黄龙病发病芦柑根际土壤细菌群落组成与多样性特征

【目的】本研究旨在研究福建南平地区芦柑(Citrus reticulata)植株根际土壤细菌群落,并分析黄龙病对其细菌群落的影响,为南平地区芦柑黄龙病的防控提供科学依据。【方法】采用五点法采集了健康和黄龙病发病的芦柑植株根际土壤样本,通过扩增子测序技术和生物信息学方法,深入研究了黄龙病发病芦柑根际土壤细菌群落的多样性和组成变化,分析了土壤理化因子与细菌群落的关联性。【结果】研究结果表明,黄龙病发病的芦柑植株根际土壤细菌群落的多样性略高于健康植株。黄龙病发病芦柑根际土壤中的变形菌门相对丰度明显升高,而放线菌门相对丰度显著降低。在属水平上,与健康植株相比,黄龙病发病芦柑植株根际土壤细菌群落中蔷薇属和嗜酸性杆菌属的相对丰度显著增加,与速效钾、有效磷以及有机质呈现显著负相关,而与pH值呈现显著正相关。相反地,康奈斯氏杆菌属和褚氏杆菌属的相对丰度明显低于健康植株,并与速效钾、有效磷以及有机质呈现显著正相关,同时与p H值呈现显著负相关。【结论】黄龙病菌感染改变了柑橘土壤理化特性,并显著减少根际土壤中有益细菌的相对丰度,从而导致了芦柑植株根际细菌群落的多样性和组成出现显著变化。与此同时,黄龙病发病的芦柑植株可能通过招募固氮和促进植物根际生长的有益细菌来对抗病原菌的侵害。

中国柑橘黄龙病研究30年

综述了我国自1978年以来有关柑橘黄龙病的研究概况,包括柑橘黄龙病在我国的分布与危害、黄龙病寄主、病原研究、病害诊断与检测、传播途径与病害流行、防控技术等。

田间自然热罩治疗柑橘黄龙病的效果分析

【目的】为探讨柑橘黄龙病防控新途径,利用夏秋季强太阳光照,开展自然热罩处理对田间柑橘黄龙病树的治疗效果研究。【方法】2012年和2013年8—9月,分别选取40株PCR检测结果为阳性、5~8 a生的芦柑病树为试验对象。按每5株为1组,随机分为8组,其中4组为覆盖热罩处理组,其余4组为对照组。处理组病树用聚氯乙烯薄膜覆盖,地面以土块压实,并在病树正上方的覆盖薄膜上打10个直径约2 cm的小孔,覆盖时间7 h（10：00—17：00）,间歇处理3次;对照组病树不做热罩处理。以温度数据记录仪,每5 min记录1次处理与对照温度数据。处理前、处理后30 d和90 d,分别选10株处理组及对照组病树进行症状评价,按病情分级计算其病情指数并进行显著性分析。同时,处理前、处理后30 d和90 d,分别采集症状明显的叶片提取DNA,以实时荧光定量PCR检测其病菌浓度。【结果】2 a处理结果表明,病树经3次间歇性自然热罩,90 d后症状明显减轻,抽生新梢,叶片正常成熟转绿,未出现新的黄化或斑驳等典型黄龙病症状,病情指数分别从67.00和68.33减为34.00和30.33,变化差异极显著;对照组病树病情持续加重,黄化症状更加明显,部分叶片出现木栓化,其病情指数分别从64.33和65.67增为89.00和87.00,变化差异极显著。荧光定量PCR检测结果显示,处理后90 d病菌浓度分别下降了85.36%和81.67%,其中27株降低了90%以上;对照组病菌浓度分别增加了22.86倍和25.50倍,最多的增加了95倍。【结论】通过3次间歇性自然热罩处理,90 d后田间柑橘黄龙病树症状明显减轻,黄龙病菌浓度也显著降低,平均下降达80%以上,最高下降了99.98%,其中有67.5%的病树病菌浓度降低了90%以上;而对照组病树除1株外,其余病菌浓度均不同程度增加,平均增加了20多倍。

水稻瘤矮病毒基因组S9片段的基因结构特征

应用RT-PCR技术克隆了水稻瘤矮病毒(RGDV)中国广东信宜分离物(RGDV-C)的基因组S9片段,测定了全序列并进行了生物信息学分析。结果表明,RGDV-C S9片段全长共有1202bp(登录号AY556483),含有一个长的开放阅读框,这一开放阅读框编码一个由323个氨基酸残基组成的多肽,推测分子量约35.6kDa,与泰国分离物(RGDV-T)的全序列相比,它们的核苷酸长度相等,核苷酸同源性为98.1%,氨基酸同源性为98.5%。RGDV S9片段编码的Pns9蛋白在植物呼肠孤病毒属内未发现同源蛋白,其功能尚待确定。利用NCBI的BLAST查找与比较,发现Pns9与伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)ATP依赖的Clp蛋白水解酶组分[ATP-dependent Clp prote-ase proteolytic component(clpP-1)]有21.8%的氨基酸序列同源性。

应用酶联免疫吸附测定技术检测香蕉束顶病毒

为探讨快速而准确的检测香蕉束顶病毒的方法，采用本所制备的香蕉束顶病毒（Ｂａｎａｎａｂｕｎｃｈｙｔｏｐｖｉｒｕｓ－ＢＢＴＶ）多克隆抗体ＩｇＧ和台湾的香蕉束顶病毒单克隆抗体２Ｈ６，用酶联免疫吸附测定技术（ＥＬＩＳＡ）双抗体夹心法（ＤＡＳ）测定了漳州市天宝的香蕉束顶病病株。试验结果表明，多抗和单抗相结合的ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ法能检测到病组织汁液的最大稀释度为１∶６４０，而单独使用单抗的最大稀释度为１∶１０。同时采用多抗和单抗相结合的ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ法比较了病株根、假茎、叶片中脉、叶肉的测定结果，假茎和中脉的病毒含量高于叶肉，根未检出。用此法能检测到蚜虫体内的病毒。

LED在我国农业相关领域的研究与应用

简要介绍了发光二极管(LED)在农业相关领域的研究进展,比较了LED光源与普通人工光源的能耗情况,并就推进农用LED产品研发和应用提出相应的建议。

水稻瘤矮病毒S3和S8基因共表达杆状病毒转移载体构建及重组病毒的鉴定

为构建携带水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要内层衣壳蛋白S3基因和外层衣壳蛋白S8基因的重组杆状病毒,将目的基因(S3和S8)分别亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual多角体启动子(PH)和p10启动子的下游.经酶切和确证性序列测定,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组杆粒rbpFBDS3-S8,采用脂质体转染法,将rbpF-BDS3-S8转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞包装病毒,PCR筛选鉴定重组病毒.结果表明:Sf9昆虫细胞被侵染72 h后,倒置显微镜下观察到细胞增大,培养液和细胞内出现颗粒状物质,部分细胞破裂甚至裂解,说明S3和S8基因已整合到重组杆状病毒基因组中,这为开展RGDV主要结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其功能研究奠定了基础.

柑桔黄龙病株分布边缘效应的量化分析

根据柑桔园黄龙病(Huanglongbing, HLB)植株与健康植株分布的二阶中心矩的比值(DR)和方差检验来分析HLB分布边缘效应,同时,以病株与健康株分布的一阶方向矩的比值(LR)和方差检验来判断HLB主要入侵方向。结果表明,当DR>1且方差F显著性概率p<0.05时,HLB病株分布呈显著边缘分布倾向,此时HLB具有边缘侵入效应;当DR<1且方差F显著性概率p<0.05时,认为HLB为内源性苗木带菌入侵;当DR≈1且方差F显著性概率p>0.05时,因HLB初侵染或盛发期而无法判断其侵染源。当DR≥1、|LR|≥1且方差分析均呈显著差异时,可依据|LR|在各方向的大小来判定HLB主要入侵方向。近距离桔园间,HLB传播具有边缘侵入效应与方向性,在HLB疫区建园时需注意防范。

白蚁在福建省的发生与防治

白蚁在福建省的发生与防治范国成（福建省农科院果树所）李本金（福建省农科院耕作所）白蚁是比较原始性的昆虫，主要分布在热带、亚热带等温暖多湿地区。由于其种类多，繁殖快，而加害范围又大，因此对于房屋、交通、水利、文物以及农林生产等方面，常常造成重大损失。为...

柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性

采用PCC(Pearson correlation coefficient)、系统聚类和多样性指数研究了柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)植株不同部位叶片、枝条及其根部内生细菌的相互关系及其群落结构多样性。结果表明,从供试柑橘中分离得到26株内生细菌(叶片10株,枝条14株,根部2株)隶属于10个属19个种。Nested-PCR结果显示,柑橘植株不同空间叶片中,黄龙病病原的阳性检出率为58.3%。用LSD法比较显示,柑橘内生细菌在不同器官的分布量大小依次为根>叶>枝条。上、中、下不同部位叶片和枝条内生细菌分布量差异不显著,而东、西、南、北不同方位的叶片和枝条内生细菌分布量差异显著(P<5%)。柑橘内生细菌之间的PCC分析表明,Bacillus pumilus和Bacillus sp.与柑橘黄龙病病原菌呈显著负相关,Bacillus sp.和Bacillus pumilus与Bacillussubtilis呈显著正相关。Bacillus brevis和Escherichia hermannii与Bacillus vesiculariss存在显著正相关。对柑橘不同器官内生细菌的PCC分析表明,同种器官的内生细菌之间呈正相关,不同器官的内生细菌之间呈负相关。以内生细菌在各器官的分布量为指标分析不同器官之间的相关性,结果表明,叶片与枝条呈正相关,PCC为0.55,叶片与根部、枝条与根部均呈负相关,PCC分别为-0.19和-0.13。16S rDNA序列聚类分析表明,柑橘内生细菌可分为两大类,第Ⅰ大类为革兰氏阳性菌,第Ⅱ大类为革兰氏阴性菌。第Ⅰ大类又可以分为芽孢杆菌属和短小杆菌属两个亚类,第Ⅱ大类也可以分两个亚类。对柑橘黄龙病病原与叶片内生细菌进行聚类分析,可以分为三类,第Ⅰ类特征为内生细菌存在所有部位的叶片;第Ⅱ类特征为内生细菌与黄龙病病原菌存在负相关性;第Ⅲ类特征为内生细菌只存在特定部位叶片。当马氏距离为27.23时,可将柑橘黄龙病内生细菌群落结构聚为3类,第Ⅰ类特点是在不同部位叶片均有分布,为完全分布类型,且分布量较大,第Ⅱ类特点是在各器官中均为不完全分布类型,且分布量不均匀,第Ⅲ类特点是根部分布特性且分布量较大。分析多样性指数表明,SHANNON(H1)指数在叶片最高,根部最低。SIMPSON(D)指数在枝条最高,根部最低。Pielou指数在根部最高,枝条最低。

杨桃果实性状与橘小实蝇危害严重度的关系

在调查分析不同成熟度杨桃果实对橘小实蝇为害影响的基础上,运用相关性分析,逐步回归分析、通径分析及决策系数计算的方法,探讨成熟期杨桃果实性状与橘小实蝇危害严重度的关系。结果表明,杨桃果内橘小实蝇幼虫数量随着果实成熟度的增加而增加,果实越成熟,硬度值越小,可溶性固形物含量越高,果内橘小实蝇幼虫数量越多,橘小实蝇危害程度越重;果实主要性状与果内橘小实蝇幼虫数量的相关程度依次为:果实硬度(X4)>酒石酸(X7)>还原性总糖含量(X3)>pH值(X2)>氨基酸总量(X5)>草酸(X6)>粗蛋白(X1);运用多元逐步回归分析法,筛选出作用显著的最优性状,得出最优回归方程为Y=459.2219+91.6060 X1-91.2226 X2-100.8494 X4+0.4432 X11(X11为柠檬酸),决定系数R2=0.999 83,表明这4个性状对果内橘小实蝇幼虫数量的相关影响达到99.983%;4个入选性状的决策系数依次为硬度>粗蛋白含量>pH值>柠檬酸,表明杨桃果实的硬度和粗蛋白含量是影响橘小实蝇危害严重度的主决策性状,pH值的决策系数最小,是主要限制性状,柠檬酸为适当限制性状。

几种杀虫剂对柑橘木虱的毒力及防效研究

在室内条件下，采用浸虫法测定了10种杀虫剂对柑橘木虱的毒力，结果表明，高效氯氟氰菊酯和溴氰菊酯对柑橘木虱成虫具有较高的毒力，其24 h的 LC50值分别为2.116、3.030 mg ·L -1，而吡蚜酮、螺虫乙酯和吡虫啉毒力较差，尤其以吡蚜酮的毒力最差，其24 h的LC50值为2025.489 mg · L -1；采用灌根施药法测定了4种内吸性杀虫剂对柑橘木虱成虫的防效，4种供试验药剂各处理对柑橘木虱成虫的短期效果较差，但10％烯啶虫胺2000倍液、70％吡虫啉14000倍液及7000倍液处理灌根施药后14～28 d对柑橘木虱成虫的防效均保持在87％以上，至药后28 d防效高达97％以上，持效期长。

福建葡萄炭疽病病原鉴定及致病性分析

【目的】了解引起福建省葡萄主产区炭疽病的病原种类、致病力情况及其寄主范围。【方法】利用形态学和分子生物学相结合的方法对葡萄炭疽病病源菌株进行分离纯化及鉴定。【结果】从供试的18个病株中分离得到了2种菌落形态不同的炭疽菌菌株,其分生孢子均为单胞,无色,多数为圆筒形、棒状或椭圆形,附着胞为深褐色,多数为球形或近球形。供试的葡萄炭疽菌菌株用胶孢炭疽菌特异性引物Cg Int/ITS4均可从其基因组DNA中扩增出大小约500 bp的特异性条带。寄主范围测定结果表明,该菌同时侵染苹果、杧果、油桃、李、番茄和梨等多种水果。【结论】引起福建葡萄主产区炭疽病的病原为胶孢炭疽菌,该菌株可侵染‘红地球’葡萄及苹果、杧果、梨等多种水果,寄主范围较广泛。

适配太阳能诱虫器诱杀柑橘木虱LED光源的筛选

柑橘木虱(Diaphorina citri)是柑橘黄龙病的传播媒介。为达到治虫防病的目的,在室内利用昆虫行为反应器开展适配太阳能诱虫器的LED光源筛选,结果表明:柑橘木虱成虫对光照强度分别为1 800lx和4 310lx的蓝光和绿光(波长分别为460nm和531nm)在光照时长为17h时的趋光性最佳,相同波长条件下,其趋光性与光照强度和光照时长成正相关。该研究结果为进一步探索适宜田间柑橘木虱测报和高效诱杀的LED光源提供理论依据。

柑橘黄龙病可视化LAMP检测技术的建立及应用

建立柑橘黄龙病(HLB)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为HLB的快速检测提供有力的技术支持。根据LAMP技术原理,针对柑橘黄龙病菌16S rDNA靶序列的6个位点设计4条特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,并在反应前的体系中加入1∶10的钙黄绿素(calcein)和氯化锰(MnCl2)混合液作为荧光显色剂,建立可视化LAMP检测技术,同时对该技术的特异性、灵敏度和样品检测进行了测试。该检测方法具有很高的特异性,反应体系中除了HLB具有特异性的扩增,产生黄绿色荧光扩增产物,其他供试菌株均无特异扩增。对柑橘黄龙病菌总DNA的检测限为1.51×10-3 ng/μL,而对含有目的基因的CG-pMD18-T质粒DNA的检测限为2.12×10-6 ng/μL,与定量PCR灵敏度相当,而比常规PCR灵敏度高1 000倍。利用可视化LAMP技术和定量PCR对来自漳州、南平、福州等地的样品进行检测,结果 2种技术的检出率均为76.7%,符合率达到100%。

田间柑橘植株不同部位黄龙病菌的PCR检测及发病原因分析

[目的]了解黄龙病菌在柑橘植株不同部位的分布,为深入研究病菌在植株体内的扩散情况奠定基础;明确病害的发生原因为有效防控该病害提供借鉴。[方法]调查浙江省台州市柑橘黄龙病(huanglongbing,HLB)的发生情况,通过常规和巢式PCR,检测了发病情形不同的两个果园内柑橘病株不同部位及不同植株中的黄龙病菌,并对其发病原因进行分析。[结果]发现一果园内病株的无症状叶片、有症状叶片和枝条中均含有黄龙病菌,而其周围植株不含病菌;另一果园内病株的有症状叶片、枝条、主干和砧木中均含有黄龙病菌,而其周围植株也含菌。[结论]分析认为这两种果园内柑橘植株发病原因不同,一种可能为通过携带黄龙病菌的柑橘木虱所感染,另一种可能为嫁接过程中通过带菌的接穗感染。

柑橘黄龙病菌核糖体蛋白基因的多态性及系统发育分析

通过PCR扩增6个不同地区柑橘黄龙病（citrus huanglongbing，HLB）病原茵的核糖体蛋白基因，采用4种不同的限制性内切酶对PCR产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析；并对核糖体蛋白基因克隆和测序后，使用DNAman和NCBI Blast等软件对基因序列进行比对分析，并通过软件Mega4．1构建其系统发育树．结果表明：6个分离物核糖体蛋白基因的RFLP指纹图谱有所差异，表现出一定的多态性；不同分离物核糖体蛋白基因的核酸序列和氨基酸序列均存在差异，但相互之间同源性很高，其中核酸序列与数据库中亚洲种（CandidatusLiberibacterasiaticus）的同源性高达99％～100％，与非洲种（Ca．L．africanus）的同源性为85％，与美洲种（Ca．L．americanus）的同源性为77％～80％；系统发育分析显示所有的Ca．L．asiaticus亲缘关系极近，归为一个类群，而后与Ca．L．africanus和Ca．L．americanus组成韧皮部杆菌属（CandidatusLiberibacter）一个大的类群．

柑橘木虱对柑橘不同品种的趋性

用2种方法测定了柑橘木虱Diaphorina citri Kuw.成虫对13个柑橘品种离体嫩梢的选择性。结果表明,对不同品种进行两两组合的选择性试验,柑橘木虱停靠在处理组合早金和四季斑叶橘的虫量占总虫量的23%和1%,停靠在处理组合台湾玫瑰橙和纽荷尔脐橙上的虫量分别占总虫量的33%和20%,停靠在处理组合日辉和佩奇甜橙上虫量分别占总虫量的38%和15%,两两之间差异显著。将13个品种组合在一起进行选择性试验,结果表明柑橘木虱停靠在纽荷尔、福橘和佩奇甜橙上的成虫数量为每梢3.2-6.6只.d-1,显著高于木虱在其余10个品种枝梢上的停靠数量。福橘是柑橘黄龙病高发品种的原因是其对柑橘木虱的吸引力较强。

湿度对田间自然热罩防治柑橘黄龙病的影响

比较加湿处理后热罩和自然条件下热罩对黄龙病的防治效果,结果表明自然条件处理后30d叶片平均病菌浓度下降了85%以上,而加湿条件下叶片平均病菌浓度仅下降3.7%,与自然条件处理间差异达到显著水平;自然条件热罩处理后90d叶片平均病菌浓度下降了97%以上,而加湿处理病树叶片平均病菌浓度下降了38%,与自然条件处理间的差异达到极显著水平。对照组叶片平均病菌浓度处理后30d和90d均有略微增加;加湿未热罩处理叶片平均病菌浓度在处理后30d和90d分别增加了4.5倍和8.7倍,但与对照组无显著差异。本研究结果表明加湿热罩处理病树显著减弱了其杀灭黄龙病菌效果,同时表明增加土壤湿度对黄龙病菌繁殖可能具有一定的促进作用。

6份狼尾草属菌草的ITS和叶绿体matK序列分析

对来自福建农林大学、闽清、闽侯和南平等地的6份狼尾草属菌草的ITS片段和叶绿体matK基因序列进行测定,并用Clustal X 2.0和MEGA 4.1软件对其进行比对分析,构建系统发育树.结果表明,6份菌草的ITS序列长度均为585 bp,其中变异位点0-3个,信息位点2个,遗传距离为0-0.089,平均遗传距离为0.022;mat K序列长度为880-881 bp,其中变异位点(信息位点)1个,遗传距离为0-0.016,平均遗传距离为0.010.ITS系统树结果显示6份共菌草聚成四类,其中杂交狼尾草和象草(MQ)聚类在第I类的同一分支,巨菌草和象草聚在第Ⅱ类的不同分支,表明其亲缘关系比较近;mat K序列系统树结果除了象草(MQ)外其余5份菌草均聚在了同一分支上,表明叶绿体mat K序列无法将供试的6份菌草区分开.