筑巢式RT-PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因方法学的构建及临床应用评价

目的:探讨筑巢式RT-PCR检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl融合基因方法学的构建,及该方法在CML患者疗后评价效果中的应用价值。方法:利用梯度PCR试验确定巢式RT-PCR方法检测K562细胞株bcr/abl融合基因的最佳条件,最终建立起在实验室条件下检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的方法;通过琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞株bcr/abl融合基因的敏感性试验;通过对30位服用格列卫治疗半年的患者进行细胞遗传学检测和筑巢式RT-PCR检测结果的比较来评价两种方法的优缺点。结果:通过试验确定筑巢式RT-PCR方法检测K562细胞株bcr/abl融合基因的最佳条件为:预变性94℃5分钟,变性94℃1分钟,退火56℃1分钟,延伸72℃1分钟,72℃终延伸5分钟,循环次数30个循环;试验结果表明本方法最低敏感度能达到10[-6]个拷贝。结论:筑巢式RT-PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因可作为诊断CML的重要指标,筑巢式RT-PCR方法在评价格列卫治疗CML效果具有重要的价值。