人脑源性神经营养因子及神经营养素-3 重组腺病毒的构建及鉴定

目的：构建人脑源性神经营养因子（ｂｒａｉｎｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ， Ｂ Ｄ Ｎ Ｆ）和神经营养素３（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ３， Ｎ Ｔ３）重组腺病毒，使其携带神经营养因子感染神经系统细胞，在局部释放有生物活性的营养因子。方法：将人全长 Ｂ Ｄ Ｎ Ｆ与 Ｎ Ｔ３ 基因分别插入ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 载体，然后将表达序列 Ｃ Ｍ Ｖ Ｂ Ｄ Ｎ Ｆ Ｂ Ｇ Ｈｐ Ａ 和 Ｃ Ｍ Ｖ Ｎ Ｔ３ Ｂ Ｇ Ｈｐ Ａ 切下，插入 Ｅ１ 区缺失的腺病毒载体 ｐ Ｈ△ Ｅ１ｓｐ１ Ａ 中，与ｐ Ｊ Ｍ１７ 共转染２９３ 细胞，通过同源重组产生重组腺病毒。结果和结论：经过二次 Ｃｓ Ｃｌ超离心，获得了滴度分别为８×１０１１和１×１０１２ｐｆｕ／ｍ ｌ的 Ｂ Ｄ Ｎ Ｆ及 Ｎ Ｔ３ 重组腺病毒，并能够感染８ 日龄鸡胚背根神经节组织块，可促进神经突起的生长。这一结果显示， Ｂ Ｄ Ｎ Ｆ及 Ｎ Ｔ３ 的重组腺病毒在感染细胞内可表达有活性的 Ｂ Ｄ Ｎ Ｆ和 Ｎ Ｔ３ 蛋白，表明其可能应用于神经系统的基因治疗。