咖啡果小蠹生物学特性及发生动态

咖啡果小蠹(Hypothenemus hampei)是近年来新入侵我国大陆的一种检疫性害虫,对我国咖啡产业的健康发展具有巨大的潜在威胁。本研究旨在明确该虫的生物学特性及田间发生规律,为后期开展监测预报和综合治理提供理论基础。在室内饲养条件[(26.5±1)℃,相对湿度为75%±5%,光照14L∶10D]下,观察咖啡果小蠹各龄期的形态特征、发育历期及繁殖能力,并结合田间观察明确该虫的年生活史;2021—2022年通过田间系统调查,分析该虫在海南省万宁市的发生动态规律及空间分布类型,旨在明确该虫的生物学特性及田间发生规律,为后续进行综合防治提供理论依据。结果表明:咖啡果小蠹卵、幼虫、蛹和成虫的发育历期分别为(6.75±0.65)、(17.41±1.63)、(6.45±1.15)、(42.74±9.55)d,平均世代历期为(73.35±11.26)d。各龄期主要形态特征为:卵椭球形,乳白色,表面光滑有光泽;幼虫通常呈“C”字型,乳白色,略透明,头部呈褐色,无足;蛹初期为乳白色,后期变为褐色,头部藏于前胸背板之下;成虫体呈圆柱形,暗褐色到黑色,有光泽,雄虫比雌虫小。雌成虫通常在黑暗条件下产卵,单雌产卵量为(11.85±1.69)粒,雌雄比为10.25∶0.95。室内和田间观察结果表明,咖啡果小蠹在海南1年发生7代,无明显越冬现象。2021—2022年田间调查结果表明,1月开始咖啡果小蠹种群数量缓慢上升,4—5月咖啡果小蠹发生率呈暴增状态,最高可达到60.15%,5月升至顶峰后又急速下降,6—10月始终维持在相对稳定的水平,11月种群数量又呈增长状态,出现一个小高峰,达到19.87%,12月有所下降但至次年3月均呈现缓慢增长态势,咖啡果小蠹的发生率与上一年遗留的果实数量有关。对空间和方位的调查结果表明,果实发育期内咖啡果小蠹在空间上偏好中层(0.5~1.0m)果实,在方位上偏好东和北2个方向,可能与光照和温度有关。通过4种聚集度参数的结果显示,咖啡果小蠹在水平方向和垂直方向均属于聚集分布。

20种卵菌杀菌剂对海南万宁胡椒瘟病菌的室内抑菌活性

胡椒Piper nigrum L.是我国重要的热带经济作物,胡椒瘟病是危害其生产的第一大病害。为了明确胡椒主产区海南万宁瘟病病原菌种类,筛选具有防控潜力的杀菌剂,本研究采用形态特征和ITS序列特异性相结合的方法,对采自海南万宁的7株胡椒瘟病样品进行病菌的分离鉴定,并采用生长速率法检测我国当前登记的20种杀卵菌剂对其菌丝生长的室内毒力。结果发现,3株从海南万宁地区分离的胡椒瘟病菌均为辣椒疫霉Phytophthora capsici;20种卵菌杀菌剂中抑制胡椒瘟病菌菌丝生长活性最高的是吡唑醚菌酯、氟啶胺、福美双、烯酰吗啉、氰霜唑、甲霜灵等药剂,EC_(50)<1μg/mL;其次是喹啉铜、百菌清、代森锰锌、代森锌、氢氧化铜等药剂,1μg/mL<EC_(50)<10μg/mL;然后是氧化亚铜、王铜、嘧菌酯、香芹酚、霜脲氰、小檗碱等药剂,10μg/mL<EC_(50)<50μg/mL;几丁聚糖和三乙膦酸铝最低,EC_(50)>300μg/mL。该结果可为热带辣椒疫霉机理研究和防控技术开发奠定基础。

新入侵害虫咖啡果小蠹防治研究进展

咖啡果小蠹(Hypothenemus hampei Ferrari)是对世界咖啡生产危害最严重的害虫,也是我国进境植物检疫性有害生物之一,自2019年入侵我国海南以来,给当地咖啡产业造成了巨大损失。文章综述了近年来国内外对咖啡果小蠹的相关研究,从传播入侵、为害特性、生活史等方面进行了介绍,并从农业防治、物理防治、生物防治、化学防治和综合治理(IPM)等方面对咖啡果小蠹的防治技术进行了总结,对今后的研究方向进行了展望,旨在深入了解该入侵害虫的基本信息,为制定相应监测技术和防治措施提供参考。

肉桂精油及其复配物对砀山酥梨保鲜效果

采用涂膜处理和低温冷藏(0～2℃)相结合的方法,测试了肉桂精油及其与壳聚糖和CaCl2复配对砀山酥梨的保鲜效果。结果表明,肉桂精油及其与壳聚糖和CaCl2复配对砀山酥梨采后贮藏具有明显的保鲜作用,其中以60μL/L肉桂精油+1%壳聚糖+1%CaCl2配比的复合物保鲜效果最好,可显著延缓砀山酥梨采后口感和风味的变化,可使呼吸高峰较对照推迟10d出现,并能显著抑制丙二醛(MDA)含量的增加及相对电导率和多酚氧化酶(PPO)活性的上升;贮藏后第40d,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性分别较对照增加238.54%、146.06%,而过氧化物酶(POD)活性较对照降低了55.56%。

丁香叶油及其与壳聚糖和CaCl_2复配对砀山酥梨的保鲜效果

研究了砀山酥梨用丁香叶油及其与壳聚糖和CaCl2复配剂涂膜处理后低温冷藏（0℃～2℃）的保鲜效果。结果表明，丁香叶油及其与壳聚糖和CaCl2复配剂对砀山酥梨具有明显的保鲜作用，其中以DKLO2（40μl／L丁香叶油＋1％壳聚糖＋1％CaCl2）浸涂保鲜效果最好，可显著延缓砀山酥梨采后硬度和可溶性固形物的下降，可使呼吸高峰较对照推迟10d出现，并能显著抑制MDA含量的增加及相对电导率和PPO活性的上升；贮藏至第30天，SOD活性较对照增加95．61％，CAT和POD活性分别是对照的2．22及4．28倍。DKL02浸涂处理可使砀山酥梨的贮存期达7个月。

23种植物提取物对胡椒瘟病病原菌的抑制作用

为了筛选对胡椒瘟病菌具有较好抑菌活性的植物提取物,采用菌丝生长速率法测试了23种热带特有植物提取物对胡椒瘟病菌的抑菌作用。结果表明,供试植物干样提取物浓度为10 mg/mL时,圆滑番荔枝、黄皮、蔓马缨丹、益智、假蒟和酸豆提取物的抑菌活性较好,其中圆滑番荔枝提取物的抑菌率高达100%;当浓度为5 mg/mL时,圆滑番荔枝、黄皮和蔓马缨丹提取物的抑菌率仍超过50%,分别为82.94%、78.39%和74.19%,其对病原菌菌丝生长的EC50分别为1.647 1、2.966 22、.953 4 mg/mL。

锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑菌活性

采用菌丝生长速率法和组织测定法,测定锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌、香蕉枯萎病菌、芒果炭疽病菌和芒果蒂腐病菌的抑菌活性以及20%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病的保护作用。结果表明,锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌具有较好的抑菌活性,在浓度1.5 mg/mL时抑菌率为91.94%,EC50为0.687 5 mg/mL;对芒果炭疽病菌的抑菌率为63.75%,但对芒果蒂腐病菌无抑菌活性。20%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病表现出较好的保护效果,当稀释100倍和50倍时抑制率分别为72.79%和78.91%。

一株产内切菊粉酶菌株培养条件的响应面优化

从新疆石河子盐碱地菊芋生长根际土壤中,分离筛选得到10株具有内切菊粉酶活力的菌株,复筛得到1株高产内切菊粉酶活力菌株,将其命名为G-60。在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman实验法对8个因素进行了显著因素的筛选,结果表明,菊粉浓度、蛋白胨浓度和装液量对内切菊粉酶酶活影响显著;通过最陡爬坡实验及Central Composite Design设计进一步优化,得到最佳发酵产酶条件为:菊粉浓度66.5g/L、蛋白胨浓度29.1g/L、装液量49.38mL,内切菊粉酶活力达24.62U/mL,与优化前相比提高了1.55倍。

响应曲面法优化产外切菊粉酶菌株G-60的发酵条件研究

从新疆石河子盐碱地菊芋生长根际土壤中,分离筛选得到10株具有菊粉外切酶活力的菌株,复筛得到1株高产菊粉外切酶活力菌株,将其命名为G-60。在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman试验法对8个因素进行了显著因素的筛选,结果表明菊粉添加量、酵母膏含量和初始pH值对菊粉外切酶酶活影响极显著;通过最陡爬坡试验及Box-Behnken设计进一步优化,得到最佳发酵产酶条件为:菊粉添加量7.91%、培养基初始pH为6.61、酵母膏含量0.64%,在此条件下,外切酶活达到58.51U/mL,与优化前相比提高2.02倍。

圆滑番荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分的初步分离

采用活性跟踪法对圆滑番荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分进行了初步分离。结果表明:圆滑番荔枝叶乙醇提取物乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病菌的抑制活性最高,从该萃取组分中分离得到化合物松香酸和β-谷甾醇,并测定了其对胡椒瘟病菌的抑菌活性。当两种化合物供试浓度为0.6 mg/mL时抑菌率分别达到了69.21%和61.78%,对胡椒瘟病菌具有一定抑菌效果。

斑兰叶叶部病害病原菌的分离鉴定

斑兰叶作为一种新兴的食品香料备受消费者喜爱,其主要食用部位为叶片,但叶部病害成为影响斑兰叶产业发展的首要制约因素。目前,国内外关于斑兰叶叶部病害的研究鲜有报道,为了对斑兰叶叶部病害开展有针对性的防治工作,本研究通过调查斑兰叶叶部病害发生流行规律,明确叶部病害主要发病时期及病害种类,并对叶部不同病害病原菌进行分离鉴定,为推动斑兰产业发展提供技术支撑。结果表明,斑兰叶叶部病害的发生主要从每年11月中下旬开始到翌年4月结束,对这个时期的不同病害通过病原菌的菌落形态、孢子显微结构观察、真菌通用引物ITS1/ITS4鉴定和致病性测定,采用离体叶片和活体盆栽苗2种方式测定分离的28株菌株的致病性,通过柯赫氏法则验证,最终得到9株致病菌BDC4121、BDC11221、BDC4112、BDC21112、XYS211、LSS112、LSS214、LSS213、LSS221。通过产孢培养基筛选发现致病菌BDC11221在绿豆液体培养基、摇床培养5~7d产孢,LSS214在PDA培养基28℃下恒温培养30 d左右产孢,BDC4121、BDC4112、XYS211、LSS112、LSS221、LSS213在PDA培养基28℃下恒温培养7~10 d产孢;并结合ITS1/ITS4鉴定和孢子显微结构观察,确定9株致病菌主要分布在篮状菌属(Talaromyces)、镰刀菌属(Fusarium)、炭疽菌属(Colletotrichum)、附球菌属(Epicoccum)、拟盘多毛孢菌属(Pestalotiopsis)、拟茎点霉属(Phomopsis)、链格孢属(Alternaria)及Acrocalymma属。下一步将结合多基因组测序技术对致病菌进行分子鉴定研究。

圆滑番荔枝叶乙醇提取物不同萃取组分对胡椒瘟病菌的抑菌活性测定

采用液-液分配法对圆滑番荔枝叶乙醇提取物进行萃取分离,得到石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯等不同萃取组分。采用生长速率法测定不同萃取组分对胡椒瘟病菌的抑制作用。结果表明:乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病菌的抑制作用最强,其中20 mg/mL乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑制率达到74.43%,具有较好的抑菌效果。

马缨丹化学成分及生物活性研究进展

综述了马缨丹在化学成分、医药、工业、农业等方面的研究进展,着重阐述了其在杀虫、抑菌方面的研究概况,以期为马缨丹在植物源农药方面的研究和综合开发利用提供依据。

假连翘提取物对胡椒瘟病菌抑菌活性测定

测定假连翘提取物对胡椒瘟病菌菌丝生长、孢子萌发的抑菌活性及其对胡椒瘟病的防治效果。结果表明:10 mg/mL的假连翘提取物对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑菌率达到100%, EC50为1.495 1 mg/mL,对孢子萌发的抑制率达到62.41%。当假连翘提取物稀释50倍时,对盆栽胡椒瘟病的保护效果达到77.55%,治疗效果较低。可见,假连翘用于防治胡椒瘟病具有较大的开发利用价值。

12种热带植物粗提物对胡椒瘟病的抑菌活性测定

用生长速率法测试了12种热带植物乙醇粗提物对胡椒瘟病菌的离体抑菌活性。结果表明,当供试质量浓度为干样10mg/mL时,鹰爪和马缨丹粗提物对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑菌率均达到90%以上,分别为91.95%和94.32%。可见这2种植物粗提物对供试病原菌菌丝生长具有明显的抑制作用,值得进一步研究开发。

硬枝黄蝉乙醇提取物中抑制胡椒瘟病菌活性成分研究

为研究硬枝黄蝉Allemanda neriifolia Hook.乙醇提取物的抑菌活性,本研究采用减压柱层析、薄层色谱等对其乙醇提取物的抑菌成分进行了初步分离,以胡椒瘟病菌Phytophthora capsici为供试病原菌,测定了不同馏分对胡椒瘟病菌的抑菌活性。结果表明,石油醚萃取组分(AN-LS1)、氯仿萃取组分(AN-LS2)、乙酸乙酯萃取组分(AN-LS3)对胡椒瘟病菌均具有一定抑菌活性,抑制率分别为69.59%、66.73%和15.10%。对3种萃取组分采用活性跟踪分离,发现馏分AN-LS1-05、AN-LS1-06、AN-LS2-03、AN-LS2-04、AN-LS2-05、AN-LS3-02、AN-LS3-03对胡椒瘟病菌抑制率达到了100%,馏分AN-LS2-06、AN-LS2-07和AN-LS3-04抑制率达到了80%。对各馏分进一步分离最终得到AN-LS1-05-04、AN-LS1-07-07、AN-LS2-04-04、AN-LS2-06-05-06、AN-LS3-04-06等16个化合物,其化学结构有待进一步鉴定。

硬枝黄蝉提取物对胡椒瘟病病菌的抑菌活性及抑菌活性成分分离

胡椒瘟病是威胁胡椒产业发展的首要病害,由于长期使用化学农药,易造成病害产生抗药性,并影响胡椒品质。因此,拟从植物源杀菌剂研发的角度对硬枝黄蝉的抑菌活性进行研究。以胡椒瘟病病菌为供试病原菌,采用活性跟踪法对硬枝黄蝉乙醇提取物石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取组分的抑菌活性进行研究。结果显示,硬枝黄蝉乙醇提取物三氯甲烷萃取组分、乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病病菌的抑菌活性较高,抑菌率分别达到了83.40%、96.92%。对乙酸乙酯萃取组分进行进一步分离,得到AN-01~AN-10等10个馏分,其中AN-02、AN-03、AN-04对胡椒瘟病病菌的抑菌活性较高,抑菌率分别达到100.00%、100.00%、81.45%。由结果可知,硬枝黄蝉乙醇提取物乙酸乙酯萃取组分中对胡椒瘟病病菌的抑菌活性主要集中在AN-02、AN-03、AN-04这3种馏分上,下一步将继续对这3种馏分抑菌活性物质进行分离,为研制新型植物源杀菌剂奠定基础。

菊粉酶产生菌的筛选及^(60)Co诱变选育

目的:从新疆石河子盐碱地菊芋生长根际土壤中分离筛选高产菊粉酶活力菌株。方法:通过稀释平板涂布法分离微生物;利用60Co诱变选育,96孔板筛选突变菌株;采用3,5-二硝基水杨酸比色法测定菊粉酶酶活。结果:分离到12株具有菊粉酶活力的菌株,复筛得到1株高产菊粉酶活力菌株,将其命名为G-60;以此菌株为出发菌株进行60Co诱变,利用96孔板对诱变菌株进行筛选,经摇瓶发酵酶活测定,得到1株高产菊粉酶酶活的突变株,酶活达46.62 U/mL,是未诱变菌株酶活的2.72倍。结论:经诱变得到1株高产菊粉酶活力的突变菌株。

圆滑番荔枝抑菌活性成分分离

为进一步分离圆滑番荔枝中抑菌活性成分,以胡椒瘟病菌为供试病原菌,采用硅胶层析柱对圆滑番荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分进行了初步分离。结果表明:从圆滑番荔枝叶乙醇提取物乙酸乙酯萃取组分中分离得到的D1、 D2、 D3、....D10等10种馏分中D1、 D4、 D5、 D7、 D8对胡椒瘟病菌具有抑菌活性,抑菌率分别达到了68.10%、 65.95%、 63.44%、 76.34%和50.18%。对D1组分进一步分离得到D1-1纯化合物,通过核磁共振氢谱、碳谱确定其为棕榈酸酰胺。本研究为进一步研制防治胡椒瘟病的植物源杀菌剂提供依据。

10种化合物对胡椒瘟病菌的抑菌活性测定

以胡椒瘟病菌(Phytophthora capsici)为供试病原菌,用生长速率法测试了10种化合物对其离体抑菌活性。结果表明,当供试浓度为2 000 mg/L时,腈菌唑、戊唑醇、三环唑和嘧霉胺的抑菌活性均达到了60%以上,其中腈菌唑和三环唑抑菌活性最高,抑菌率分别达到了85.16%和100%,对胡椒瘟病菌菌丝生长具有明显的抑制作用,该两种化合物值得进一步研究开发。