EndophilinⅠ在瑞芬太尼致痛敏大鼠海马组织中表达水平的变化

目的观察Endophilin I在瑞芬太尼致痛敏的大鼠海马组织中表达水平的变化,并研究其在痛觉过敏的作用。方法取12只雄性SD大鼠随机分为2组(每组6只),分为瑞芬太尼组和对照组。采用尾静脉输注瑞芬太尼的方法建立痛觉过敏模型,分别利用Von Frey及Hargreaves法检测瑞芬太尼输注后2h至72h的机械及热刺激撤足阈值变化。采用免疫印迹(Western blot)方法检测大鼠海马组织中Endophilin I、μ阿片受体和NR1的表达变化,并用免疫荧光(Immunofluorescence)观察Endophilin I在大鼠海马组织中的表达定位情况。结果在尾静脉输注瑞芬太尼后,机械及热刺激的结果均显示大鼠的痛觉阈值出现明显下降(P<0.01)。免疫荧光和免疫印迹的结果显示瑞芬太尼的输注可以上调大鼠海马组织中Endophilin I的表达(P<0.01),NR1和μ阿片受体则在免疫印迹的检测结果中分别呈现上调(P<0.01)和下调(P<0.01)的趋势。结论尾静脉输注瑞芬太尼可致大鼠痛觉过敏,使Endophilin I在大鼠海马组织中的表达出现上调,这可能是瑞芬太尼诱导的痛觉过敏的机制之一。

PDLIM5 shRNA质粒构建及其稳定转染SH-SY5Y细胞株的建立

目的构建PDLIM5 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的SH-SY5Y(成神经细胞瘤细胞)细胞系。方法合成PDLIM5基因干扰序列并插到RNAi真核表达载体p GFP-V-RS质粒中,通过酶切和测序进行鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒PDLIM5 shRNA和对照质粒PDLIM5 Scramble经脂质体Lipofectamine 2000介导转染SH-SY5Y细胞,经puromycin持续筛选和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。RT-PCR及Western blot分别检测PDLIM5 mRNA及蛋白表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组获得的干扰真核表达质粒PDLIM5 shRNA与预期完全相同。PDLIM5 shRNA稳定转染SH-SY5Y细胞在荧光显微镜下呈亮绿色。RT-PCR及Western blot检测显示PDLIM5 mRNA及蛋白表达明显下调。结论成功构建PDLIM5 shRNA真核表达载体及其稳定转染SH-SY5Y细胞系,为进一步研究PDLIM5在精神疾病中的功能奠定实验基础。