消退素D1对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节炎症的作用

目的：研究消退素D1（Resolvin D1,Rv D1）对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）炎症的影响及内在机制。方法：选取30只雄性大鼠建立非压迫性腰椎间盘突出症模型。随机分为假手术组、模型组、Rv D1组（100 ng）。术后连续3天模型组和Rv D1组分别鞘内注射10μl磷酸盐缓冲液、Rv D1。于术前1天及术后连续7天检测各组大鼠术侧50%缩足阈值（50%paw withdrawal threshold,PWT）。术后第7天,酶联免疫吸附测定术侧L5 DRG中TNF-α和IL-1β的蛋白表达量,免疫组化法检测DRG中p-ERK及NF-κB/p65的阳性表达。结果：术后各时间点,模型组大鼠50%PWT较假手术组明显降低（P〈0.01）;TNF-α和IL-1β表达明显升高（P〈0.01）;p-ERK、NF-κB/p65蛋白水平明显升高（P〈0.01）。术后第2~7天,Rv D1组与模型组相比,50%PWT显著升高（P〈0.05）;TNF-α和IL-1β的蛋白表达明显降低（P〈0.01）;p-ERK及NF-κB/p65蛋白水平明显降低（P〈0.01）。结论：Rv D1促进背根神经节炎症的消退,可能与调节炎症介质TNF-α和IL-1β的表达及ERK和NF-κB/p65通路活性有关。

神经病理性疼痛大鼠脊髓IL-33蛋白表达的变化

目的：观察外周神经慢性压榨性损伤（chronic constrictive injury,CCI）大鼠脊髓白介素-33（interleukin-33,IL-33）表达的变化规律。方法：雄性Wistar大鼠60只,分为手术组和假手术组,每组30只,于CCI前1天、CCI后第1、4、7、14、21天各时间点测定机械痛阈及热痛阈后立即处死大鼠,每个时间点5只,取L4~6脊髓,采用Western blot方法测定IL-33的蛋白表达变化。结果：手术组大鼠术侧机械痛阈及热痛阈明显降低,脊髓IL-33水平表达增加,明显高于对侧和假手术组术侧;IL-33蛋白水平于CCI后第1天开始增加,第7天达到高峰（P〈0.01）,于CCI后第21天仍维持于较高水平（P〈0.05）。结论：CCI致大鼠脊髓IL-33活化,参与神经病理性疼痛的调控过程。

脂氧素A4缓解非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠根性神经痛的作用机制

目的探讨脂氧素A4缓解非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠根性神经痛的作用机制。方法雄性SD大鼠48只随机均分为四组。S组仅暴露相应手术操作部位,术后连续3 d鞘内注射生理盐水10μL/d。M、A和B组建立非压迫性腰椎间盘突出症模型后,分别连续3 d鞘内注射生理盐水10μL/d、含脂氧素A410 ng/d和脂氧素A4100 ng/d的生理盐水10μL/d。比较四组术前1 d和术后7 d的大鼠右侧后肢50%缩足反射阈值(PWT)。RT-PCR法和Western blot法分别检测术后第7天四组大鼠右侧L_(4)~L_(6)段脊髓背角组织炎症因子mRNA表达和NF-κB/p65蛋白表达。结果与S组比较,M、A、B组术后各时间点50%PWT均降低(P<0.05)。与M组比较,A组和B组术后各时间点50%PWT升高,且B组升高更明显(P<0.05)。与S组比较,M、A、B组TNF-α、IL-1βmRNA表达和NF-κB/p65蛋白表达升高,而转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达降低(P<0.05)。与M组比较,A组和B组TNF-α、IL-1βmRNA表达和NF-κB/p65蛋白表达降低,而TGF-β1 mRNA表达升高,且B组变化更明显(P<0.05)。结论脂氧素A4可以缓解非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠根性神经痛,其作用机制可能与调节炎症介质表达和抑制NF-κB/p65活性有关。

臭氧对腰椎间盘突出症患者髓核NO和IL-6水平的影响：离体实验

目的 评价臭氧（O3）对腰椎间盘突出症患者髓核NO和IL-6水平的影响.方法 经椎间孔镜取出16例腰椎间盘突出症患者的髓核,每个髓核均分为3份,采用随机数字表法,将其分为3组（n=16）：对照组（C组）不施加任何干预;O320μg/ml组（O320组）和O340μg/ml组（O340组）分别注入20 μg/ml O3和40 μg/ml O3各2 ml.20 min后体外培养72 h,收集培养液,采用硝酸酶还原法检测NO浓度,采用ELISA法检测IL-6浓度;采用实时荧光定量PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS） mRNA和IL-6 mRNA的表达水平.结果 与C组比较,O320组和O340组髓核培养液NO和IL-6的浓度降低,髓核组织iNOS mRNA和IL-6 mRNA的表达下调（P＜0.05）;O320组和O340组间上述指标比较差异无统计学意义（P＞ 0.05）.结论 O3治疗腰椎间盘突出症患者腰腿痛的机制与其减少椎间盘NO合成和降低局部炎性反应有关.

慢病毒介导RNAi沉默大鼠脊髓神经元NF-κB p65基因的观察

目的 构建NFκBp65基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体并转染体外培养的大鼠脊髓神经元,观察其沉默效率。方法 针对大鼠NFκBp65基因特异性序列,设计3条NFκBp65siRNA序列及1条阴性对照序列,合成包含各正反义靶序列的互补DNA链,退火形成双链DNA,插入到经BamHI和EcoRI酶切后的pFUGW慢病毒载体中,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定。与慢病毒包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0通过lipofectamine2000共转染至包装细胞293T,经滴度测定后转染体外培养的大鼠脊髓神经元。实验分为5组：阴性对照组、LVNC组、LVshNFκBp651组、LVshNFκBp652组和LVshNFκBp653组,观察转染效率,Westernblotting法检测慢病毒表达载体对神经元NFκBp65基因的沉默效应。结果 测序结果证实合成的寡核苷酸链插入正确,重组载体构建成功,测定病毒滴度为108～9TU/mL,慢病毒重组体能够成功转染大鼠脊髓神经元,转染效率大于90%,与阴性对照组或LVNC组比较,LVshNFκBp651组和LVshNFκBp652组NFκBp65蛋白的表达明显下调（P均〈0.01）,而LVshNFκBp653组无明显下调（P〉0.05）。结论 成功构建了大鼠神经元NFκBp65基因的RNAi慢病毒载体,它可使大鼠脊髓神经元NFκBp65基因表达下调。

消退素D1对突出髓核所致根性神经痛的影响

目的研究消退素D1对突出髓核所致根性神经痛的影响及内在机制。方法选取56只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，按照随机数字表法分为假手术组、模型组、消退素Dl10ng组、消退素Dl100ng组，每组14只，建立非压迫性椎间盘突出症模型。术后1d、2d、3d，假手术组和模型组分别注射磷酸盐缓冲液（PBS）10μl，消退素D110ng组和消退素D1100ng组分别注射含有消退素D110ng和100ng的PBS10μl。于术前1d及术后连续7d分别检测各组大鼠术侧后肢50％缩足阈值（PWT）。术后7d，取大鼠脊髓组织经酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）和白介素10（IL-10）的蛋白表达量，采用蛋白质印记Western blot法检测脊髓组织中细胞外信号调节激酶（ERK）核转录因子NF-κB／p65（NF—κB／p65）的含量变化。结果术后1d至7d，模型组大鼠50％PWT较假手术组明显降低（P〈0．05）；术后3d、4d、5d、6d、7d，消退素10ng组与模型组比较，50％PWT显著升高（P〈0．05）；术后2d、3d、4d、5d、6d、7d，消退素100ng组与模型组比较，50％PWT显著升高（P〈0．05）。与假手术组比较，模型组大鼠TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平明显升高（P〈0．05），IL—10的表达水平明显降低（P〈0．05）；与模型组比较，消退素10ng组和消退素100ng组的TNF—α和IL-1β的蛋白表达水平明显降低（P〈0．05），IL-10的表达水平明显升高（P〈0．05），且消退素100ng组的蛋白含量下降更显著（P〈0．05）。与似手术组比较，模型组p-ERK、NF—κB／p65蛋白水平明显升高（P〈0．05）；与模型组比较，消退素10ng组和消退素100ng组p-ERK及NF-κB／p65蛋白水平明显降低（P〈0．05），且消退素100ng组降低的更明显（P〈0．05）。结论消退素D1通过蒯节炎症介质表达及p-ERK和NF—κB／p65通路的活性，促进神经根炎症的消退，为治疗腰椎间盘突出症提供了新的思路．

误诊喉肿物的复发性多软骨炎1例及文献复习

1临床资料仕某,男,51岁,因“呼吸困难2年,加重半年”于2018年1月18日就诊于青岛大学附属医院。患者6年前因“声嘶1年余,加重伴呼吸困难半年”就诊于我院,行电子喉镜检查示:左侧披裂向中线移位,喉室饱满,声带固定,未见新生物;颈部增强CT示:左侧喉旁间隙肿物,边界欠清。初步诊断:喉肿物,并于全麻下行支撑喉镜下喉肿物活检+喉裂开喉肿物活检+气管切开术+气管成形术,病理结果示:(左室带旁)增生的纤维组织伴纤维化、轻度慢性炎,部分区域软骨岛形成(软骨化生?)及小片状骨样组织,未见恶性特征。术后恢复情况良好,定期门诊复查,1年后顺利拔除气管套管。