固始鸡与AA肉鸡胸肌脂质组特征及关键候选基因鉴定

为研究不同鸡种胸肌的脂质组成,试验采用液相色谱质谱联用(LC-MS)技术对120日龄固始鸡和45日龄AA肉鸡胸肌的脂质组成进行表征。结果显示:共鉴定到51个亚类1 523种脂质分子,以甘油磷脂类(GPs)和甘油酯类(GLs)为主。筛选出207个显著性差异脂质分子(同时满足VIP>1、P<0.05),其中甘油三酯(TG)含量在固始鸡中较高,磷脂酰胆碱(PC)含量在AA肉鸡中较高。联合转录组结果分析,从固始鸡和AA肉鸡胸肌中分别筛选到49个和154个基因-脂质标识物对。基于上述结果,鉴定到17个关键基因和84个脂质标识物以及甘油磷脂代谢和甘油酯代谢两个关键通路,揭示了固始鸡和AA肉鸡胸肌肉质不同的脂质标识物和关键调控通路及候选基因。结果表明:TG和TC脂类分子含量的差异可能是导致固始鸡和AA肉鸡间肉质风味差异的主要原因。

固始鸡胸肌脂肪酸组成特征及其关键调控基因鉴定

为揭示固始鸡胸肌脂肪酸组成特征及其关键调控基因,试验采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)技术分析了14、22和30周龄固始鸡胸肌组织的脂肪酸组成,通过权重基因共表达网络分析鉴定了主要脂肪酸含量相关的核心基因。结果显示:三个发育阶段胸肌组织中均检测到49种脂肪酸,且多数脂肪酸含量在不同发育阶段间差异不显著(P>0.05);胸肌组织中优势脂肪酸为C16∶0、C18∶0、C18∶1N12、C18∶1N9C、C20∶4N6、C18∶1N7、C18∶2N6和C14∶1T,含量占总脂肪酸含量的86%以上。另外,共鉴定到blue、brown、purple、lightyellow、grey60和red共6个特异性转录模块,从中筛选到104个与C14∶0、C16∶0、C17∶0、C18∶1N12、C18∶2N6、C18∶3N6、C20∶1、C20∶2和C20∶3N6等脂肪酸含量相关的核心基因,功能涉及脂肪酸代谢相关的许多生物学过程和信号通路。结果表明,固始鸡胸肌脂肪酸含量在不同生长时期存在动态变化且为微效多基因共同调控的复杂数量性状。

miR-215-5p通过靶向NCOA3基因抑制固始鸡腹部前脂肪细胞的增殖和分化

为揭示miR-215-5p在固始鸡腹部脂肪沉积中的作用机制,本研究采用实时荧光定量PCR,分析了miR-215-5p在14周龄固始鸡8种组织和腹部前脂肪细胞分化过程的表达特征;通过miR-215-5p mimics和inhibitors转染试验,利用CCK-8、EdU、油红O染色、甘油三酯含量测定等方法,分别评价了miR-215-5p对固始鸡腹部前体脂肪细胞增殖和分化的影响。结果表明:miR-215-5p在固始鸡腹脂和皮脂等组织中高表达,在前脂肪细胞分化过程具明显时序表达特征;当转染miR-215-5p mimics后,前体脂肪细胞中增殖标志基因CDK1和PCNA表达水平极显著下降(P<0.01)、细胞周期阻滞因子p21表达水平极显著升高(P<0.01),EdU阳性细胞比例和前脂肪细胞总数极显著降低;同时,可显著抑制脂肪细胞分化标志基因PPARG、CEBPA、FABP4和LPL的表达,减少脂肪细胞内脂滴生成和甘油三酯含量。与此不同,miR-215-5p inhibitors转染前脂肪细胞后,在增殖和分化上获得与miR-215-5p mimics转染后相反的结果。同时,采用双荧光素酶报告基因系统,验证了mi-R-215-5p的靶基因,过表达miR-215-5p可抑制核受体辅激活因子3(nuclear receptor coactivator 3,NCOA3)基因3′-UTR区荧光活性,而突变NCOA3基因3′-UTR区与miR-215-5p种子序列的结合位点可解除其抑制效果。上述结果证明,miR-215-5p可抑制固始鸡腹部前脂肪细胞的增殖和分化,且在脂肪细胞分化过程中直接靶作用于NCOA3。因此,miR-215-5p是固始鸡腹部脂肪形成的一个负调控因子。