氨溴索雾化吸入预防手术后肺部感染的疗效分析

目的探讨开胸术后盐酸氨溴索(沐舒坦)雾化吸入预防肺部感染的临床疗效。方法将胸部及腹部术后113例患者按随机数字表分为观察组和对照组,均在半卧位、翻身拍背及常规治疗的基础上加用雾化吸入。观察组雾化吸入盐酸氨溴索,对照组采用大剂量的盐酸氨溴索静脉滴注。观察两组临床疗效及肺部感染情况,并记录用药后不良反应。结果两组病人临床疗效及预防肺部感染无显著性差异(P>0.05),不良反应少并轻微,但降低盐酸氨溴索数量。结论胸部及腹部术后盐酸氨溴索雾化吸入可促进排痰,预防肺部感染效果与大剂量静脉滴注相当,不良反应轻微而少,降低患者的经济费用,值得临床推广应用。

磷酸钠盐口服溶液用于结直肠手术前肠道准备49例

目的观察磷酸钠盐口服溶液和甘露醇清洁肠道的疗效和不良反应。方法将97例患者随机分为对照组和观察组,对照组术前口服甘露醇溶液,观察组术前口服磷酸钠盐口服溶液,比较两组肠道清洁度、服药后不良反应及患者满意度。结果两组患者在服药后清洁肠道的有效率均为100%,均成功行结直肠手术,观察组出现不良反应例数及患者满意度与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论磷酸钠盐口服溶液应用于结直肠手术肠道准备,具有导泻作用快、不良反应小的特点,值得临床推广。

中国松属(Pinus)植物花粉的利用研究

中国松属（Ｐｉｎｕｓ）中的一些植物是组成我国大面积针叶林的重要树种，其花粉资源异常丰富。当前国内已把花粉开发利用的目光转向松属中几种资源量大的树种花粉上。本文从松属花粉的结构特点；目前已开发利用的几种松属植物花粉的成分和功能；松花粉的采收和贮存技术；松花粉的加工利用技术及其工艺等方面，较全面地论述了当前我国松属植物花粉开发利用的研究状况和水平。并提出了今后在深入开发利用上应加强的试验研究工作。

云南松天然优良林分自由授粉混合种子子代测定

１９８８年在腾冲县古永林场采用完全随机区组设计开展试验。通过７年的观测，试验已显示出天然优良林分子代具有干型通直、木纹理扭转度小、生长量大的特点，其树高、胸径、材积和木纹理扭转度的实际增益分别达到３７４９％、６５６０％、２１９８４％和２６９５７％，遗传增益分别为２０１４％、４０４６％、１０７１１％和５９７９％，目前已远远超过云南松天然优良林分子代遗传增益３％的攻关考核指标。通过试验反馈表明了所制定的“云南松天然优良林分选择方法及标准（滇西）”具有科学性和可靠性。

药物的聚乙二醇修饰研究进展

目的 介绍了药物聚乙二醇技术及其在药物研究中的应用最新进展。方法 以国外大量有代表性的文献为基础 ,简要论述了聚乙二醇的生理化学特性、药物的聚乙二醇修饰的优势、修饰技术及其在药物研究中的应用和存在的问题 ,并评述其应用前景。结果 药物的聚乙二醇修饰技术改变了药物的分子结构 ,从而改进了药物动力学和药效学的性质 ,增加了注射药物的临床应用范围和疗效。结论 聚乙二醇修饰技术成功应用于蛋白质药物、有机小分子的前体药物和脂质体药物的研究 。

人基质金属蛋白酶2催化区的克隆与表达

为从随机肽库中寻找具有基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )抑制活性的新型小肽抑制剂 ,应用PCR法从含有人MMP 2基因的质粒中扩增了人MMP 2的催化区 .序列分析结果表明无氨基酸突变 .然后构建人MMP 2催化区的表达载体pET MCD ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,经IPTG诱导表达人MMP 2催化区 .经包涵体分离、变性、金属螯合层析纯化和复性等过程 ,复性后的人MMP 2催化区具有较好的明胶水解活性 .

重组人肝细胞生成素的纯化及活性研究

人肝细胞生成素 ( human hepatopoietin,h HPO)是一种新型肝再生调控因子 .在大肠杆菌中表达的的重组 h HPO( rh HPO)是以包涵体的形式存在的 ,其表达量为菌体总蛋白的 2 0 % .包涵体经各种溶液洗涤后 ,用 8mol/L尿素裂解 ,裂解上清经凝胶过滤、复性和离子交换柱层析得到电泳纯的 rh HPO,经还原型 SDS- PAGE测定其分子量为 1 5k D.纯化 rh HPO的 N端氨基酸序列与其c DNA推导序列完全一致 ;纯化产物的氨基酸组成分析结果亦与 rh HPO氨基酸组成的理论值吻合 .生物学活性研究表明 ,rh

基质金属蛋白酶2抑制剂的筛选及鉴定

以原核表达的具有明胶水解活性的人基质金属蛋白酶 2的催化区 (MCD)为靶标 ,筛选噬菌体随机环七肽库和十二肽库 .找到 6种与MCD特异结合的小肽 ,将 6种小肽基因分别与GST表达质粒重组 ,进行GST融合表达 ,制备融合蛋白 .采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析法纯化融合蛋白 ,通过酶抑制实验、体外侵袭实验检测融合蛋白的活性 .结果表明 ,GST C71能够抑制MCD水解 β酪蛋白的活性 ,并且对人纤维肉瘤细胞HT10

肿瘤坏死因子诱导B16细胞凋亡的核蛋白质组分析(英文)

为深入了解细胞凋亡的机制,研究了细胞凋亡过程中细胞核蛋白的变化.通过分离肿瘤坏死因子TNFα诱导的小鼠黑色素瘤B16细胞的细胞核并进行二维电泳分析,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.图像分析比较对照细胞和凋亡细胞的核蛋白发现,在凋亡细胞中有11个蛋白发生了明显的变化,6个蛋白下调,5个蛋白上调,对这11个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析.经数据库查询,初步鉴定出这些蛋白.其中4个含量增加的蛋白(HSP84,calreticulin,vimentin,GAPDH)均直接或间接地参与诱导细胞凋亡,另外1个含量增加的蛋白(plasminogen)尚未见其与细胞凋亡有关的报道.而6个含量降低的蛋白分别属于信号转导相关蛋白(guaninenucleotidebindingprotein,lamininreceptor1)、转录调控蛋白、mRNA转运蛋白(heterochromatinprotein1alpha,heterogeneousnuclearribonucleoproteinA3,heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2B1)和未知功能蛋白(nucleolarproteinNO38).细胞凋亡过程中这些变化的核蛋白质的发现将有助于深入认识细胞凋亡的分子机制.

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的利用纯化的重组人肝再生 增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。 结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤细胞 系;无血清培养液效价为1×10^(-2),腹水效价为1×10^(-5);亚类鉴定 表明:2株单克隆抗体为IgG1,另2株为IgG2b;免疫印迹显示:抗体结合抗原的分子量 与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤 技术,获得了抗hALR的单克隆抗体,为以后的工作奠定了基础。

重组中国汉族人源γ-干扰素的纯化和鉴定

在Ｅ．ｃｏｌｉ中高表达的中国汉族人源γ干扰素是以包涵体的形式存在的，包涵体经各种溶液洗涤后，用８ｍｏｌ／Ｌ尿素裂解，裂解上清在８ｍｏｌ／Ｌ尿素存在下，经离子交换柱层析和凝胶过滤两步纯化，得到纯度大于９５％的γ干扰素，稀释复性后，其比活为５５×１０５Ｕ／ｍｇ．激光解析电离质谱分析表明，中国汉族人源γ干扰素的分子质量为１７３２ｋｕ，其Ｎ端序列与Ｇｒａｙ等报道的γ干扰素Ｎ端序列一致．中国汉族人源γ干扰素的氨基酸组成分析结果也与其理论值相吻合．

双组分核定位信号介导Apoptin定位于肿瘤细胞核

Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的小蛋白,在肿瘤细胞中定位于细胞核,而在正常细胞中主要分布于细胞质。根据预测,Apoptin分子中有2段序列(NLS1和NLS2)可能是单组分核定位信号。通过基因突变和缺失构建了Apoptin各种不同的核定位信号突变体和磷酸化突变体,利用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作标签,观察了其在肿瘤细胞中亚细胞定位的变化。结果表明,NLS1和NLS2单独均不是有效的单组分核定位信号。Apoptin的核定位信号是由NLS1和NLS2这2段序列共同组成的双组分核定位信号,缺少任何一段序列都会严重影响Apoptin在肿瘤细胞中的核定位。其中,NLS2对于Apoptin的核定位起主要作用。Apoptin的获得型磷酸化突变体并不能转位到正常细胞的细胞核中,而其磷酸化负突变体仍定位于肿瘤细胞的细胞核。另外,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂H7也不影响Apoptin在肿瘤细胞中的核定位。很可能,Apoptin的磷酸化并不参与调控其核定位信号的功能。

抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体（mAb），以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究。方法：用重组蛋白免疫雌性BALB／c小鼠，采用常规杂交瘤技术进行细胞融合，经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆，获得稳定分泌抗人HPPCnmAb的细胞株。采用间接ELISA、Western blot、Ig亚类快速定性试纸分析法等鉴定抗体的生物学特性；通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位。通过噬菌体肽库技术分析抗体所识别的抗原表位。结果：得到了1株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株，命名为W2-D5。经Ig亚类分析确定，该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类。间接ELISA检测表明，该抗体检测HPPCn的极限为0．1μg／L；Western blot结果显示，该抗体能特异性识别HPPCn。细胞免疫荧光实验，证实了HPPCn蛋白定位在细胞核。通过肽库筛选及表位分析认为，该抗体识别的表位可能为HPPCn7-13（IHLELRN）。结论：成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb。

抗人肝再生增强因子抗体识别部位的确定

目的 :确定抗人肝再生增强因子单克隆抗体所识别的抗原表位。方法 :采用蛋白质预测软件预测人肝再生增强因子的抗原决定簇 ,根据预测结果合成肽进行竞争ELISA验证单克隆抗体所识别部位。结果 :人肝再生增强因子的第 6～ 15 ,6 8～ 80以及 10 5～ 112位氨基酸残基是其抗原表位。结论 :采用计算机软件预测 ,并在此基础上经合成肽验证的方法是一种可靠的抗原表位确定方法。

导入人HeLaS 3细胞DNA提高XP细胞的紫外线抗性

用电脉冲介导和DNA-磷酸钙共沉淀两种基因转移方法,将人HeLaS 3细胞DNA及限制性核酸内切酶切割后的DNA片段,与选择标记基因一同导入XP细胞,经两次选择后得到转化的细胞。实验证明HeLaS3 DNA及经Bgl I、Xho I切割后的DNA片段可以修复XP细胞切除修复基因的缺陷,提高它们对紫外辐射的抗性。二次转化实验进一步证明,导入的HeLaS 3 DNA已在XP细胞基因组中整合,并得到稳定的表达。

中国人肿瘤细胞中O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶活性与对嘧啶亚硝脲敏感性的关系

分析了20株中国人肿瘤细胞的O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O^6-MT)活性及对嘧啶亚硝脲ACNU的敏感性,发现两者间有较好的线性关系,O^6-MT低,对ACNU敏感,提示O^6-MT可作为使用ACNU对肿瘤化疗时的一项予见性指标。

抗肝癌细胞噬菌体单链抗体库的构建及筛选

构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选 ,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性 ,并对阳性克隆进行表达。成功构建了库容为 1 1× 10 6抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库 ,经筛选得到了与HepG2细胞具有较强结合能力的单链抗体 ,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达。序列测定结果表明 ,VH 和VL 基因符合小鼠抗体可变区特征 。

利用siRNA抑制HER-2表达的研究

目的利用siRNA抑制人乳腺癌MCF-7细胞中HER-2基因的表达。方法针对HER-2mR-NA设计了5条siRNA,并构建相应的表达质粒,将质粒转染MCF-7乳腺癌细胞,筛选稳定表达株,利用RT-PCR分析siRNA对细胞中HER-2mRNA的降解作用;利用流式细胞术分析细胞表面HER-2蛋白的表达;利用裸鼠进行体内成瘤性实验,用免疫组化法检测瘤组织中HER-2的表达。结果siRNA3P能明显降低MCF-7细胞中HER-2mRNA的丰度;流式细胞分析表明,其中siRNA2P和3P稳定转染的MCF-7细胞表面HER-2的表达明显降低;五种表达不同siRNA的MCF-7细胞在裸鼠体内的成瘤性均有所降低,并且瘤组织中HER-2蛋白的表达也明显减少。结论靶向HER-2mRNA的siRNA能在体内外有效抑制HER-2的表达,可用于乳腺癌的基因治疗。

基于B细胞表位制备抗肝细胞生成素的抗体

目的:基于B细胞表位制备抗肝细胞生成素(HPO)的抗体。方法:根据HPO的空间结构选择了2个候选B细胞表位,展示在T7噬菌体的表面,将提取的重组噬菌体免疫动物,采用ELISA法检测抗血清的效价,通过杂交瘤技术制备针对HPOC端表位的单克隆抗体。结果:2个候选B细胞表位KDGSCD和DGWKDGSC均能诱导抗相应表位多肽的多克隆抗体的产生,免疫6周后血清中抗体效价均达到1∶103,产生的抗体还能够特异识别HPO全蛋白;针对HPOC端表位KDGSCD的单克隆抗体也能识别HPO全蛋白,且具有良好的特异性。结论:基于T7噬菌体展示的B细胞表位可作为免疫原用于制备识别该B细胞表位来源的全蛋白质的抗体。

不同疏伐强度的云南松母树林结实效应

十余年来对腾冲县古永林场云南松母树林营建技术措施的试验研究表明：疏伐对林分母树树冠的生长发育具有明显的促进作用，随着疏伐强度的加大，林木树冠的增长也随之增加，而枝下高能保持相对稳定，由于结实层的增加，以及光、热、水、肥等环境条件的改善，提高了母树的结实量，从而降低了种子采集成本。在参试的几种疏伐强度中以保留郁闭度0.3处理的效果最好，其1993～1995年的每公顷年平均结实量、年平均单株结实量和结实株率分别达10 329个、60个和95.65%，超出对照25.81%、408.47％和15.37％。故对改建16年生左右的云南松天然优良林分为母树林，宜选用03（郁闭度）疏伐强度的技术措施，母树林经2次疏伐后即可定型,其疏伐间隔期不超过4年。