法 ,包括 :经皮穿刺三叉神经池或神经干药物注射术、微血管减压术、经皮射频热凝术、三叉神经痛的伽玛刀治疗等。尽管治疗方法很多 ,但目前尚无一种令人满意的方法 ,需要临床工作者进一步深入研究。

缺血性脑损伤后大鼠脑中脂质体介导外源基因的表达

目的 探讨在短暂、局灶性脑缺血后 ,脂质体介导的外源基因能否在大鼠脑组织中有效的表达。方法 将大鼠一侧大脑中动脉栓塞 1h以制作短暂、局灶性脑缺血模型。根据行为实验来判定模型制作是否成功。将含报告基因LacZ的质粒和脂质体的复合体注入实验组大鼠的脑脊液中 ,对照组只注射脂质体。 7d后取动物脑组织 ,通过组织化学和逆转录酶 多聚酶链反应 (RT PCR)等方法来鉴定外源基因是否表达。结果 转染LacZ基因的缺血性脑损伤大鼠脑组织中 ,其表达产物 β 半乳糖苷酶在皮质、皮质下区域的细胞及脉络丛中均呈阳性表达 ;在缺血中心区域 ,表达 β 半乳糖苷酶的细胞数很少 ;在缺血周边区域 ,表达β 半乳糖苷酶的细胞数较多 ;而非缺血区域表达 β 半乳糖苷酶的细胞明显较缺血中心区域为多 ;其脑组织中LacZmRNA在RT PCR实验中亦呈阳性。只注射脂质体的缺血大鼠脑组织中 ,β 半乳糖苷酶和LacZmRNA的检测均为阴性。 结论 缺血性脑损伤发生后 ,脂质体介导的外源基因可在脑组织中有效表达。脂质体介导的基因转染可能是治疗缺血性脑损伤的一种有效方法。

大鼠三叉神经痛模型的建立

目的:建立类似人类原发性三叉神经痛的大鼠模型。方法:雄性SD大鼠在YZ20-T6同光路手术显微镜直视下用铬肠线结扎眶下神经达到局部压迫的效果,术后两周行行为学观察并测量各组疼痛反应阈值,术后10周行病理形态学检查。结果:结扎眶下神经约两周后,大鼠对疼痛刺激反应的敏感性增加,疼痛反应阈值模型组与对照组比较有显著性差异(P<0.01);其病理表现类似人类三叉神经痛的神经病变脱髓鞘改变。结论:对大鼠三叉神经根慢性压迫性损伤可造成三叉神经痛样大鼠模型,其病理表现为三叉神经根的脱髓鞘改变,三叉神经半月节细胞未见明显异常改变。

岩斜区脑膜瘤的显微手术入路选择和手术技巧(附23例报道)

目的探讨岩斜区脑膜瘤的手术入路选择及手术疗效。方法回顾性分析2014年11月至2015年11月手术治疗的23例岩斜区脑膜瘤的临床资料,其中颞下经天幕入路15例,枕下乙状窦后入路8例。结果肿瘤全切除17例,部分切除6例。术后发生肺部感染1例、动眼神经麻痹和面瘫3例、颞叶水肿伴出血2例。术后随访6～18个月,中位数13个月;全切肿瘤无复发,残余肿瘤无进展;末次随访KPS评分较术前明显提高(P<0.05)。结论岩斜区脑膜瘤应制定个体化的、以手术为中心结合放化疗的综合治疗方案,以病人的生存质量为导向,将提高病人的生存率的同时保证生活质量为最终目标。

大棚桃主干形整枝与多效唑处理效应

大棚桃在密植条件下 ,采用主干形整枝方式和多效唑处理 ,实现了半成苗当年定植、当年成形、当年开花和结果的目标。株均花量 82 5个 ,定植 13～ 15个月 ,666.7m2 (亩 )产量达 10 0 0～150 0 kg。还提出了不同桃品种多效唑的使用浓度、时间和次数。

脂肪组织来源的多能干细胞培养和外源基因的表达

目的研究脂肪组织来源的多能干细胞(ADMSCs)体外长期培养和外源基因的表达。方法 常规方法培养脂肪组织来源的多能干细胞,细胞免疫化学方法对未分化的细胞进行鉴定。用不同的物质诱导脂肪组织来源的多能干细胞向脂肪细胞和成骨细胞方向分化。用Ad5βgal转染脂肪组织来源的多能干细胞。结果从成年大鼠的脂肪组织中培养出多能干细胞,在体外生长形态类似成纤维细胞,可以维持未分化状态稳定增殖,体外扩增可超过10代。细胞表达波形蛋白。在不同物质的诱导下,干细胞可分化为脂肪细胞和成骨细胞。脂肪组织来源的多能干细胞体外可稳定表达外源基因。结论 由脂肪组织来源的多能干细胞可在体外培养并稳定增殖,能够表达外源基因,有潜力作为自体移植的一种细胞来源和基因治疗的一种载体。

脂肪组织源性基质细胞表达神经元表型的实验研究

目的探索脂肪组织来源的基质细胞向神经细胞分化的可能性,为神经移植探寻新的细胞来源。方法常规培养脂肪源性基质细胞,应用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定,半定量RT-PCR对神经细胞相关的标志物巢蛋白、神经微丝和神经元特异性烯醇化酶进行分析。结果脂肪组织源性基质细胞可以向神经元样细胞分化, RT-PCR证明脂肪源性基质细胞中有巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶的mRNA的表达。结论脂肪组织源性基质细胞可以表达神经细胞的标志物,在体外能够分化为形态复杂的神经元样细胞,这种细胞有可能成为神经移植的种子细胞来源。

细胞移植治疗中枢神经系统脱髓鞘疾病的进展

中枢神经系统脱髓鞘是多发性硬化、脑自质营养不良及脊髓损伤的主要病理改变,导致神经系统功能缺失。动物实验中,将神经系统参与髓鞘形成的细胞植入脱髓鞘部位,取得了一定的冶疗效果。目前用于移植的细胞主要有少突胶质细胞前体细胞、雪旺细胞、嗅球成髓鞘细胞等。随着近年来对神经干细胞研究的不断深入,少突胶质细胞前体细胞被认为是最有前途的供体细胞。不足之处在于对于成年慢性脱髓鞘动物模型移植后的复髓鞘程度的定量描述非常有限,有待于进一步研究。