VEGF_(121)转染对诱导后血管内皮细胞增殖的影响

目的探讨VEGF基因转染对VEGF诱导后血管内皮细胞生物学功能的影响,为组织工程血管构建提供血管内皮细胞的可能性。方法应用VEGF体外诱导兔骨髓间充质干细胞定向诱导分化成血管内皮细胞后,再通过脂质体介导的方法将pCDI/VEGF121转染分化后的血管内皮细胞,通过MTT及流式细胞仪检测转染前后细胞的增殖与凋亡能力。结果诱导培养2周后兔骨髓基质细胞转化为血管内皮细胞,VEGF基因转染血管内皮细胞后表达VEGF蛋白,转染后细胞增殖能力增加,凋亡能力下降。结论转染VEGF是促进VEGF诱导血管内皮细胞增殖的有效途径,可望为组织工程血管构建提供血管内皮细胞衬层,为人工血管内皮化开辟一种新的途径。

转染血管内皮生长因子基因的人成骨细胞增殖及其生物学功能

背景:传统的自体或异体骨移植治疗骨缺损都存在难以克服的缺点,基因治疗可能是一种新途径。目的:观察转染外源性血管内皮生长因子基因的人成骨细胞体外生物学特性。设计、时间及地点:对比观察,细胞学实验,实验于2005-05/2006-05在辽宁医学院科学实验中心完成。材料:人髂骨骨块取自需髂骨植骨的颈椎病患者的植骨块修洁剩余部分的骨质,患者知情同意。质粒pCDI/VEGF121为北京大学人类疾病治疗中心马大龙教授惠赠;感受态大肠杆菌DH5a为辽宁医学院刘丹平教授惠赠。方法:体外分离和培养人成骨细胞。实验分为血管内皮生长因子基因转染组与对照组。利用阳离子脂质体将pCDI-VEGF121真核表达质粒导入体外培养的人成骨细胞。主要观察指标:传代后1,3,5,7d观察血管内皮生长因子在人成骨细胞内的表达,及其对人成骨细胞增殖活力和细胞分泌骨钙素和碱性磷酸酶能力的影响。结果:pCDI-VEGF121真核表达质粒转染人成骨细胞后第3,7天,以反转录聚合酶链反应方法检测到其中有血管内皮生长因子mRNA表达。转染组的细胞数在第1,3,5,7天均高于对照组(P<0.05或P<0.01)。培养3d时转染组成骨细胞的碱性磷酸酶阳性率大于对照组(P<0.01);转染组的骨钙素含量高于对照组(P<0.05或<0.01)。结论:血管内皮生长因子基因转染可以促进体外培养人成骨细胞的增殖能力和相应的生物学功能。

黄芪和冬虫夏草对心脏病左心室舒张功能及血脂的影响

目的 :探讨黄芪和冬虫夏草对舒张性心力衰竭的作用及其临床意义。方法 :应用黄芪和冬虫夏草治疗6 8例冠心病和高血压心脏病 (高心病 )患者 ,检测患者用药前后左室舒张功能 ,如左房内径 (L AD)、舒张早期最大血流速度 (PVE)、舒张晚期最大血流速度 (PVA)及 PVE/PVA比值 ;同时取血测定血脂 ,如总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇 (L DL C)。结果 :6 8例患者用药 8周后 ,左室舒张功能及血脂各指标均较用药前有显著改善 (P均 <0 .0 1)。结论 :黄芪和冬虫夏草能改善冠心病、高心病患者左室舒张功能和血脂。

利拉鲁肽通过抑制线粒体凋亡途径对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的:研究利拉鲁肽注射液对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后线粒体氧化损伤、细胞色素C(Cyt-C)、caspase-3及细胞凋亡的影响。方法:将36只健康SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组,生理盐水50μg/kg,腹腔注射)、利拉鲁肽组(50μg/kg,腹腔注射),每组12只。采用Allen’s法制作SCI模型,假手术组仅行椎板切除,其余二组行椎板切除并打击。模型建立24 h后取受损脊髓,提取脊髓组织线粒体,分别检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量、Cyt-C与caspase-3表达,JC-1法测定线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞的凋亡情况。结果:利拉鲁肽组较SCI模型组脊髓组织线粒体中GSH的含量明显有所升高,而MDA的含量明显降低(P<0.01),JC-1法示利拉鲁肽组大鼠线粒体膜电位较SCI模型组明显有所提高(P<0.01)。Western Blot法和TUNEL法分别显示利拉鲁肽组大鼠脊髓内Cyt-C、caspase-3的表达和细胞凋亡数较SCI模型组明显有所减少(P<0.01)。结论:利拉鲁肽能够改善SCI后线粒体氧化损伤,保护线粒体膜电位,减少Cyt-C释放,降低caspase-3表达,抑制细胞凋亡,对SCI起到保护作用。

Delta陶瓷人工假体在全髋关节置换术中的应用效果观察

目的观察Delta陶瓷人工假体在全髋关节置换术的近期应用效果。方法对56例(61髋)严重髋关节疾病患者行Delta陶瓷对陶瓷人工假体全髋关节置换术。采用Harris评分标准对髋关节功能进行评定。通过双髋正位X线片,测量髋臼外展角和估算前倾角,观察有无陶瓷碎裂、假体脱位、假体周围透亮线和骨溶解、假体松动、感染及假体周围骨折情况发生。结果手术时间为55～90 min,术中出血量120～200 mL,术后引流量150～400 mL。术后平均随访1年7个月。术后1年,Harris髋关节评分为(89.3±7.9)分,明显高于术前的(40.3±10.5)分(P<0.01)。髋关节功能优37例,良18例,可1例。X线检查示髋臼外展角42.7°±2.6°,前倾角为19.6°±3.5°。随访期间无关节异响发生,未见陶瓷碎裂、假体脱位、骨溶解形成及假体松动、移位和下沉,无感染和假体周围骨折的发生。1例术后6个月时出现髋关节周围异位骨化,关节功能良好。结论 Delta陶瓷人工假体全髋关节置换术治疗严重髋关节疾病的近期疗效满意。

急性颈髓损伤气管切开后的颈椎前路手术

[目的]探讨急性颈髓损伤患者在气管切开情况下,及早行手术治疗,争取最大限度的恢复和保存脊髓功能。[方法]27例C3～7骨折脱位,伴脊髓损伤患者,均在伤后行气管切开,7例未闭管手术(伤后1～3 d,A组),20例闭管后手术(伤后8～20 d,B组),所有患者均行前路脊髓减压、骨折脱位复位植骨内固定术。[结果]所有患者颈前路手术切口均未出现感染;肺内感染A组3例,B组13例;B组1例术后呼吸衰竭死亡,2例闭管后手术患者术后需再次行气管切开。伤后1个月A组运动和感觉神经功能分别改善4.05、6.13分;B组运动和感觉神经功能分别改善3.12、4.25分,差异非常显著(P<0.01)。[结论]气管切开带管进行手术并未增加感染、呼吸功能受限等并发症,术后机械辅助通气维持时间亦无明显差异,因能够早期手术,对脊髓损伤的恢复有促进作用,是治疗颈椎外伤致脊髓损伤的积极方法。

依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体的保护作用

目的探讨依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体氧化损伤、细胞色素C释放及神经细胞凋亡的影响。方法将60只健康SD大鼠按随机数字表法分为5组,每组12只。采用Allen’s法制脊髓损伤(SCI)模型,假手术组仅行椎板切除,SCI模型组行椎板切除+打击,甲基泼尼松龙组打击后给予甲基泼尼松龙腹腔注射处理(30 mg/kg),依布硒啉组打击后给予依布硒啉腹腔注射处理(10 mg/kg),生理盐水组打击后给予等体积0.1%二甲基亚砜的生理盐水溶液腹腔注射处理。术后24 h取受损脊髓,检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量、细胞色素C表达及神经细胞凋亡情况。结果依布硒啉组较SCI模型组脊髓组织线粒体中MDA含量明显降低,GSH明显升高,Western blot检测细胞色素C的释放量减少,TUNEL法检测神经细胞凋亡数目明显减少(均P<0.01)。结论依布硒啉能够改善SCI后线粒体氧化损伤,减少线粒体细胞色素C释放,抑制神经细胞凋亡,对SCI起到保护作用。

依达拉奉抗大鼠脊髓损伤后脊髓细胞凋亡的机制初探

目的探讨依达拉奉(EDA)对大鼠脊髓损伤(SCI)后内质网应激(ERS)介导的细胞凋亡的影响。方法36只SD大鼠随机分为假手术(sham)组、SCI组、EDA组,每组12只。采用Allen’s法建立SCI模型,sham组仅行椎板切除术。术后Sham组和SCI组给予与EDA组等体积等频次生理盐水处理;EDA组在SCI模型建成以后予以EDA(10 mg/kg),每12 h腹腔注射给药1次。于术后3 d取脊髓,应用Western blot检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、Cleaved caspase-12和Cleaved caspase-3的表达水平,免疫荧光技术检测脊髓组织中caspase-12、CHOP阳性细胞的比率,TUNEL法检测脊髓细胞凋亡水平。结果 SCI组较sham组CHOP、Cleaved caspase-12、Cleaved caspase-3的表达升高,Cleaved caspase-12、CHOP阳性细胞比率增加,脊髓组织细胞凋亡比率增加(均P<0.01)。EDA组较SCI组CHOP、Cleaved caspase-12和Cleaved caspase-3的表达降低,Cleaved caspase-12、CHOP阳性细胞比率减少,脊髓组织细胞凋亡比率减少(均P<0.01)。结论 EDA对脊髓损伤有保护作用,机制可能与其抑制SCI后脊髓细胞的ERS和脊髓细胞的凋亡有关。

急性脊髓损伤后线粒体形态结构与线粒体膜电位的变化

目的探讨大鼠急性脊髓损伤后线粒体形态结构和线粒体膜电位的变化。方法 SD大鼠36只,随机分为对照组(假手术组)和脊髓损伤组(SCI组),每组又分为处理后4 h、8 h、16 h组(各6只)。SCI组采用Allen's打击法,制作大鼠脊髓损伤模型,对照组只暴露脊髓,不打击。透射电镜观察线粒体形态结构的改变;在各时相提取伤段脊髓组织线粒体,JC-1法测定线粒体膜电位的变化。结果 SCI组脊髓组织伤后4 h线粒体体积略增大,嵴排列稍紊乱;8 h线粒体体积增大,嵴稍肿胀;16 h线粒体结构不清,嵴断裂、排列紊乱,部分线粒体膜破裂,有空泡化。脊髓损伤后4 h,线粒体膜电位开始明显下降(P<0.01),随着时间的延长,线粒体膜电位处于下降趋势。结论大鼠急性脊髓损伤后线粒体的形态结构发生明显改变,伤段脊髓线粒体膜电位明显下降,出现功能障碍。

利拉鲁肽对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞自噬与运动功能恢复的作用

目的探讨利拉鲁肽注射液(Liraglutide)对急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经细胞的保护作用及其可能机制。方法 54只SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组,损伤后立即腹腔注射0.9%氯化钠注射液50μg/kg)和治疗组(Liraglutide组,损伤后立即腹腔注射利拉鲁肽50μg/kg),每组18只,Allen法建立大鼠脊髓损伤模型,于损伤后3 d取脊髓组织,Western blot检测LC3-Ⅱ、Caspase-3表达,免疫荧光双标染色观察神经元自噬表达水平、神经细胞凋亡情况;于损伤后1 d、3 d、7 d分别进行Basso Beattle Bresnahan(BBB)运动评分。结果与Sham组相比,SCI组LC3-Ⅱ、Caspase-3表达、自噬阳性神经细胞数目、神经细胞凋亡数目均增多(P<0.01),BBB评分显著降低(P<0.01);Liraglutide组与SCI组相比,LC3-Ⅱ显著增多,Caspase-3表达降低(P<0.01);免疫荧光双标染色示自噬阳性细胞数目明显增多(P<0.01);神经元凋亡双标染色法示神经凋亡细胞数目明显减少(P<0.01);BBB评分在3 d与7 d时有显著提高(P<0.01)。结论利拉鲁肽增强大鼠脊髓损伤后神经细胞自噬,降低凋亡相关蛋白表达,减少神经细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复,对脊髓损伤具有保护作用。

股骨近端角度型锁定钢板内固定术加股方肌骨瓣移植治疗青壮年股骨颈Pauwels Ⅲ型骨折

目的观察股骨近端角度型锁定钢板内固定术加股方肌骨瓣移植治疗青壮年股骨颈PauwelsⅢ型骨折疗效。方法对19例青壮年股骨颈PauwelsⅢ型骨折患者采用角度型锁定钢板内固定术加股方肌骨瓣移植治疗。术后通过X线及CT检查观察骨折愈合及相关并发症的发生情况,根据Harrris评分标准评价髋关节功能。结果 19例术后随访1.5～3 a。18例术后47个月均达到骨折愈合,髋关节功能优8例,良10例,差1例,优良率为94%。术后发生骨折不愈合1例,股骨头坏死1例,无内固定物松动、转子下骨折及髋内翻畸形愈合发生。结论股骨近端角度型锁定钢板内固定术加股方肌骨瓣移植治疗青壮年股骨颈PauwelsⅢ型骨折疗效较好。

线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后线粒体形态与功能的影响

目的 旨在检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）预处理对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后线粒体形态,线粒体膜电位（MMP）及线粒体ATP含量的影响。方法 成年雌性SD大鼠72只,体重250~300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组（n=24）：假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）和Mdivi-1预处理组（1.20 mg/kg,Mdivi-1组）,每组24只。SCI组和Mdivi-1组大鼠采用Allen’s方法制备ASCI模型,Mdi-vi-1组和SCI组大鼠在脊髓打击之前15 min经尾静脉分别给予Mdivi-1或等容量二甲基亚砜（DMSO）。每组大鼠再分为两个亚组,分别于脊髓暴露或者打击后的3和12 h处死,取出脊髓T9-11,采用透射电子显微镜检测线粒体形态,用荧光显微镜和荧光分光光度计检测MMP变化,用荧光分光度计检测线粒体ATP含量的变化。结果 与Sham组相比,SCI 3 h组时,线粒体数目明显减少（〈0.01）,截面积明显增大（〈0.01）,但MMP和线粒体ATP含量无明显变化;SCI 12 h组时,线粒体数目明显增多（〈0.01）,截面积明显减小（〈0.01）,但MMP和线粒体ATP含量明显减低（〈0.01）。与SCI组相比,Mdivi-1 3 h组时,线粒体数目、截面积及MMP和线粒体ATP含量无明显变化;而Mdivi-1 12 h组时,线粒体数目明显减少（〈0.01）,截面积明显增大（〈0.01）,MMP和线粒体ATP含量明显升高（〈0.01）。结论 选择性线粒体分裂抑制剂-Mdivi-1能有效抑制ASCI后线粒体分裂和MMP降低,增加线粒体中ATP的合成,从而保护了线粒体功能。

选择性线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制

目的：检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后神经细胞线粒体中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、细胞色素C（Cyt-C）及神经细胞凋亡的影响。方法成年雌性SD大鼠36只，体质量250~300 g，随机分为假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）、Mdivi-1预处理组（1.20 mg/kg，Mdivi-1组），各12只。Sham组只暴露脊髓，不打击。SCI组和Mdivi-1组采用Allen’s方法制备脊髓损伤模型。Mdivi-1组在脊髓打击之前15 min尾静脉给予Mdivi-1，而SCI组给予等量二甲基亚砜（DMSO）。Sham组在暴露脊髓8 h后立即处死，SCI组和Mdivi-1组均于脊髓损伤后8 h处死；然后取出脊髓节段T9~T11，用分光光度计检测各组脊髓组织线粒体中MDA和GSH的含量，Western Blot法检测线粒体及胞浆内Cyt-C表达情况，荧光TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果与Sham组相比，SCI组线粒体中Cyt-C和GSH明显减少，但线粒体中的MDA，胞浆中Cyt-C及神经细胞凋亡数目明显增多（P＆lt;0.01）；与SCI组相比，Mdivi-1组线粒体中Cyt-C和GSH明显增多，但线粒体中MDA，胞浆中Cyt-C以及神经细胞凋亡数目明显减少（P＆lt;0.01）。结论 Mdivi-1具有减轻ASCI后神经细胞线粒体氧化损伤，抑制线粒体中Cyt-C的释放及神经细胞凋亡的作用，促进了脊髓功能恢复。

PTEN基因沉默对BMSC氧糖剥夺模型的保护作用及其对Bcl-2凋亡通路的影响

目的研究RNA干扰沉默第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)基因对骨髓间充质干细胞(BMSC)氧糖剥夺模型的保护作用,并探讨其对Bcl-2敏感的凋亡通路的影响,分析其保护作用的机制。方法体外分离培养BMSC并鉴定,通过脂质体法转染PTEN基因特异的siRNA沉默PTEN基因;RT-PCR检测PTEN基因的表达;制备体外氧糖剥夺模型观察PTEN基因的沉默对细胞的保护作用。Western blot检测Bcl-2蛋白表达的变化。结果成功培养BMSC并鉴定。RT-PCR检测结果显示siRNA成功干扰了PTEN基因的表达,流式细胞仪检测结果显示PTEN基因沉默后的细胞对氧糖剥夺模型有较强的耐受能力,Western blot检测结果显示Bcl-2蛋白明显增多。结论 PTEN基因的沉默使BMSC更能耐受氧糖剥夺的环境,增强了细胞的存活能力,其机制可能是通过Bcl-2敏感的凋亡通路抑制细胞凋亡。

选择性线粒体分裂抑制剂抑制大鼠急性脊髓损伤后的细胞凋亡

目的检测mdivi-1预处理对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后线粒体膜电位,凋亡诱导因子(AIF)释放及细胞凋亡的影响。方法大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)、二甲基亚砜预处理组(DMSO组),mdivi-1预处理组(mdivi-1组)。采用Allen's方法制备ASCI模型。JC-1标记法检测线粒体膜电位(MMP),Western blot方法检测线粒体及细胞核内AIF,TUNEL法检测细胞凋亡。结果与Sham组相比,SCI组线粒体中AIF先降低后升高,最低点是8h(P<0.01),而细胞核中AIF却呈相反趋势(P<0.01),术后8 h MMP明显降低(P<0.01),凋亡细胞数目明显增多(P<0.01)。与SCI 8 h组相比,mdivi-1组MMP明显升高(P<0.01),线粒体中AIF明显增多(P<0.01),细胞核中AIF明显降低(P<0.01),凋亡细胞数目明显减少(P<0.01)。结论 Mdivi-1具有保护大鼠ASCI后MMP,抑制线粒体中AIF的释放和细胞凋亡的作用。

SDF-1/CXCR4促进骨髓基质细胞迁移的作用

目的研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,SDF-1对BMSCs迁移、趋化作用,分析促进迁移规律和机理。为改善和提高骨髓基质细胞迁移能力寻找更有效的途径。为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础。方法体外培养大鼠骨髓基质细胞,应用免疫组化方法对骨髓基质细胞的CXCR4受体表达水平进行检测,运用微孔隔离室穿越实验方法,研究SDF-1对骨髓基质细胞迁移、趋化作用,并用SDF-1阻断剂加以证实。结果CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,SDF-1可促进骨髓基质细胞迁移。结论虽然CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,但是对促进骨髓基质细胞迁移起到至关重要的作用。

硫化氢对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的探讨硫化氢(H2S)对大鼠急性脊髓损伤后自噬及细胞凋亡的影响。方法 36只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(模型组)、H2S处理组(H2S组),每组12只。采用Allen’s法构建大鼠脊髓损伤模型,Sham组只行椎板切除术,暴露脊髓不打击;H2S组在脊髓损伤后1 h腹腔注射50μmol/kg硫氢化钠;模型组给予等体积生理盐水。各组脊髓损伤24 h后取出脊髓组织,Western blot检测LC3、p70S6K和Cleaved cas-pase-3表达;免疫荧光法检测LC3表达;TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率。结果与Sham组相比,模型组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Cleaved caspase-3表达升高,p70S6K表达降低、细胞凋亡率升高(P<0.01);与模型组相比,H2S组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Cleaved caspase-3表达降低,p70S6K表达升高,细胞凋亡率下降(P<0.01)。结论 H2S可抑制大鼠急性脊髓损伤后自噬并减少细胞凋亡。

趋化因子受体CXCR4在骨髓基质细胞中的表达及分析

目的研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,分析其表达规律。为改善和提高骨髓基质细胞的增殖和迁移能力寻找更有效的途径。为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察其增殖及生长特性,应用免疫组化和RT-PCR方法对MSCs的CXCR4受体及CXCR4 mRNA表达水平进行检测,并应用神经胶质细胞进行对比,探讨其表达异常的因素。结果骨髓基质细胞CXCR4m RNA表达水平稳定,CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,且随传代数增加而减少。结论CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,如果促进其CXCR4表达将会极大增强骨髓基质细胞的增殖与迁移能力。

新一代全陶瓷界面的全髋关节置换术治疗囊内移位的股骨颈骨折近期疗效观察

目的探讨新一代全陶瓷界面的全髋关节置换术（total hip arthroplasty,THA）治疗囊内移位的股骨颈骨折的近期疗效。方法 2009年1月-2012年6月,我科对37例37髋囊内移位的股骨颈骨折患者行新一代全陶瓷界面的THA。利用Harris评分标准对术后髋关节功能进行评价,并观察是否存在异响。通过骨盆正位X线片,测量髋臼外展角和前倾角估算,同时观察有无脱位、陶瓷组件碎裂、骨溶解、假体松动等情况发生。结果术后患者均获随访,平均随访2年4个月。末次随访时Harris髋关节评分为89~100分。影像学检查显示髋臼外展角42°~44°,前倾角16°~22°。随访期间未发现脱位,无陶瓷组件碎裂,无骨溶解和假体松动情况发生,1例术后7个月短暂时间出现髋关节异响,避免过度活动后异响消失,关节功能良好。结论新一代全陶瓷界面的THA治疗囊内移位的股骨颈骨折的近期疗效满意。