牛轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件,制备阳性标准品,建立标准曲线,确定重复性、敏感性和特异性,与常规PCR方法比较。结果显示,建立的RT-qPCR方法最佳引物浓度为5μmol/L,退火温度为58℃,40个循环,熔解温度为77℃±0.5℃,最小检出量8.13copies/μL。两种方法检出率分别为30.4%和19.6%,RT-qPCR具有较高敏感性。建立的RT-qPCR可为BRV感染早期诊断、分子流行病学调查及定量检测分析等提供技术保障。