温里祛寒中药方剂抗寒活性成分筛选及药效学验证

目的基于中医“治寒以热”辨证理论和温里祛寒方剂温中散寒的功效,对温里祛寒方中抗寒活性成分筛选并进行体外药效学验证。方法基于大数据分析温里祛寒方剂药材分布特性;通过系统药理学方法进行活性成分的虚拟筛选和关键靶点的富集分析。建立体外BCPAP细胞低温联合缺氧模型,通过代表成分的细胞活力及调控活性氧水平、抗凋亡/坏死情况进行体外药效学验证。结果共收集到温里祛寒方剂147方,涉及中药材153味,药性主要为温/热、辛/苦,归脾肾肝经,具有生热、发散风寒之功效;药材中的化学成分主要参与细胞对外界物质及环境刺激的反应、体温调节等生物过程和HIF-1信号通路、细胞凋亡、甲状腺激素合成等信号通路的调节。体外药效学结果显示,代表成分阿魏酸、姜黄素、肉桂醛、6-姜酚、甘草苷能够有效抑制低温联合缺氧诱导BCPAP细胞活力的降低,改善细胞氧化应激水平和凋亡/坏死情况(P<0.05)。分子对接结果显示活性成分与关键蛋白具有良好的结合活性(结合能<-5.0 kcal·mol^(-1))。结论温里祛寒方剂及其活性成分能够帮助机体应对低温刺激,其抗寒作用与改善包括甲状腺在内的神经内分泌系统损伤相关。

干姜干热药性活性分子的筛选与抗小鼠低温冻伤的甲状腺氧化应激保护作用机制

目的 探讨干姜干热药性的药理特点及对低温冻伤的保护作用。方法 以甲状腺功能评价为研究内容,建立低温冻伤小鼠模型(-20±1)℃,通过形态学与分子生物学等手段评价干姜醇提物对小鼠低温冻伤的保护作用,通过系统药理学方法筛选出活性成分与关键靶标。建立体外人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞氧化损伤模型并评价相关活性分子的保护作用。结果 系统药理方法筛选出姜黄素等代表性成药分子,预测靶标富集在甲状腺激素信号通路、FoxO通路等5条信号通路。干姜醇提物显著延长低温冻伤小鼠的生存时间,升高血清中游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)和游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)水平(P<0.05、0.01),上调小鼠甲状腺功能相关基因钠/碘协同转运蛋白(sodium/iodide cotransporter,Nis)、甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase,Tpo)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)m RNA表达水平(P<0.01),下调促甲状腺素受体(thyroid stimulating hormone receptor,Tshr)m RNA表达水平(P<0.01),改善低温导致的甲状腺滤泡破损。体外实验发现干姜代表成分姜黄素、6-姜酚对H2O2诱导的BCPAP细胞损伤有显著保护作用(P<0.05、0.01)。结论 干姜及其活性成分姜黄素、6-姜酚能够通过抗甲状腺氧化应激、促甲状腺功能从而保护小鼠低温冻伤。