非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析

目的了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况。方法采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应(PCR)结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fli C基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、stx2、eae及ehx A基因检测。结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20∶H30、O2∶H32和O2∶H45为优势血清型。stx1、stx2和stx1+stx23种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35%、64.98%和9.68%,而eae和ehx A基因的阳性率分别为3.92%和32.95%。仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26∶H11的腹泻患者分离株。结论我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehx A基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值。

我国5个地区27株人源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分子特征初步分析

目的了解我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株的分子生物学特征。方法对来源于5个地区的27株腹泻患者和健康人的非O157产志贺毒素大肠埃希菌进行血清分型、stx1和stx2基因检测及亚型分析、eae等黏附基因和其他毒力基因检测，并对菌株进行多位点序列分型（MLST）分析。结果27株非O157产志贺毒素大肠埃希菌分为16种O∶H血清型；11株携带stx1a亚型，12株携带stx1c亚型，2株携带stx2e亚型，携带stx1a＋stx2b、stx2d、stx2g亚型各1株；eae、efa1、saa、paa、toxB、astA及ehxA基因的检测率分别为18.5%、18.5%、29.6%、22.2%、11.1%、11.1%及25.9%。MLST将27株菌分为16种不同的ST型。结论我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌菌株在血清型、志贺毒素亚型及毒力基因等方面存在多样性。

截短的BabA蛋白结合区(C51)具有促进幽门螺杆菌AGS细胞黏附作用

目的获得能与Lewis b结合的截短的BabA结合域,并评价其对幽门螺杆菌黏附人胃腺癌上皮细胞系(AGS细胞)的影响。方法采用Swiss Model分析蛋白截短后的结构变化,克隆表达截短的BabA结合区蛋白,命名为C51,用Native-PAGE蛋白电泳法检测其是否为多聚体。用流式细胞术检测C51蛋白对J99和M523两株幽门螺杆菌黏附AGS细胞的影响,并用革兰染色观察C51蛋白对幽门螺杆菌聚集的影响。结果体外表达的C51蛋白以多聚体形式存在,该蛋白促进了J99和M523的聚集并使其与AGS的黏附分别增加了12%(t=8.211,P=0.001)和22%(t=4.402,P=0.012)。结论C51蛋白仍保持了与黏附相关的空间结构,并促进了幽门螺杆菌和AGS细胞的结合。

患者胃窦黏膜组织幽门螺杆菌real time-PCR检测与分离培养结果的一致性分析

目的针对胃黏膜组织标本的幽门螺杆菌(HP)感染诊断的real time-PCR检测和分离培养2种最常用方法进行结果一致性分析,为HP感染诊断方法的选择提供科学依据。方法在浙江省4个地区(萧山、温岭、苍南和湖州)各选取1所医院,采集2020年11月16日至12月7日送至杭州致远检验医学研究所进行HP分离培养和耐药性分析的全部患者胃窦部黏膜活检标本,共1312份。每份样本经研磨匀浆处理后分为2份,分别用于常规HP分离培养和real time-PCR检测(以cagH为检测靶点),2种方法平行双盲进行。检测结果的一致性及不同医院来源样本间的差异用χ^(2)检验、Fisher精确检验以及独立样本t检验等统计学方法进行分析。结果1312份样本中,分离培养法和real time-PCR法的阳性率分别为29.34%(385/1312)、28.51%(374/1312),差异无统计学意义(P=0.636)。来自4所医院的标本,2种方法的检出率差异均无统计学意义(P=0.075),二者在萧山某院、温岭某院、苍南某院、湖州某院样本以及总体样本中的Kappa值分别为0.84、0.89、0.75、0.91、0.85。real time-PCR法的灵敏度和特异度分别为89.26%、100.00%。在real time-PCR法检测阳性而培养阴性的样本中,检测Ct值为25.47~34.97,均值为30.90,90%的Ct值均≤34.46,频数最高组为29.00~30.00组。结论分离培养法和real time-PCR法在临床胃黏膜标本HP诊断中均可达到较高的检测效能,且2种方法检出结果一致性良好,可应用于HP个体化治疗,以便在做出HP感染诊断的同时提供受检者的药敏检测结果。标本中HP菌量及标本的保存运输条件可能对结果产生重要影响。