增强组成型重组大肠杆菌质粒稳定性的发酵策略

质粒稳定性是影响基因工程菌外源蛋白表达的重要因素,同时,外源蛋白的表达又影响着质粒稳定性。与诱导型表达系统相比,在组成型表达系统中,由于外源蛋白的持续表达,导致细胞代谢负担加重,质粒稳定性的控制更加困难。通过对组成型大肠杆菌DH5α/pKKFPGA发酵过程的优化,增强了质粒稳定性,发酵结束时,仍然维持在85%左右,表达产物粪产碱杆菌青霉素酰化酶的酶活单位达到23 384 U.L-1。

苹果酒发酵工艺研究

使用新鲜苹果为主要原料,利用市面普遍销售的安琪酵母酿造苹果酒,选取接种量、初始pH、发酵温度等对影响苹果酒品质的3个关键因子,分别以苹果酒感官评分、酒精度和残糖量等3个质量指标,应用L9(34)正交试验设计优化了苹果酒发酵工艺条件,得到以下结论:100 g苹果加水50 mL粉碎过滤,加入酵母量为1.5 g,发酵温度为28℃,发酵时间为24 h,初始pH控制为直接加水,最终酿造出品质优良,酒液透亮,且具有浓郁香味的苹果酒,为优质苹果酒的研究和开发提供了理论依据。

组成型表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶重组大肠杆菌发酵条件研究

目的:对重组大肠杆菌组成型表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA)进行了发酵条件研究。方法:在摇瓶和5L发酵罐中研究了(NH4)2SO4和葡萄糖浓度对质粒的分离稳定性及青霉素G酰化酶表达的影响。结果:该工程菌质粒具有分离不稳定性,培养基中无(NH4)2SO4时发酵过程中pH和糊精水解生成葡萄糖的浓度变化较小,细胞前期(0h-12h)的生长速率降低,质粒分离稳定性和青霉素G酰化酶的表达水平提高。发酵过程中维持低葡萄糖水平可以限制细胞的生长速率,提高质粒稳定性和促进青霉素G酰化酶的合成。采用混合碳源发酵,发酵培养基含糊精2g/L,12h后以1g/L.h恒速流加葡萄糖至35h,控制流加过程葡萄糖浓度0.1g/L左右,平均比生长速率为0.06h-1,发酵结束时质粒稳定性为86%,青霉素G酰化酶的表达水平达23 000U/L。结论:重组大肠杆菌组成型表达青霉素G酰化酶的研究对工业生产有一定指导意义。

生物工程专业细胞生物学教学改革与应用

细胞生物学是生物工程的专业必修课,也是该学科领域内的重要基础理论课。针对当前不同学科交叉融合、相互渗透、快速发展态势,考虑到生物工程专业的培养目标、专业特色和新时期学生特质,结合笔者多年从事细胞生物学的教学经验,就如何激发学生学习潜能、提高学生分析问题与解决问题的能力、开拓学生思维与视野,并在教学中涵养学生人文情怀,对细胞生物学教学内容和教学模式进行改革探索,以适应社会经济对创新型、高素质人才的需求。

恶臭假单胞菌铜抗性操纵子生物信息学分析

用生物信息学方法对恶臭假单胞菌铜抗性操纵子基因相似性,蛋白质的亲疏水性,蛋白质高级结构,蛋白质的功能进行分析。结果表明:恶臭假单胞菌铜抗性操纵子与丁香假单胞菌有较高的同源性,而与大肠杆菌距离较远,这意味着该操纵子可能来源于丁香假单胞菌。

重组人角质细胞因子-2在昆虫细胞的表达及其促角质细胞增殖功能研究

目的:实现重组人角质细胞因子-2在昆虫细胞的高效表达,并对其生物学活性分析进行研究.方法:优化、合成人KGF-2基因序列,并构建昆虫杆状病毒重组表达载体Bacmid-KGF-2,将重组载体转染到Sf9昆虫细胞进行表达,对表达条件(感染时间、感染复数)进行优化,利用镍柱对目的蛋白进行纯化,纯化后得到的KGF-2采用细胞增殖抑制方法检测其生物学活性.结果:成功构建Bacmid-KGF-2重组表达载体,western blot鉴定得到最佳感染复数(MOI)为3,最佳感染时间(TOI)72 h下可对细胞进行扩培.CCK-8显示,低浓度KGF-2可以显著促进HacaT细胞增殖.结论:本研究实现KGF-2在昆虫细胞的高效表达,并获得具有较好生物学活性的KGF-2蛋白,为KGF-2进一步的功能研究奠定基础.