PARP-1在染料木素作用小鼠卵泡发生进程中的表达特征

【目的】旨在探究PARP-1信号及其介导的PAR化修饰水平在染料木素促进卵泡发育和抑制卵泡闭锁进程中的相关性,丰富染料木素等类雌激素物质作用于雌性哺乳动物卵巢卵泡发生的作用机制,以期为种畜高产日粮配方的研制提供科学指导。【方法】以21 d雌性昆明小鼠为试验动物,采用腹腔注射25,50,100 mg/kg不同剂量染料木素,每日定点注射1次,连续7 d,采集卵巢组织和血清,采用免疫组织化学法检测PARP-1蛋白在卵巢组织内的表达特征,并运用Western blot对卵巢组织内PARP-1蛋白及pADPr进行定量。结合凋亡指示蛋白Cleaved-caspase3、雌二醇(E2)水平、类固醇合成酶CYP19A1和HSD17B1,综合分析PARP-1信号及其介导的PAR化修饰信号是如何参与染料木素抑制卵泡闭锁、促进卵泡发育进程。【结果】免疫组织化学染色显示,PARP-1阳染主要发生在原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、有腔卵泡中的健康颗粒细胞核和卵母细胞,卵泡膜细胞次之,但在Cleaved-caspase3阳染的凋亡细胞中PARP-1不表达。Western blot结果显示,50 mg/kg染料木素处理组PARP-1解离片段(89 ku)的表达量较对照组显著降低(P<0.05),但PARP-1全段(116 ku)表达量在各剂量组无显著差异(P>0.05)。其次,50 mg/kg染料木素处理组的pADPr的表达量在15 ku以下、25 ku以及35~45 ku这3个区域内均显著低于对照组、25 mg/kg和100 mg/kg剂量组(P<0.05),100 mg/kg剂量组的pADPr仅在25 ku区域处表达量较对照组和25 mg/kg剂量组显著降低(P<0.05)。然而,较对照组,Cleaved-caspase3的表达量在25 mg/kg和50 mg/kg染料木素处理组呈现剂量依赖性下降,且在50 mg/kg剂量组差异显著(P<0.05);E2水平较对照组亦呈现剂量依赖性上升且差异显著(P<0.05),但雌激素合成酶CYP19A1和HSD17B1的表达无显著变化(P>0.05)。【结论】PARP-1广泛存在于哺乳动物卵巢内健康的颗粒细胞、卵泡细胞和膜细胞中,可能通过催化pADPr的合成,介导卵巢内的能量代谢、细胞凋亡以及类固醇激素合成等胞内活动,参与染料木素等类雌激素物质干扰卵巢卵泡发生进程。

染料木素对性成熟前小鼠卵巢卵泡发生动力学的影响

【目的】旨在探究染料木素对性成熟前小鼠卵巢卵泡发生动力学的影响,为畜牧生产尤其是种猪饲养过程豆粕型日粮的合理饲喂以及黄酮类替抗产品的科学应用提供参考。【方法】将40只21日龄昆明小鼠随机分为4组,其中对照组处以0.1 mL的溶剂(含5%DMSO的玉米油),试验组分别处以等体积不同浓度的染料木素(25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg),连续腹腔注射7 d。处理结束后,对部分小鼠进行PMSG-HCG促排并记录输卵管壶腹部的卵子数量,评估卵巢排卵潜能;剩余小鼠采集卵巢制成组织切片进行HE染色,统计分析卵巢内各级卵泡生长和闭锁状态。【结果】输卵管壶腹部成熟卵子数统计显示,染料木素处理组的卵子数量较对照组均显著增加(P<0.05),其中50 mg/kg染料木素组卵子排出数量最多,且显著高于25 mg/kg和100 mg/kg剂量组(P<0.05),而25 mg/kg和100 mg/kg剂量组之间差异不显著(P>0.05)。卵泡计数结果显示,染料木素处理组生长卵泡总数较对照组均无显著差异,但健康生长卵泡显著高于对照组(P<0.05),闭锁生长卵泡则反之(P<0.05)。另外,3个剂量的染料木素处理组中正常原始卵泡的数量均高于对照组,且50 mg/kg和100 mg/kg剂量组较对照组增加显著(P<0.05);而异常原始卵泡的数量在染料木素处理组中均显著下降(P<0.05)。再者,50 mg/kg和100 mg/kg染料木素处理组的多卵母卵泡数量显著高于对照组和25 mg/kg剂量组(P<0.05)。【结论】染料木素以剂量依赖性方式抑制原始卵泡消亡和生长卵泡闭锁,促进生长卵泡发育成熟,从而提高卵巢排卵潜能,其中以50 mg/kg剂量的染料木素效果最佳。