外源Cd对川芎苓种萌发及幼苗生长的影响

本研究旨在探究不同浓度镉(Cd)对川芎苓种萌发和幼苗生长的影响。采用以石英砂为基质的水培试验,施加不同浓度CdCl 2·2.5 H 2O(0、0.1、0.25、0.5、1、2 mmol/L)溶液处理川芎苓种,研究Cd胁迫对川芎苓种萌发、幼苗生长、生理代谢及Cd含量的影响。结果显示,随着Cd浓度的增加,株高抑制率、根长抑制率上升;根、叶及节盘Cd含量显著升高;株高、根长、叶鲜重、根鲜重下降;抗氧化酶(过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶)活性、非酶系统物质(可溶性蛋白、谷胱甘肽、脯氨酸)含量以及丙二醛含量先升高后降低。研究表明,0.1~2.0 mmol/L Cd对川芎苓种萌发和早期幼苗生长均有明显的毒害作用,随着Cd胁迫浓度的升高毒害作用增强,其中川芎幼苗根对Cd胁迫最敏感。Cd胁迫下川芎幼苗生理生化指标整体上呈现低促高抑的Hormesis效应。川芎幼苗通过提高抗氧化酶活性和非酶系统物质积累,减少膜系统损伤、活性氧蓄积,缓解Cd毒害作用,提高耐受性。

LC-MS/MS测定川牛膝中57种农药残留及风险评估

目的:采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)建立川牛膝中57种农药的测定方法,并采用此方法对348批川牛膝样品进行农药筛查。方法:样品经乙腈提取,分散固相萃取QuEChERS净化,采用LC-MS/MS进行测定,多反应监测模式采集数据,基质匹配外标法定量,采用点评估法对检出结果进行风险评估分析。结果:57种农药线性关系良好,r均大于0.996,57种农药的平均加样回收率为62.5%~113.3%,RSD%均小于10%。348批川牛膝中检出20种农药,其中有4种禁用农药(均未超出限量规定)、6种植物生长调节剂、10种常用农药;风险评估结果显示,川牛膝中农药残留风险较低,植物生长调节剂使用较普遍。结论:该方法简便、灵敏、准确,适用于川牛膝中多农药残留的快速筛查与检测,可为川牛膝的农药风险评估和规范化种植提供数据参考。

中药材及饮片质量控制和评价的关键技术评析

中药材及饮片作为中药产业链条的最前端,其质量评价策略对中药质量的提升具有引领作用。随着现代技术的应用与发展,我国已形成了较为完善的中药材及饮片质量控制体系。笔者结合近年来中药材及饮片质量评价技术的应用现状和产业需求,对质量研究关键技术进行了梳理,强调了过程控制技术在中药饮片规范化生产中必要性,同时探讨人工智能仿生技术所具有的客观化、直观化特点在中药材及饮片检验中应用的可能性,在未来实现中药产业化进程中或具有重要意义。当前,指纹图谱和色谱—质谱联用技术作为代表性的化学成分分析手段,分别在中药材及饮片化学成分整体表征和痕量成分控制方面日益应用广泛;在生物技术应用中,DNA分子鉴定技术突破了传统鉴别手段,从中药种质源头进行质量控制;生物效应技术紧密结合临床功效进行质量评价,弥补了现行质量控制方法与功效相关性不足的特点。每种关键技术均具有其独特的优势,对于中药材及饮片质量的全面控制具有相辅相成的作用。本文对中药材及饮片质量控制的关键技术进行了总结和分析,并提出了相关的建议,以期对保障中药材及饮片的质量稳定及推动中医药大健康产业的可持续发展产生积极的作用。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定麦冬种植土壤中25种植物生长调节剂

建立了超高效液相色谱-串联质谱快速测定麦冬种植土壤中25种生长调节剂的方法。样品经粉碎后,加乙腈提取,离心后过滤,采用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪,在多反应监测(MRM)模式下,采用基质标准曲线外标法定量分析。多效唑等25种生长调节剂在相应浓度下线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.995,方法定量限为2.0~10.0μg/kg。分别在10、20、100μg/kg 3个浓度水平下进行回收试验,回收率为61.4%~116.3%,相对标准偏差(RSD,n=6)均小于10%。本方法具有简单、快速、准确、灵敏等优点,适用于根茎类药材种植土壤中25种生长调节剂的检测。

气相色谱-串联质谱法检测川产丹参中70种农药残留

以中药材丹参为研究对象,通过对样品前处理及色谱分析条件进行优化,建立了丹参中70种禁用及常用农药残留同时检测的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)分析方法,并采用该方法对产自四川不同地市的44批丹参样品进行了农药残留检测筛查。样品加水经乙腈提取,以QuEChERS提取包(含无水硫酸镁与无水乙酸钠等)进行盐析,提取液经浓缩后,加入内标磷酸三苯酯,在多反应监测(MRM)模式下采用GC-MS/MS检测。结果表明:在1~100μg/L范围内,70种农药的质量浓度与其峰面积间呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.9985;在3个添加水平(5×LOD、10×LOD和20×LOD)下,添加回收率在70%~120%内的农药数量占总数的87.1%,相对标准偏差均小于15%。70种农药的定量限在0.01~0.03 mg/kg之间。对收集到的44批川产丹参样品进行检测发现,其中有22批样品分别检出1~5种农药,包括国家禁用农药三氯杀螨醇。该方法简便、灵敏、准确,可用于川产丹参中多种农药残留的快速筛查与检测,检测结果可为丹参的种植生产和流通监管提供参考。

蒲黄中1种新染色掺假色素的确认及9种橙黄色色素的检测方法研究

目的:确认蒲黄中1种新染色掺假色素,并建立同时检测9种橙黄色色素的方法。方法:采用薄层色谱法(TLC)和液相色谱-质谱联用法对新染色掺假色素进行确认;采用TLC和高效液相色谱法(HPLC)检测9种橙黄色色素:色谱柱为Welch AQ-C18,流动相为乙腈-0.05 mol/L乙酸铵溶液(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为432 nm(柠檬黄、皂黄、金橙O、碱性橙Ⅱ)和484nm(日落黄、酸性橙Ⅰ、金橙Ⅱ、橙G、碱性橙21),柱温为35℃,进样量为10μL。结果:金胺O、柠檬黄和新染色掺假色素TLC图斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰;新染色掺假色素为皂黄。柠檬黄、日落黄、橙G、酸性橙Ⅰ、金橙Ⅱ、金胺O、皂黄、碱性橙21和碱性橙Ⅱ的TLC图斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰;检测限分别为0.30、0.20、0.33、0.16、0.19、0.19、0.31、0.26、0.30mg/kg。结论:本研究所建方法可快速准确地对蒲黄中染色掺假色素和橙黄色色素进行定性检测。

QuEChERS结合GC-MS/MS-内标法测定川麦冬中多效唑残留量

目的:建立测定川麦冬中多效唑残留量的方法,并用于检验不同来源的川麦冬药材质量。方法:收集50批不同产地、市场和企业来源的川麦冬样品,样品前处理方法为QuEChERS法,即样品加水经乙腈提取,以QuEChERS提取包(含无水硫酸镁与无水乙酸钠等)进行盐析,提取液再经QuEChERS净化包(含无水硫酸镁、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶、硅胶、石墨化炭黑)净化后加入内标磷酸三苯酯,采用气相色谱-质谱/质谱联用(GC-MS/MS)法测定川麦冬样品中多效唑残留量。色谱柱为DB-5MS,程序升温,检测器为三重四级杆质谱,载气初始流速为1.3 mL/min,采集方式为多反应监测,不分流进样。结果:多效唑检测质量浓度线性范围为1.01～505 ng/mL(r=0.999 7),精密度试验、稳定性试验(24 h)、重复性试验的RSD分别为3.94%、13.62%、7.54%(n=6),方法回收率平均值为111.26%(RSD=5.43%,n=9);在50批样品中的多效唑检测结果为0.02～2.72 mg/kg。结论:建立的多效唑检测方法操作简便、结果准确、灵敏度及重复性好,可用于川麦冬中多效唑残留量的检测;不同来源的川麦冬样品中多效唑残留量相差较大。

QuEChERS-气相色谱-串联质谱法检测鱼腥草中121种农药残留

建立鱼腥草中121种农药残留的QuEChERS-气相色谱-串联质谱方法,并应用于68批样品筛查。对样品前处理和色谱方法进行优化。最终确定样品以乙腈进行提取,QuEChERS法进行净化处理,采用气相色谱-串联质谱在多反应监测模式下进行检测分析。121种农药在一定含量范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9973;3个添加水平进行回收率实验表明,回收率在60%~140%范围内的农药数占总数的90.9%,86.8%的农药相对标准偏差小于15%。121种农药检出限(RSN=3)范围为0.0001~0.1 mg/kg,绝大多数小于0.01 mg/kg。68批样品种共检出27种农药。该方法简便、灵敏、准确,可用于鱼腥草中多农药残留的快速筛查与检测。检测结果为鱼腥草的种植生产和流通监管提供参考依据。

超高效液相色谱-串联质谱法检测半夏不同炮制品中农药残留

基于超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测技术,建立了半夏炮制品中79种禁用及常用农药多残留的检测方法,并采用该方法对采集的217批样品(包括法半夏、姜半夏和清半夏)进行测定。半夏样品经乙腈提取后,以PSA净化,采用UPLC-MS/MS在多反应监测模式(MRM)下进行检测。检测结果通过统计软件进行分析,比较半夏不同炮制品间的差异。结果表明:在1~100μg/L范围内,79种农药的质量浓度与其相应的峰面积间呈现良好的线性关系,决定系数(R2)均大于0.99。在3个添加水平(5×LOD、10×LOD和20×LOD)下,添加回收率在70%~120%内的农药数量占总数的81.0%,相对标准偏差均小于15%(n=6)。79种农药的定量限为0.0001~0.1 mg/kg。217批半夏样品中检出农药27种。统计分析发现,多菌灵和克百威的检出结果在法半夏与姜半夏、法半夏与清半夏间存在显著性差异。本研究所建立的农药多残留测定方法指标针对性较强,操作简单,方法灵敏度高,准确性好。

基于药材性状、产量及有效成分含量综合评价多效唑对麦冬质量的影响

目的:探索多效唑对麦冬药材性状、产量、有效成分含量的影响。方法:随机区组栽培,10月份进行不同梯度水平多效唑处理,翌年4月中旬采收,观察植株性状、收集药材样品。采用GC-MS测定多效唑残留量,HPLC法测定麦冬皂苷D、甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B含量,紫外分光光度法测定总皂苷、总黄酮、总多糖含量,分析施用不同剂量多效唑处理麦冬药材样品与产量、性状、有效成分及多效唑残留量的相关性,综合评价多效唑的施用对麦冬药材产量、性状及质量的影响。结果:随着施用多效唑剂量的增加,麦冬药材性状出现明显变异,由纺锤形变为两端钝圆的椭圆形,直径也随着增大。麦冬药材的产量先升高后降低,总皂苷、总黄酮类成分随之降低,多效唑在药材中的残留量随之增高。结论:多效唑对麦冬药材质量有显著影响,建议在麦冬生产中不使用多效唑。

山莨菪根HPLC指纹图谱研究

目的：建立山莨菪根的HPLC指纹图谱,为其药材质量控制提供一种可靠的方法。方法：采用UltimateAQC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱;以乙腈-10mmol/LKH2PO4缓冲液（用H3PO4调节pH至3.0）为流动相梯度洗脱;流速1.0mL/min;柱温30℃;检测波长210nm;进样量10μL。并对测得指纹图谱进行相似度评价和主成分分析。结果：18批不同山莨菪根样品共确立了15个共有峰,建立了山莨菪根的HPLC对照指纹图谱,结合保留时间和紫外光谱,指认了樟柳碱、东莨菪碱、山莨菪碱、阿托品4个特征峰。18批野生山莨菪根的相似度在0.891~0.987之间。对15个共有峰进行主成分分析,综合评判得分在-0.85~0.89之间。结论：所建立的指纹图谱具有良好的精密度、重复性和稳定性,为山莨菪根的鉴别和质量控制提供了更全面的信息。

生石灰类处理对川芎5种重金属含量及产量和品质的影响研究

探究生石灰类处理对川芎药材重金属含量、产量及质量的影响,筛选适宜的降低川芎重金属含量的方法。在川芎主产区(眉山、彭州)开展大田试验,采收期采收样品,采用微波消解-ICP-MS法测定5种重金属含量;采用药典方法分析浸出物和挥发油;采用HPLC和UPLC法测定6种药效成分含量;利用多元统计分析方法进行差异比较。结果表明,T-1(生石灰6.67 kg/hm^(2))、T-2(生石灰6.67 kg/hm^(2)+磷酸二氢钾1.33 kg/hm^(2))、T-3(生石灰6.67 kg/hm^(2)+淀粉6.67 kg/hm^(2))处理能显著降低川芎Cd含量;T-5(生石灰6.67 kg/hm^(2)+磷酸二氢钾1.33 kg/hm^(2)+淀粉6.67 kg/hm^(2))、T-6(生石灰6.67 kg/hm^(2)+磷酸二氢钾1.33 kg/hm^(2)+聚丙烯酸钠10 kg/hm^(2)+活性炭10 kg/hm^(2))处理能显著降低川芎Pb含量;T-2、T-6处理能显著降低川芎As含量;生石灰类处理后,川芎药材增产0.93%~39.03%,彭州川芎洋川芎内酯A和阿魏酸松柏酯以及眉山川芎阿魏酸和绿原酸的含量不同程度降低,T-2处理能显著增加醇溶性浸出物和洋川芎内酯I含量。相关分析和聚类分析显示,产地和处理方式均对各指标有影响。综合考虑降低重金属效果(主要是Cd)、药材产量及质量,T-1、T-2可作为彭州、眉山川芎生产中降低重金属的方法,T-3、T-4(生石灰6.67 kg/hm^(2)+聚丙烯酸钠10 kg/hm^(2))可分别作为眉山、彭州川芎生产中降低重金属的方法。上述方法的应用可保障川芎药材产量并有效降低药材Cd含量,提高药材安全性,为优质绿色川芎的生产提供理论依据和技术支撑。

不同基源川贝母药材中无机元素的ICP-MS分析

建立川贝母药材中无机元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析方法,并对不同基源川贝母药材中的无机元素进行分析与评价.采用微波消解样品,ICP-MS法同时测定6个基源共计80批川贝母中21种无机元素的含量,并用SPSS 25.0对数据进行主成分分析(PCA)及相关性分析.结果表明,不同基源川贝母药材中无机元素种类组成无差异,但含量差异较大,K、Ca、Fe、Al、Na的含量较高;仅有一批太白贝母中的Cu含量超标,其余均低于限定标准.主成分分析选出6个主因子,得出K、Al、Mo、B、Al、Fe、Pb、Se、Mn、Cd、Cr、Na是川贝母药材的特征无机元素.

麦冬中外源性有害物质的分析

目的分析麦冬中的外源性有害物质。方法采用《中国药典》方法对4个产地(四川、湖北、浙江、山东)麦冬中二氧化硫、重金属及有害元素、农药残留进行测定,GC法对多效唑和多环芳烃残留进行测定。结果 105批样品中仅2批检测出镉超标;34批检测出7种农药残留(溴氰菊酯、杀扑磷、乙酰甲胺磷、克百威、毒死蜱、4,4'-DDE、4,4'-DDT),而且均未超标;二氧化硫超标严重,超标率为23.8%,最高达2 000 mg/kg;多效唑残留量在0.103~25.75 mg/kg之间,均能在川麦冬中检出,浙麦冬中也有个别检出。结论麦冬中的外源性有害物质以二氧化硫和多效唑为主,在生产中需加强控制。

中药材种植中农药使用情况及残留现状分析

目的:对中药材种植病虫害发生特点、农药残留污染现状进行综述汇总,旨在掌握中药材中农药残留情况,进而为中药材中农药监测和管理提出建议。方法:查阅近5年内发表的相关文献并结合本课题组对中药材中农药残留筛查与日常监测情况,整理不同中药材种植过程中农药登记情况、农药残留污染现状等。结果与结论:中药材中农药残留检出率高但残留量较低。现有登记农药种类远不能满足实际种植中的病虫害防治需求,部分药材种植过程中存在农药滥用情况。建议应关注部分药材中植物生长素的使用情况,采用风险评估方法为标准制定和监管提供有力证据;同时,研究低毒的病虫害防治手段,从源头上避免农药污染。

3种形态全缘兔耳草不同药用部位中6种成分测定

目的测定3种形态全缘兔耳草Lagotis integra W.W.Smith全草、地上部位、地下部位中6种成分的含量。方法采用HPLC法,大车前苷、鞭打绣球苷B、10-O-反式-对甲氧基肉桂酰基-梓醇及10-O-[(E)-3,4-二甲氧基肉桂酰基]-梓醇的含量测定采用沃特世X-bridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.4%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长325 nm,梓醇、桃叶珊瑚苷的含量测定采用沃特世Atlantis T3 C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%磷酸(2∶98);体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长210 nm。结果6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9998),平均加样回收率95.5%~101.9%,RSD 0.82%~1.94%。不同形态、药用部位中各成分含量及总量存在差异。结论该方法稳定可靠,可有效控制全缘兔耳草质量,并为该资源开发利用提供依据。

基于皂苷类成分研究鉴别川牛膝及其伪品

目的:改良现行川牛膝质量标准方法的TLC鉴别并新增HPLC-ELSD法,以弥补川牛膝类药材鉴定方法的不足。方法:以川牛膝伪品麻牛膝所含特征性皂苷类成分为线索,依据泡沫实验、TLC鉴别及HPLC-ELSD法建立川牛膝及其伪品的鉴别方法,并对所收集的11批川牛膝、21批麻牛膝及7批杂牛膝样品进行鉴别。结果:泡沫实验中麻牛膝所产生的泡沫最多,其次为杂牛膝,川牛膝最少。TLC鉴别中所有批次的川牛膝均不显与牛膝皂苷Ⅰ、牛膝皂苷Ⅱ对照品相同的黄绿色荧光斑点,且未有与川牛膝对照药材不一致的黄绿色斑点。麻牛膝及杂牛膝与川牛膝结果相反,且杂牛膝的黄绿色斑点弱于麻牛膝。HPLC-ELSD法所建立的麻牛膝指纹图谱与所有批次麻牛膝相似度高,与川牛膝相似度极低,与杂牛膝的相似度不高,且麻牛膝与杂牛膝均存在与牛膝皂苷Ⅰ、牛膝皂苷Ⅱ对照品相同的峰。结论:HPLC-ELSD法使用相似度评价分析并结合是否检出牛膝皂苷Ⅰ、牛膝皂苷Ⅱ峰可作为鉴别川牛膝类药材的一种新的有效鉴别方法,泡沫实验及TLC鉴别可作为其辅助鉴别手段。

GC-MS/MS法分析泊沙康唑中四种基因毒性杂质

目的:采用气相色谱-二级质谱法测定泊沙康唑中基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸异丙酯、BS-1中间体-2和BS-1中间体-3残留量。方法:采用DB-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm);柱温采用程序升温;采用三重四级杆质谱检测器;载气以恒线速度控制模式;采集模式:MRM(质谱多反应监测);不分流进样。结果:对甲苯磺酸甲酯线性范围为1.96~244.61ng·ml^-1(r=0.9999),对甲苯磺酸异丙酯线性范围为2.19~273.53 ng·ml^-1(r=0.9996),BS-1中间体-2线性范围为2.19~273.3 ng·ml^-1(r=0.9999),BS-1中间体-3线性范围为5.13~256.5 ng·ml^-1(r=0.9998),平均回收率分别为93.9%(RSD=18.66%),100.2%(RSD=4.63%),94.3%(RSD=12.26%),120.5%(RSD=5.64%)(n=6)。结论:分析方法操作简便,结果准确,灵敏度及重复性好,可用于泊沙康唑中四种基因毒性杂质的质量控制。

抗骨增生丸质量标准的改进

目的改进抗骨增生丸的质量标准。方法 TLC法定性鉴别熟地黄和牛膝,HPLC法同时测定松果菊苷、毛蕊花糖苷含有量。结果 TLC斑点清晰,阴性无干扰。松果菊苷、毛蕊花糖苷分别在0.232 6~3.489 0μg(r=0.999 7)、0.049 8~0.746 7μg(r=0.999 3)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.54%、98.32%,RSD分别为0.90%、0.99%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于抗骨增生丸的质量控制。

高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法测定竹叶花椒中2种主要成分的含量

目的建立测定竹叶花椒中羟基-α-山椒素和羟基-β-山椒素含量的高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil 100-5 C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(40∶60,V/V),检测波长为270 nm,流速为1mL/min,进样量为10μL,测定羟基-α-山椒素和羟基-β-山椒素的总含量;采用紫外-可见分光光度法,以羟基-α-山椒素为对照品,于270 nm波长处测定酰胺类物质的总量。结果高效液相色谱法中,羟基-α-山椒素和羟基-β-山椒素进样量分别在0.07911~3.95550μg和0.0095~0.4736μg范围内与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为97.28%和98.90%,RSD分别为1.79%和1.56%(n=6);紫外-可见分光光度法中,羟基-α-山椒素质量浓度在0.7910~7.9100μg/mL范围内与吸光度线性关系良好,平均加样回收率为95.84%,RSD为0.78%(n=6)。结论所建立的含量测定方法准确、可靠,可用于竹叶花椒药材质量的控制。