检测污染兽用疫苗14种支原体PCR方法的建立及应用

为完善兽用疫苗中支原体污染的检测技术,本研究对污染生物制品的14种常见支原体基因组进行分析,设计一对可以同时检测这14种支原体的通用引物,建立兽用疫苗中支原体污染的PCR检测方法。应用该方法对10种兽用活疫苗的61批次和10种细胞系的21份传代细胞样品进行支原体污染的检测,并与培养法、DNA荧光染色法及成品的支原体PCR检测试剂盒相比较,除成品的支原体PCR检测试剂盒的检测结果不同之外,其他3种方法的检测结果均相同。但培养法耗时长,DNA荧光染色法操作复杂,成品的支原体PCR检测试剂盒只能检测5种污染细胞的常见支原体,出现漏检情况,而本研究建立的PCR检测方法快速、准确,可以为今后兽用疫苗的支原体污染检测工作提供参考。

支原体污染的检测及鉴定方法研究进展

自1956年国外学者第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来,这个世界性问题持续了半个多世纪。对于生物制品中支原体污染的检测方法多种多样,但尚无统一的内控标准,而建立一种快速、准确的方法用于支原体污染的检测,可以有效地减少和预防支原体污染,从而提高生物制品的纯净性。本文对支原体污染的几种常见检测及鉴定方法进行综述,包括DNA荧光染色法、PCR、IFA与ELISA等,以期为支原体污染的检测及鉴定研究提供参考。

高致病性PRRSV GD疫苗株与野毒株双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

为建立一种能够快速鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GDr180疫苗株与GD野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究在PPRSV的Nsp2基因和Orf7基因区域分别设计不同荧光标记的MGB探针及特异性引物。这两种MGB探针能够分别特异结合GD野毒株和GDr180疫苗株。通过对PRRSV培养液、感染猪血清和组织样品检测证明了该方法的可行性;采用双重实时荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV GDr180疫苗株和GD强毒株时敏感性分别达到19.4拷贝/μL和34.2拷贝/μL;该方法与PRRSV其他8个病毒株和猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型和猪细小病毒不发生交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;因此可以用于PRRSV GDr180疫苗株与野毒株的鉴别检测。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响

为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的24株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株和5株PRRSV经典毒株的保守区基因序列,使用PrimerExpress 3.0软件设计并合成实时荧光定量PCR(Real-timeFluorescent Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)用引物和探针,建立了Real-time FQ-PCR检测方法以鉴别检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒。用建立的检测方法对已定量的10倍倍比稀释的质粒pGET-258为标准品进行检测,并与常规PCR进行比较。结果显示,该Real-time FQ-PCR方法敏感度可达1.5个拷贝,比常规PCR敏感度高100倍,且批内和批间重复性检测结果的变异系数均小于2%。用该方法与常规PCR方法及病毒分离方法对18份临床样品进行对比检测,显示该方法灵敏度高、成本低,并且能够对样品中病毒进行定量,为高致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断提供了有效的技术手段。

无人机图像去雾处理速度优化研究

无人机航拍数据具有分辨率高、图幅小、数量多的特点,鉴于使用暗通道先验去雾算法虽然效果显著,但计算流程较为复杂、处理时间较长,对处理设备的资源配置要求较高等问题,提出了基于暗通道先验的图像去雾处理速度优化方法。通过研究暗通道先验图像去雾方法,发现计算暗通道图像和使用引导滤波精化透射率图层的环节耗时较多。文章同时采用算法时间复杂度为O(1)的暗通道滤波和图像下采样减少数据量的方法改进暗通道图像处理时间。通过计算机编码进行速度优化实验,对去雾前后的图像使用客观图像质量评价方法量化比较。分析结果表明,在去雾效果没有明显改变的前提下,优化算法能大幅提高计算速度,优化方法可行有效。