3株蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及毒力基因分布和致病性检测

目的 对2019年通辽地区送检病料进行病原菌分离鉴定,并检测毒力基因分布及致病性。方法 对从2019年通辽地区送检病料中分离到的3株革兰阳性杆菌(FL1、FL2、FL3)进行生化试验、药物敏感性试验、16S rDNA序列分析、毒力基因及致病性检测。结果 生化试验结果显示3株分离菌为蜡样芽胞杆菌;牛源菌株(FL1、FL2)对青霉素及羧苄西林有耐药性,马源菌株(FL3)对头孢拉定有耐药性;FL1、FL2菌株与序列号为KR063181.1(中国湖南株)的蜡样芽孢杆菌亲源性最近,FL3菌株与序列号为HM104658.1(中国山东株)的亲缘性最近,且与FL1、FL2菌株的亲缘性较远;8种蜡样芽孢杆菌毒力基因在3株分离菌中均有分布,4种类炭疽芽孢杆菌毒力基因在3株分离菌中的分布存在差异;3株分离菌均具有致病性。结论 3株分离菌均为致病性蜡样芽胞杆菌,且具有一定的耐药性,牛源与马源蜡样芽孢杆菌在毒力基因分布方面存在差异。

羊源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了调查内蒙古通辽市某羊场发病羊死亡的原因,对疑似致病菌进行分离、鉴定及部分生物学特性研究。对病死羊进行剖检,无菌条件下采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏等组织脏器进行细菌分离培养;对分离菌进行小鼠致病性试验、细菌生化检测、16S rDNA基因扩增及同源性比对分析和药物纸片扩散法敏感性试验。结果显示,分离菌株符合肺炎克雷伯菌生化特性;16S rDNA序列与GenBank中已登录的肺炎克雷伯杆菌序列同源性为99.59%;小鼠致病性试验结果表明分离株有较强的致死性;分离株携带多种毒力基因致病性较强。药敏试验结果表明分离株对诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、多西环素等药物高度敏感,对复方新诺明、卡那霉素等中度敏感,对庆大霉素、头孢哌酮、头孢氨苄等耐药。结果表明,分离株为肺炎克雷伯菌,是该羊场发病羊死亡的致病菌。

一株牛源致病性蜡样芽孢杆菌的分离鉴定与部分生物学特性分析

目的分离鉴定牛源致病性蜡样芽孢杆菌,并分析其部分生物学特性。方法利用PCR方法检测猝死西门塔尔病牛各组织脏器中常见病毒感染情况,同时做涂片镜检,分离感染的细菌,通过形态学观察、生化检测、药敏试验、16SrRNA基因序列分析、毒力基因扩增、动物致病性实验等对分离菌进行鉴定及部分生物学特性分析。结果从猝死牛肝脏中分离到1株革兰阳性蜡样芽孢杆菌,将其命名为TL-19,该菌株含有entFM、nheB、hblD、nblA、nheC、nheA、hblC和cytk等毒力基因,且对小鼠具有较强的致病性,感染鼠24h后全部死亡。结论成功分离到1株牛源蜡样芽孢杆菌TL-19。该菌含有多种毒力基因,通辽市西门塔尔牛猝死与该TL-19感染有关。

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及系统进化树分析

为犊牛腹泻病的预防提供理论依据,试验无菌采取犊牛腹泻病牛粪便,进行细菌的纯培养及动物试验筛选致病菌株,利用16S rRNA基因测序,建立病原菌系统进化树,结合致病菌O抗原检测和BD PhoenixTM 100全自动微生物鉴定及药敏系统对病原菌进行分析鉴定,最终确定该致病菌的种类并进行治疗与后期防控。结果显示,根据致病茵的O抗原单因子血清检测、 16S rRNA基因测序,构建的系统进化树以及BD PhoenixTM 100全自动微生物鉴定及药敏系统鉴定,确定该致病菌株为大肠杆菌O132型并命名为DG;药敏结果显示,该大肠杆菌对阿米卡星、亚胺培南、美洛培能、哌拉西林4种药物敏感,对庆大霉素、头孢唑肟和头孢他啶等13种药物耐药;进化树分析显示该菌与人腹泻的肠膜分离(CP024978.1)、患者粪便分离(CP024992.1)大肠杆菌的亲源性达100%。结果表明,该例犊牛腹泻是由大肠杆菌O132型导致。

1株鸵鸟铜绿假单胞菌的分离鉴定与进化树分析

目的对内蒙古自治区通辽市某养殖场幼龄鸵鸟致死的致病菌进行分离鉴定与进化树分析。方法无菌采集幼龄病死鸵鸟的内脏,进行细菌分离培养。将分离菌株进行小鼠致病性试验、生化鉴定及药物敏感性试验,并对其进行16S r RNA基因测序,选取比对结果同源性相近的20条序列进行系统进化树分析;PCR扩增ExoT、ExoU、ExoY、ExoS 4个毒力基因,分析分离菌株毒力基因携带情况。结果经细菌形态学鉴定、16S rRNA基因序列Blast比对、BD PhoenixTM100全自动微生物鉴定和药敏系统及部分毒力基因PCR检测得出,该致病菌为铜绿假单胞菌。3种毒力基因ExoT、ExoY、ExoS在该致病菌中被检测,未携带ExoU基因;该菌对环丙沙星、庆大霉素和莫西沙星等13种药物敏感,对头孢唑啉和氯霉素等7种药物耐药。系统进化树分析表明,分离菌株与铜绿假单胞菌中国湖南株(EU915713.1)和中国四川株(KY962357.1)遗传距离最近,并命名为TLTL1。结论该致病菌经鉴定为铜绿假单胞菌,为一种条件致病菌。本研究对铜绿假单胞菌的鉴定及用药提供了参考。

猪LGALS1基因的原核表达及序列分析

目的原核表达猪源LGALS1并进行序列分析。方法提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,RT-PCR法扩增LGALS1的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-LGALS1并测序,应用生物分析软件对基因序列进行同源性比对及系统进化树分析;将构建正确的质粒pMD18-T-LGALS1亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-LGALS1,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、Ni2+亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果PCR扩增获得了全长为408 bp的cDNA序列,与GenBank中登录的LGALS1编码区序列(NM001001867.1)相似性达99%,核苷酸序列同源性分析表明,克隆基因序列与猪源LGALS1同源性最高;质粒pET-30a-LGALS1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;表达的LGALS1相对分子质量约21000,经纯化后,可与LGALS1 Antibody发生反应,具有反应原性。结论成功表达了猪源LGALS1。