3种不同运输方式对红细胞悬液质量影响的实验研究

目的探讨飞机、火车和汽车远距离运输对红细胞悬液质量的影响。方法实验分为4组,随机从经飞机、火车、汽车运输的保存了约20d的红细胞悬液中各取10U,作为3个实验组;以未经运输的库存20d的红细胞悬液10U作为对照组。用全自动生化分析仪测定LDH、Na+、K+和Cl-的浓度,用三波长比色法测定FHb,用血气分析仪检测PO2,并测定红细胞无氧糖酵解率和红细胞渗透脆性,观察各组指标间的差异;用扫描电镜观察各组红细胞的形态。结果无氧糖酵解率,飞机、火车2运输组分别为(42.9±5.67)%和(42.2±3.1)%,明显低于汽车运输组和对照组[分别为(60.4±5.9)%和(70.1±7.8)%];FHb在飞机和火车运输组中分别为(1.37±0.21)和(1.28±0.41)mg/ml,明显高于汽车运输组和对照组[(0.37±0.05)和(0.31±0.03)mg/ml];LDH含量和Na+浓度,飞机、火车2运输组明显高于汽车运输组和对照组;飞机运输组PO2明显低于其余各组,其红细胞渗透脆性也明显增加;火车运输组K+浓度明显高于其余各组;Cl-浓度则各组均无明显变化。电镜下,飞机、火车2运输组的棘形红细胞明显增多,边缘不整齐,并有聚集现象;汽车运输组的红细胞多数保持正常形态,少数红细胞呈球形或边缘不整齐;对照组红细胞形态正常呈双凹圆盘状,细胞均匀混悬。结论血液运输方式明显影响血液质量,路况良好的汽车运输方式在一定情况下更优于飞机和火车运输方式。

治疗用脐血干细胞的制备及初步临床应用

目的制备满足临床干细胞治疗需要的脐带血干细胞制剂,观察脐血干细胞局部移植治疗肝硬化失代偿和股骨头坏死的初步临床疗效。方法建立标准化操作规程(SOP),进行脐带血的采集、分离和检测,制备脐带血干细胞制剂进行局部移植。选择进行局部移植干细胞制剂治疗的相关疾病患者共11例,其中肝硬化9例、股骨头缺血坏死2例;年龄30—65岁,平均51岁,男9例,女2例。结果制备的脐带血干细胞制剂有核细胞计数达(3.8±1.73)×109个,均达到治疗剂量,其中CD34+细胞比率为(1.93±0.54)%,CD105+细胞比率为(97.9±4.0)%。肝硬化失代偿期患者治疗后白蛋白水平逐步升高,1个月后与治疗前相比有明显升高(P<0.05)。肝硬化和股骨头缺血坏死患者经治疗后临床症状均有好转。结论脐带血干细胞移植可为临床多种疾病的有效治疗提供一种新手段。

CD26与造血干细胞归巢的相关性研究

白细胞分化抗原CD26，即二肽酶IV（dipeptidyl—peptidaseⅣ，DPPⅣ），是一种糖蛋白分子，分布于多种细胞表面或游离于胞浆中，具有高度保守的蛋白水解酶活性，其天然底物在体内执行多种重要功能。另外，CD26还是一种细胞膜受体、共刺激分子，参与机体免疫调节、细胞迁移、细胞黏附和细胞凋亡，

EPO上调人CD34^＋脐血干细胞CD26的表达

目的研究EPO对人CD34+脐血干细胞表面CD26表达的影响。方法应用流式细胞仪法检测经MACS-CD34+免疫磁珠分选并采用EPO处理后培养的人CD34+脐血干细胞,通过与酶底物反应检测人CD34+脐血造血干细胞表面CD26的表达情况。结果与对照组相比,经EPO 100 U/ml和EPO 200 U/ml 18h培养后的CD34+脐血造血干细胞群中CD26+细胞比例明显上升,其酶活性亦明显升高。结论EPO可上调CD34+脐血干细胞表面CD26的表达并增强其生物学功能。

血小板-冷沉淀悬液部分成分的检测和比较

目的 检测血小板 冷沉淀悬液中某些成分含量和凝血酶原时间 (protime ,PT)、活化部分凝血活酶时间 (acti vatedpartialthromboplastintime ,APTT)对其进行初步研究 ,并与现临床常用的血液成分作一对照比较 ,为开发新型血液成份制品作一初步实验研究。方法 检测 4种血液成分中参与机体凝血过程某些物质的含量以及PT和APTT进行对照比较。结果 血小板 冷沉淀悬液中血小板个数与冰冻血小板中的无明显差异 ,但纤维蛋白原、FⅧ和纤维结合蛋白 (Fn)的含量均明显多于冰冻血小板和新鲜冰冻血浆 (FFP)。血小板 冷沉淀悬液的PT与新鲜冰冻血浆和冷沉淀的PT差异不显著 ,和冰冻血小板的PT差异显著 ,时间明显缩短。血小板 冷沉淀悬液的APTT与冷沉淀差异不显著 ,与新鲜冰冻血浆和冰冻血小板的差异显著 ,时间明显缩短。结论 临床上提高人体凝血水平时 ,应用血小板 冷沉淀悬液因其含有血小板和凝血因子止血效果优于单纯使用FFP或冰冻血小板或冷沉淀。

重庆地区无偿献血者丙肝病毒感染及对献血者招募的影响(英文)

近年来,中国的献血者招募模式正在从有偿献血到单位组织献血,进而到完全无偿献血的模式转变。有关真正的无偿献血者中丙型肝炎感染的资料还较少报道。本研究对重庆地区2003年的首次献血者进行丙型肝炎感染及病毒分型的调查,共有13620份血清标本进行ELISA丙型肝炎抗体检测,其中抗体阳性标本再经RT-PCR扩增HCVRNA的核心区/E2区片段进行基因分型。结果发现,HCV抗体阳性率为0.49%(67/13620),其中在40-49岁年龄段的阳性率(0.86%)最高;高学历人群和大城市生活人群的阳性率相对为高。丙肝病毒的基因分型结果显示,在22份基因分型阳性标本中有基因型1b,2a,3a和3b等四种,分别占4(18%)、5(23%)、9(41)和4(18%),以基因型3(包括3a和3b)为流行。结论:重庆地区无偿献血人群中丙型肝炎抗体阳性率较低;由于本地及周边地区静注毒品人群中丙型肝炎感染以基因型3为主,提示可能在献血人群中有静注吸毒者的存在。因此,随着献血模式的转变,在献血者的招募中应注意排除吸毒者这一高危人群。

1种血小板用去白细胞输血器的临床应用评价

目的评价1种新型血小板用去白细胞输血器的临床使用效果。方法根据随机分布表随机将53个治疗剂量的单采血小板制剂输注给实验组26名及对照组27名血液病患者,实验组采用该新型滤白细胞输血器过滤血小板,对照组采用市售滤白细胞输血器过滤血小板;体外试验,测定其经该新型去白细胞输血器过滤前后的血小板计数、白细胞计数、血小板黏附率、低渗休克相对变化率;体内试验:观察2组的止血效果,同时测定输注后1、24 h患者校正血小板增加值(CCI)。结果体外评价实验发现,血小板回收率:实验组与对照组为(90.73±3.57)%vs(93.46±3.50)%(P>0.05),白细胞剩余数:实验组与对照组为(0.31±0.68)×106vs(0.90±0.92)×106个≤2.5×106个,(P<0.05)两组过滤前后血小板黏附率变化不明显,低渗休克相对变化率均<10%。体内试验发现,输注无效发生率:(实验组为37%,对照组为29.2%)。结论该新型血小板用去白细胞输血器符合国家行业标准,过滤过程中对血小板功能无明显影响,临床使用安全有效。

体外构建人巨核祖细胞/胃癌细胞融合体生成血小板的研究

目的构建脐血巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体产生功能性血小板。方法免疫磁珠分选人脐带血CD34+细胞,通过RPMI1640培养基体外静态培养,加入定向分化因子TPO、FL、IL-3、IL-6产生巨核祖细胞;复苏胃癌SGC7901细胞;采用聚乙二醇(PEG)化学融合法制备巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体,HAT筛选系统分选融合细胞,继续培养;流式细胞仪检测培养孔上层液中类血小板颗粒表面CD41、CD62p表达,血小板聚集试验、粘附试验检测血小板功能,瑞氏染色观察颗粒形态。结果免疫磁珠分选的CD34+细胞培养7 d可增殖80倍,与胃癌SGC7901细胞株经PEG化学融合法融合成巨核祖细胞/胃癌细胞,融合率为(36.91±1.08)%;融合细胞培养10 d可增殖4倍,产生(6.1±1.21)×106/ml的类血小板颗粒;瑞氏染色后观察,其形态与正常血小板相似。类血小板颗粒表达血小板特异性标志CD41及血小板活化后标志CD62p,与正常血小板比较,CD62p在类血小板颗粒中表达略降低:正常血小板(74.11±1.71)%、类血小板颗粒(71.04±1.64)%;CD41表达明显降低:正常血小板(88.83±3.26)%、类血小板颗粒(72.51±2.79)%(t=6.59,P<0.05);聚集试验表明具有正常血小板相似的聚集功能;血小板粘附试验:正常血小板(40.43±1.63%)、类血小板颗粒(35.53±4.06%)。结论通过PEG细胞化学融合法构建的脐带血巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体能产生功能性血小板。

人／猪造血嵌合体构建及特异性免疫耐受形成的初步研究

目的初步探析人/猪造血嵌合体的构建及所诱导形成特异性免疫耐受的条件,为实现嵌合体人源性造血提供实验支持。方法实验分为3组,新生猪5只/组,实验1组:将人脐血来源CD34+细胞移植入正常新生小型猪体内后,持续注射人源SCF、EPO;实验2组:新生猪移植细胞后不注射人源因子;实验3组(正常对照组):新生猪注射生理盐水。移植后10、20、30、40、50、60d时取嵌合体猪外周血,检测人源CD71+细胞比例,同时检测猪外周血抗人种属抗体。结果2组嵌合体猪外周血中均有一定比例的人源CD71+细胞,但实验1组外周血比例显著高于同期实验2组(P<0.01);正常小型猪外周血于16d出现抗人种属抗体,嵌合体猪外周血于移植后50d出现,且抗体效价低于同龄正常猪。结论利用新生乳猪可建立人/猪造血嵌合体,可诱导形成供者型免疫耐受;在人源造血因子作用下,可实现人造血干细胞在嵌合体内分化。

猪造血微环境体外模型对人HSC分化作用的实验研究

目的研究猪造血微环境对人造血干细胞(HSC)向红系分化的影响。方法分别抽取健康志愿者骨髓6ml、实验用猪骨髓10ml,分离骨髓间充质干细胞(MSCs),接种DMEM/F12培养基,形成单层贴壁的成纤维样细胞后,作为人、猪造血微环境体外模型。按5×104/ml分别将人脐血CD34+细胞接种于人、猪造血微环境体外模型,以不含MSCs的培养系统为阴性对照,按3U/ml分别加入重组人EPO(rhEPO)。于接种10d后,取悬浮细胞,用流式细胞仪检测人CD71,以CD71阳性细胞率作为CD34+细胞向红系分化的分化率。结果人MSCs支持下的人CD34+细胞在扩增的同时,(86.15±0.69)%细胞向红系分化;猪MSCs支持下的(82.46±1.46)%人CD34+细胞向红系分化,阴性对照(44.62±1.20)%人CD34+细胞向红系分化(P<0·01)。结论与阴性对照相比,人/猪造血微环境体外模型均能显著促进人CD34+细胞向红系分化。

人外周血富集白细胞层来源的树突状细胞的培养与鉴定

目的探讨从人外周血富集白细胞层(白膜)分离、培养树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。方法用PBS液与白膜1∶1稀释,采用Ficoll淋巴细胞分离液对稀释后的白膜进行淋巴细胞分离,2h后弃悬浮细胞,加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)和DMEM完全培养液培养,体外培养第6天,加入肿瘤坏死因子(TNF-α),促进其分化成熟。用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测细胞表型。在倒置显微镜下观察细胞形态。结果显微镜下观察,细胞呈不规则形状,膜表面向外伸出许多树枝样细长突起;成熟DC细胞表面CD83、CD86、CD1a、HLA-DR分子表达明显增高;平均每份白膜(200mL全血)可以获得(3.87±0.31)×107个成熟DC。结论作者建立了一种从白膜中分离、培养树突状细胞的方法,可获得数量较多、纯度较高的DC,为DC瘤苗的来源开创了一条新途径,并为血液的合理利用找到了一个新方式。

同种异体富血小板胶治疗慢性难愈合溃疡的有效性研究

目的观察同种异体富血小板胶治疗慢性难愈合溃疡的临床有效性。方法 6名慢性难愈性皮肤溃疡的患者行同种异体富血小板胶(APG)治疗,采集与患者同血型健康献血者的血液,制备富含血小板血浆(PRP),将PRP与凝血酶粉-钙剂按(10∶1)混合制备成APG。采用常规清创处理后将同型APG敷于溃疡处,3-4 d换药1次。结果 APG处理伤口后无明显炎症反应,经过平均34 d,5-8次治疗,患者难愈合溃疡创面面积缩小(98.1±1)%,治疗前创面平均面积为(43.10±60.07)cm2,治疗后平均面积为(0.17±0.07)cm2,均基本愈合。结论同种异体富血小板胶治疗难愈性溃疡愈合效果显著,无不良反应,值得推广应用。

建立三氧自体输血操作规程的初步探讨

三氧自体输血是将100~200 mL患者自体血在体外与适量三氧-医用氧气混合体振摇混匀后,在一定时间内再回输入患者体内的治疗方法。通过三氧的强氧化性对血液做氧化处理,可增强机体的非特异性免疫反应,达到调理人体内环境,促进机体健康。该疗法在临床应用越来越多,对治疗过程中的操作流程以及三氧浓度、治疗频次和治疗疗程等尚无统一标准,为了规范操作过程,保障血液治疗安全和疗效,本文探讨了三氧自体输血操作规程。

CD26多克隆抗体的制备与鉴定

目的针对CD26酶催化结构域制备多克隆抗体。方法应用RT-PCR技术以人白细胞mRNA为模板,扩增获取编码CD26催化结构域的基因序列,克隆入原核表达载体PET32a后,转化BL21感受态细菌,经IPTG诱导表达得到his-CD26融合蛋白;亲和层析柱纯化并经Western-blot鉴定后,用此重组蛋白免疫2只新西兰纯种大白兔,获取免疫血清共180 ml,经蛋白A柱纯化及抗原抗体亲和纯化后,采用间接ELISA法检测抗体效价,Western-blot及免疫细胞化学染色进行抗体效价及特异性鉴定。结果构建出PET32a/CD26原核表达质粒,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达,经his亲合层析纯化后蛋白量达2.3 mg/ml;制备的多抗血清纯化后效价达256 000,经Western-blot证明能特异性的识别CD26重组蛋白,免疫细胞化学染色显示能特异的结合于H9细胞。结论成功制备了能特异性识别CD26的多克隆抗体。

探讨血浆置换在产后合并血栓性血小板减少性紫癜中的应用

目的探讨血浆置换(PE)在产后合并血栓性血小板减少性紫癜(TTP)中的应用时机及方法。方法回顾分析我院利用血浆置换成功救治1例产后合并TTP患者的临床资料,查阅相关文献,总结分析血浆置换在产后合并TTP中的有效治疗时机及方法。结果患者剖宫产术后经早期确诊产后合并TTP,立即给予血浆置换并辅助其他抢救治疗,于术后第7天复查血小板(PLT)升至110×109/L,痊愈出院,随访无复发。结论产后合并TTP,病情危重,死亡率高,易误诊或漏诊,应早期诊断并行血浆置换,降低死亡率,提高生存质量。

检验医学五年制本科学生临床输血学教学体会

随着高等教育改革的深化,高校培养了越来越多的检验医学高等人才进入临床工作。目前在各级医院输血科工作的人员绝大部分是检验专业毕业生。检验五年制本科教学在完善检验医学教学的基础上又强化临床医学教学,培养了具有较全面和扎实的临床医学和检验医学理论知识的高级检验医生。输血是临床各科,尤其是外科治疗的重要措施之一。

血小板裂解液的制备及生物学效应观察

目的制备高含量细胞因子的血小板裂解液（PL）。方法采用反复冻融法[-80℃~37℃冻融3次（冻24 h/次）]和超声法（285 W,每次超声处理5 s停止5 s,共10次）处理10份单采血小板制剂（30 m L/份）,ELISA法对细胞因子,血小板衍生长因子（PDGF）-AA、PDGF-AB、PDGF-BB,转化生长因子-β1（TGF-β1）,血管内皮生长因子165（VEGF165）检测,同时将2种方法制备的PL按10%比例加入常规培养基DMEM/F12培养第5代人脐血间充质干细胞,观察传至第7代细胞增殖情况,并与FBS液培养（组）比较。结果血小板保存3 d后制备成的PL各因子含量均升高,0 d浆与3 d浆相比,PDGF-AA（ng/m L）为0.071±0.024 vs 2.494±0.326,PDGF-AB（pg/m L）为36.079±15.54 vs 5 866.572±859.31,PDGF-BB（pg/m L）为33.258±21.23 vs 641.69±80.58;VEGF165（pg/m L）为26.661±5.42 vs 122.652±10.59;TGF-β1（pg/m L）为55.556±6.16 vs 3 930.022±827.68（P〈0.05或〈0.01）。超声法可释放更高含量的细胞因子,3 d反复冻融组与3 d超声组比较,PDGF-AA（ng/m L）为0.095±0.025 vs 1.28±0.236,PDGF-AB（pg/m L）为12 424.746±3 738.03 vs 19 610.987±10 430.26;PDGF-BB（pg/m L）为5 429.184±1 824.53 vs8 397.039±611.93;VEGF165（pg/m L）为128.379±46.69 vs 374.552±32.48;TGF-β1（pg/m L）为8 820.789±1 755.45 vs 14 686.780±7 164.89（P〈0.05或〈0.01）。结论反复冻融法和超声法均能有效释放血小板内的细胞因子;超声法处理血小板能释放更高含量的细胞因子,可替代FBS用于细胞培养。

不同方式放置白膜制备浓缩血小板质量指标比较

目的探讨全血分离白膜静置2h后,血小板恒温保存箱振荡过夜保存白膜袋及静置室温过夜保存白膜袋,对制备浓缩血小板回收率及血小板质量指标的影响。方法对124份400mL新鲜全血进行容量检测和血常规计数,随机选取其中53份当日分离白膜静置2h后置血小板恒温保存箱振荡过夜保存为实验组,剩余71份当日分离白膜后静置室温过夜保存为对照组,两组白膜于次日制备浓缩血小板。然后对两组浓缩血小板进行p H、葡萄糖、血小板聚集率及血小板低渗休克反应相对变化率(HSR)的测定。结果白膜振荡过夜保存和静止过夜保存后制备的浓缩血小板计数分别为(7.23±2.21)×10^(10)和(7.17±2.08)×10^(10),实验组高于对照组,差异无统计学意义。但是血小板回收率则是实验组为68.69%±19.21%,高于对照组血小板回收率62.07%±11.37%,差异有统计学意义。实验组和对照组制备的浓缩血小板pH值分别为7.23±0.08和7.12±0.14,GLU(mmol/L)分别为20.57±1.26和19.32±1.41,血小板聚集率分别为92.65%±3.02%和88.82%±3.43%,差异均无统计学意义。实验组浓缩血小板HSR为81.50%±8.57%,明显高于对照组浓缩血小板74.30%±11.55%,差异有统计学意义。结论两种方式放置白膜袋所制备的浓缩血小板,检测指标均符合国家质量标准,但血小板回收率和体外功能检测指标HSR显示白膜静置后振荡过夜方式制备的浓缩血小板可能更具有优势。

间接ELISA测定人血IgM型抗-A抗体方法的建立及应用

目的建立间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,快速定量检测人血IgM抗-A抗体。方法通过制备A型红细胞膜蛋白作为捕获抗原,采用棋盘滴定实验筛选出最佳抗原抗体工作浓度,建立人血IgM型抗-A抗体定量检测方法。结果所构建的间接ELISA定量检测方法检测下限为0.02μg/mL;批内变异系数及批间变异系数均小于10%;通过ROC曲线分析,当临界D(450)为0.259时,ROC曲线下面积最大,为0.947,检测灵敏度为87.7%,特异性为100%。采用本研究自建的ELISA检测57例B型血浆标本的IgM型抗-A抗体浓度为(1.71±1.95)μg/mL,定量结果与经典半定量效价评分呈正相关(r=0.71,P<0.01)。结论成功建立了人血IgM型抗-A抗体定量检测方法。