基于Aβ学说的抗阿尔茨海默病药物研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种进行性神经退行性疾病,其广泛流行已经成为不容回避的社会公共健康问题,因此开发安全有效的抗AD药物迫在眉睫。目前基于“淀粉样蛋白(Aβ)学说”开发的药物占主流地位,作者从减少Aβ产生、增加Aβ清除、抑制Aβ与神经元结合和抑制Aβ聚集等4个方面简要综述了目前进入临床的基于Aβ学说开发的抗AD药物的研究进展,为进一步研发抗AD药物提供理论依据。

TAT-NEP1-40融合蛋白的表达、纯化及蛋白转导功能的鉴定

为大量获得高纯度具有蛋白转导功能并可以穿过血脑屏障的融合蛋白TAT-NEP1-40,将构建好的表达载体pTAT-NEP1-40转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达后。将融合蛋白进行纯化和复性,鉴定蛋白转导功能。带有重组质粒pTAT-NEP40的大肠杆菌经IPTG诱导后,主要以包涵体形式表达,融合蛋白的分子量大小为14kD,其表达量占菌体总蛋白量的31.59%,纯化后目的蛋白纯度达95.6%,通过免疫组化染色显示融合蛋白可以穿过血脑屏障进入脑组织。上述结果表明利用pTAT-NEP1-40重组质粒,可以成功地表达TAT-NEP1-40;纯化后该蛋白具有穿过血脑屏障的功能,为NEP1-40功能的进一步研究提供了基础。

姜黄素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中NO和S100β水平的影响

目的:观察姜黄素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中一氧化氮(NO)和S100β水平的影响,探讨姜黄素对缺血性脑损伤保护作用的机制。方法:成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组和姜黄素处理组,每组24只。采用线栓法阻断大脑中动脉(MCAO)2h诱导建立暂时性局部脑缺血模型,姜黄素处理组大鼠术前连续3d给予腹腔注射姜黄素溶液,于脑缺血再灌注后24和72h采用TTC染色观察脑梗死体积,硝酸还原酶法和ELISA法分别检测各组大鼠脑组织中NO和S100β水平。结果:与模型组比较,姜黄素处理组大鼠脑缺血再灌流24和72h时脑梗死体积明显减小(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注24和72h时脑组织中NO和S100β水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素处理组大鼠脑缺血再灌注24和72h时脑组织中NO水平明显降低(P<0.05),脑缺血再灌注72h时脑组织S100β水平明显降低(P<0.05)。结论:姜黄素能明显减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的程度,降低脑组织中NO和S100β水平,提示脑组织中NO和S100β水平降低可能与姜黄素的神经保护作用有关。

天麻素预处理对短暂性脑缺血大鼠脑组织S100β表达的影响

目的：探讨天麻素对S100β表达的影响，明确天麻素的神经保护机制。方法采用线栓法阻断大脑中动脉（MCAO）2 h诱导建立暂时性局部脑缺血模型，术前连续3 d给予 SD 大鼠腹腔注射天麻素，免疫组织化染色观察缺血边缘区 S100β阳性细胞数目变化；ELISA 检测血清S100β的浓度。结果天麻素预处理组大鼠S100β阳性细胞数目增加较少，1、3 d与缺血组和生理盐水组比较均有显著差异（ P＜0.05）。 ELISA测定结果显示MCAO后血清S100β含量1 d时迅速升高，3～7 d成倍数下降。天麻素处理组1、3 d大鼠血清S100β浓度明显降低（P＜0.05）。结论天麻素能明显抑制脑缺血再灌注后S100β的过度表达，减轻神经细胞损伤。

Necrostatin-1对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用

目的:研究程序性坏死在阿尔茨海默病(AD)中的作用及Necrostatin-1(Nec-1)对其保护机制。方法:采用25μmol/L Aβ_(25-35)作用于原代培养的小鼠皮层神经元36 h,复制AD细胞模型,分别加入不同浓度的Nec-1进行干预,采用MTT法评价细胞的存活率,试剂盒检测LDH的漏出量,用活细胞碘化丙啶(PI)染色观察细胞坏死的情况,用Western Blot检测细胞的RIPK1、RIPK3和磷酸化MLKL蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率明显降低(P<0.05),上清中LDH含量明显升高,PI阳性细胞数量明显增多,有聚集成团现象,细胞RIPK1、RIPK3和MLKL蛋白表达量水平均明显升高(P<0.01)。Nec-1处理后对Aβ细胞毒性作用有明显的减轻,RIPK1、RIPK3和磷酸化MLKL蛋白表达量较模型组明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:Aβ_(25-35)模拟的AD细胞模型中发生了程序性细胞坏死,Nec-1可能通过对抗程序性细胞坏死发挥神经保护作用。

丰富多样的第二课堂 提升医学生综合能力

在医学生中开展丰富多样的第二课堂活动,如实验兴趣小组、综合设计性实验、科研课题、科技征文和社会实践等,是提升医学生综合能力的有力举措。

高氧平衡盐液对急性一氧化碳中毒致肺损伤的保护作用

目的探索高氧平衡盐溶液(HBS)对急性一氧化碳中毒(ACMP)致肺损伤的保护作用。方法 SD大鼠30只随机分为5组,每组6只。正常对照组(NC组)、ACMP模型组,治疗组根据单次静脉输注HBS的剂量分为10 ml/kg(HBS10组)、15 ml/kg(HBS15组)和20 ml/kg(HBS20组)。模型组与各HBS治疗组采用腹腔注射CO 120 ml/kg建立ACMP模型,NC组给予等量的空气。各组大鼠在静脉输注不同剂量的液体后,即刻从股动脉取血0. 3 ml检测Pa O2和Sa O2。ACMP后24 h取右肺中叶和复叶检测IL-6、TNF-α和总超氧化物歧化酶(T-SOD)、MDA,检测左肺组织病理学。结果 ACMP后1. 5 h SD大鼠产生严重的缺氧状态。模型组肺组织IL-6、TNF-α和MDA含量明显高于NC组(P <0. 01),T-SOD明显低于NC组(P <0. 01);模型组肺组织结构紊乱,间质和肺泡内可见少量红细胞和大量炎性粒细胞聚积。各HBS治疗组肺组织病理损伤明显减轻,与模型组比较,Pa O2、Sa O2及肺组织T-SOD水平均显著提高,肺组织IL-6、TNF-α和MDA含量较模型组均显著降低(P <0. 05或P <0. 01),其中HBS20组降低最为显著。结论 HBS能显著提高ACMP大鼠的Pa O2、Sa O2,对肺损伤具有很好的保护作用,并具有一定的剂量依赖关系。

雷帕霉素上调Beclin 1诱导肝癌细胞死亡的体外研究

目的研究雷帕霉素诱导肝癌细胞死亡的方式以及时效与量效关系。方法锥虫蓝排斥实验分析雷帕霉素诱导肝癌细胞死亡的时效、量效关系;透射电镜技术检测雷帕霉素诱导肝癌细胞死亡方式;Western blot检测Beclin 1表达变化。结果雷帕霉素诱导肝癌细胞死亡具有时效和量效关系;可诱导肝癌细胞的凋亡和自噬性细胞死亡;可上调Beclin 1蛋白的表达。结论雷帕霉素可能是一种新的有效的肝癌化疗药物。

脑缺血后程序性坏死的形态学观察及necrostatin-1的保护作用

目的:观察脑缺血后损伤区发生程序性坏死(necroptosis)的细胞学变化规律,并探讨necrostatin-1(Nec-1)的保护作用。方法:雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、模型组和Nec-1给药组,建立小鼠永久性大脑中动脉阻塞模型,用在体碘化丙啶(PI)染色标记坏死细胞,并分别与NeuN、GFAP和Iba-1双标以判断坏死细胞类型,用免疫电镜观察磷酸化MLKL(pMLKL)的分布,用免疫印迹检测各组损伤区pMLKL的表达情况。结果:脑缺血模型后6h损伤区即出现PI阳性细胞,术后1～3d达到最多,80%与NeuN共标;术后7d时,PI阳性细胞明显减少,主要与GFAP和Iba-1共标;免疫电镜显示脑缺血后3d时pMLKL的胶体金颗粒主要沉积于神经元,而术后7d时主要分布在星形胶质细胞和小胶质细胞。免疫印迹结果显示,模型组损伤区pMLKL的表达较对照组明显升高;与模型组相比,Nec-1给药组pMLKL的表达量明显下降。结论:脑缺血后损伤区随时间变化有不同程度的细胞程序性坏死,Nec-1通过对抗程序性坏死发挥神经保护作用。

苹果原花青素对成骨细胞氧化损伤的保护作用

观察苹果原花青素对过氧化氢(H2O2)引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用。培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的原花青素(20,30,40,50μg/mL),及H2O2(100,200,300,400μmol/L),采用MTT比色试验法观察MC3T3-E1的增殖情况;以40μg/mL的原花青素预处理细胞30 min,后加入300μmol/L H2O24 h,采用EdU试剂盒,碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,活性氧(ROS)检测法,超氧化物歧化酶(SOD)活性检测法以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的ELISA检测法,观察原花青素对H2O2引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用。H2O2作用后,MC3T3-E1细胞的增殖受到抑制,其所产生的碱性磷酸酶(ALP)活性、SOD活性降低,而ROS与TNF-α浓度明显升高,但预先30 min给予细胞原花青素,就可以有效逆转这一趋势,苹果原花青素可有效减轻过H2O2引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤。苹果原花青素有潜在的治疗骨质疏松症作用。

以科研提高教学质量,培养创新医学人才措施与成效

西安医学院作为新升格的医学本科院校，秉承“厚德博学、精益求精”的校训，坚持走内涵发展之路，紧紧围绕“为学校教育教学改革服务”这一中心，努力营造教学和科研相结合的文化氛围，建立了以科研促进教学的新型医学人才培养模式。本文介绍了西安医学院基础医学部细胞生物学与遗传学教研室通过加强科研工作、以科研促进教学改革、培养创新医学人才的措施及成效。

MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制

目的:观察髓样分化因子88(MyD88)抑制肽(MIP)对脂多糖(LPS)激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法:将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组(不进行处理)、LPS组(给予1 mg·L^-1 LPS处理)和不同剂量MIP+LPS组(分别给予25、50和100μmol·L-1 MIP预处理1 h后,再加入1 mg·L^-1 LPS)。采用MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组BV2小胶质细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素18(IL-18)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BV小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)蛋白表达水平。结果:LPS组BV2小胶质细胞体积变大,突起增多,呈阿米巴状;不同剂量MIP+LPS组小胶质BV2细胞活化率较LPS组明显减少(P<0.05或P<0.01)。MTT法检测,与对照组比较,LPS组细胞存活率明显降低(P<0.01);与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞存活率明显提高(P<0.05或P<0.01)。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平及iNOS蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),而IL-4和IL-10 mRNA表达水平及Arg-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:MIP能够抑制活化的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进其向M2型转化,抑制炎症的过度激活。

开展多种形式教研活动 促进学科建设

教研活动主要有集体备课、教学改革与科学研究、精品课程与教学资料建设、师资培养、学术交流和教学反馈等多种形式。认真开展教研活动是完成教学任务、推动教学科研协调发展、促进学科建设、培养高水平实用型人才的保障。

褪黑素对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

目的研究褪黑素(MLT)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其机制。方法将H9c2心肌细胞随机分为对照组、H/R组、MLT组和受体相互作用蛋白激酶3抑制剂(GSK-872)组。对照组用不含药物的DMEM处理,H/R组对H9c2细胞进行缺氧4 h/复氧6 h处理,MLT组和GSK-872组细胞在H/R前2 h分别给予100μmol/L MLT和5μmol/L GSK-872预处理。采用CCK-8法检测细胞活力,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,碘化丙啶(PI)染色观察细胞坏死情况,Western blot检测RIPK3和磷酸化钙离子/钙调蛋白依赖蛋白激酶(p-CaMK)Ⅱ的表达。结果与对照组比较,H/R组细胞存活率显著下降(P<0.01),培养液中LDH含量明显升高(P<0.01),坏死细胞数量显著增多(P<0.01),RIPK3和p-CaMKⅡ蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与H/R组比较,MLT组和GSK-872组细胞存活率明显提高(P<0.01),LDH含量显著降低(P<0.01),坏死细胞明显减少(P<0.01),RIPK3和p-CaMKⅡ蛋白的表达明显下调(P<0.01)。而MLT组与GSK-872组上述指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论褪黑素可减轻H9c2心肌细胞的H/R损伤,其机制可能与抑制RIPK3/CaMKⅡ信号通路有关。

RNA干扰FZD4基因表达对人胶质瘤干细胞自我更新能力的抑制作用

目的:探讨FZD4在人胶质瘤干细胞自我更新能力中的作用,并阐明其作用机制。方法:针对人的FZD4设计了2条短发夹RNA(shRNA)序列,利用慢病毒包装后感染人胶质瘤U251细胞(FZD4shRNA干扰组分为FZD4-shRNA-1#和FZD4-shRNA-2#组),经空病毒感染的U251细胞为对照组。倒置显微镜观察感染的U251细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,通过RT-PCR和免疫印迹法检测各组细胞中FZD4mRNA和蛋白表达水平。利用干细胞培养基筛选出胶质瘤干细胞,采用极限稀释实验观察FZD4shRNA对肿瘤干细胞增殖及自我更新的影响。结果:与对照组比较,FZD4shRNA干扰组FZD4mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,FZD4shRNA干扰组中干细胞形成的神经球直径明显缩小(P<0.01)。极限稀释实验,与对照组比较,FZD4shRNA干扰组干细胞在每个孔中生成至少1个神经球所需要的细胞数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论:通过shRNA下调U251细胞中FZD4的表达后可以显著抑制胶质瘤肿瘤干细胞的自我更新能力。

突触囊泡内吞的分子机制

突触传递是神经系统实现其功能的最基本的方式。神经细胞进行着快速的突触囊泡信息传递而没有耗尽突触囊泡,这主要依赖于突触囊泡在神经末梢进行着精确而快速的内吞作用。本文将主要介绍四种突触囊泡的回收分子机制,网格蛋白介导的经典途径、Kiss-and-run、Bulk endocytosis以及2013年12月在Nature上报道的超速内吞机制。

Nogo-A/NgR通路参与缺血预处理对局灶性脑缺血的神经保护作用

目的 研究Nogo-A/NgR通路参与缺血预处理（IPC）对局灶性脑缺血的神经保护作用.方法 雄性成年SD大鼠随机分为：对照组（C）、缺血预处理组（IPC）、Tat-NEP1-40组和Tat-β-Gal组.大脑中动脉栓塞（MCAO）10min作为IPC,IPC组在IPC后72h建立MCAO致局灶性脑缺血模型.再灌注24h后,对所有动物行神经功能缺损评分（NDS）,并处死大鼠取脑,应用2%TTC染色测定梗死容积和免疫组化研究Nogo-A和NgR表达变化.结果 与C组比较,IPC组显著改善局灶性脑缺血再灌注后24h大鼠的NDS[2（1.5～3）和1（0～2）]（P＜0.01）、减少脑梗死容积[（309.65±54.61）mm3和（65.09±26.06）mm3]（P＜0.01）,NgR拮抗剂NEP1-40可部分逆转IPC的神经保护作用（P＜0.01）,而其溶剂β-Gal对IPC的神经保护作用无明显影响.免疫组化显示Nogo-A和NgR阳性细胞主要位于MCAO后导致的缺血区域,缺血后24h大鼠缺血区域Nogo-A和NgR表达明显增强,IPC可抑制缺血引起的Nogo-A和NgR表达增强.结论 Nogo-A/NgR通路可能参与IPC诱导的脑缺血耐受,保护脑缺血性损伤.

胸腺肽Tβ_4

胸腺肽Tβ4是具有多重生物功能的小肽 ,是肌动蛋白的结合蛋白之一 ,该多肽的基因差异性表达与肿瘤恶变和转移、胚胎发育等关系密切 ,本文综述了胸腺肽Tβ4的研究进展。

“换头术”:是愚蠢?还是疯狂?

"换头术",即头颅移植手术或异体头身重建手术实施于人类已经被提上日程。手术如果成功,这一技术可以实现人类长生的梦想,但也必然给人类社会带来诸多思考,包括安乐死是否还有价值、对人的概念是否需要重新定义、"换头者"对躯体是否出现认同障碍;同时也会给人类社会带来无法回避的挑战,包括"换头者"身份的自我识别和社会管理、头部与躯体的相互猎取、宗教可能随之消亡等。因此,"换头术"是否应该实施于人类,必须思考。

传统教学和PBL模式在医学遗传学教学改革中的应用

在基础遗传学教学中,传统教学发挥主要作用。在临床遗传学的教学中,采用PBL教学模式,极大地调动了学生主动学习的积极性。合理科学地将传统教学与PBL教学模式有机结合,运用到医学遗传学的教学中,则达到优势互补的效果。