应用RNA干扰抑制乙肝病毒X基因促HepG2细胞凋亡的作用

目的:构建靶向乙肝病毒X基因(HBX)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并应用其体外抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。方法:设计并构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,脂质体转染法将HBX表达载体pcDNA3.1-HBX与pSilencer3.1-shHBX共转染人肝癌HepG2细胞,培养72小时后,分别以RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测HBX的表达量。Annexin V-FITC/PI双染经流式细胞仪检测细胞的凋亡变化。结果:重组质粒pSilencer3.1-shHBX酶切鉴定和测序结果均与设计的一致。该质粒使HBX基因mRNA表达量降低了47.1%,进而使HBx蛋白表达量降低了58.9%,HBx蛋白荧光强度减弱,并使HBX诱导的HepG2细胞凋亡率降低了52.11%。而阴性对照质粒无此作用。结论:成功构建靶向HBXshRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并可应用其抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。

乙型肝炎病毒X基因对正常肝细胞HL7702凋亡影响的初步探讨

目的研究乙型肝炎病毒X基因(HBX基因)对HL7702肝细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响。方法用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-X瞬时转入HL7702细胞,以转染空质粒pcDNA3.1(+)的细胞及未转染的HL7702细胞为对照。转染后72 h收集细胞标本,作以下处理:RT-PCR法检测HBXmRNA的表达,免疫荧光鉴定HBx蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;以β-actin为内参,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA的表达量变化。结果转染72 h后,转染pcDNA3.1(+)-X真核表达载体的HL7702细胞经RT-PCR扩增出HBX片段,免疫荧光结果显示细胞内出现HBx蛋白的较强荧光;而转染空质粒组及未转染对照组经RT-PCR法及免疫荧光检测均显示无HBx表达。通过流式细胞术和半定量RT-PCR法检测细胞凋亡情况,结果显示:转染HBX的细胞凋亡率(3.38%±0.67%)相对于转染空质粒组(1.25%±0.30%)及未转染质粒组(1.40%±0.37%)凋亡率增高,差异均有显著性意义(P<0.05);转染HBx的细胞Bax mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高,差异均有显著性意义(P<0.05),Bcl-2 mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显降低,差异均有显著性意义(P<0.05)。转染空质粒组和未转染质粒组之间,对细胞凋亡率、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA进行比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功将HBX转染入HL7702细胞,并在细胞中表达;转染后72 h HBx可上调Bax表达,而下调Bcl-2表达,表明HBx能促进HL7702细胞凋亡。

乙肝病毒X基因对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的探讨乙肝病毒X基因(hepatitis B virus,HBX)对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将HBX真核表达载体pcDNA3.1-X转入人肝癌细胞HepG2中,建立表达HBX的HepG2/HBX细胞模型;以转染空载体pcDNA3.1的HepG2/pcDNA3.1细胞为对照,于转染后24、48、72、96 h收集细胞标本,行流式细胞术分析肝细胞凋亡率变化情况,RT-PCR、Western blot分别检测肝癌细胞内HBX和凋亡相关基因Fas、FasL表达以及JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平情况。结果转染24 h后HepG2/HBX细胞中即检测出HBX表达,且其表达量随时间延长而逐渐增高(P<0.05);对照组细胞中各时间点均无HBX的表达。转染后各时间点,HepG2/HBX细胞与对照组细胞相比,细胞凋亡率均升高(P<0.05),Fas、FasL表达量和JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平亦均增高(P<0.05);且HBXmRNA表达量与细胞凋亡率、Fas和FasL表达量以及JNK、c-Jun的磷酸化水平均呈正相关(P<0.05)。结论HBx可通过上调JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平而促进FasL蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡。

流体动力学法表达乙肝病毒X蛋白小鼠模型的建立

目的建立表达乙肝病毒X蛋白的小鼠模型。方法实验动物分成模型组和对照组,模型组利用已构建的含有HBX基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-HBX,对照组以等量生理盐水代替,采用流体动力学法将质粒经尾静脉高压注入小鼠体内,24h后取小鼠肝组织,行免疫荧光、RT-PCR和Western blot法从不同水平检测HBX在小鼠肝组织内的表达情况。结果模型组小鼠RT-PCR显示肝组织内有HBX mRNA的存在,免疫荧光和Western blot检测均有HBX蛋白的表达;对照组小鼠则无HBX表达。结论成功建立了表达乙肝病毒X蛋白小鼠模型,为进一步探讨HBX蛋白在动物体内的生物学作用提供实验基础。

553例经结肠镜检出肿瘤性息肉的患者年龄与性别分布特征分析

目的 分析结肠肿瘤性息肉发病的年龄和性别分布特征,为设定结直肠癌筛查人群提供依据。方法 回顾性分析2019年8月至2020年10月本院内镜中心完成结肠镜检查的553例患者的临床资料,按年龄分为≤39岁组(n=137),40~59岁组(n=277),≥60岁组(n=139)。并按性别分层,比较3组管状腺瘤、绒毛管状腺瘤和锯齿状息肉的检出率。结果 553例检查人群中,共检出管状腺瘤153例(27.7%),其中男95例(34.8%),女58例(20.7%);绒毛管状腺瘤33例(6.0%),其中男18例(6.6%),女15例(5.4%);锯齿状息肉30例(5.4%),其中男16例(5.9%),女14例(5.0%)。各年龄组中管状腺瘤检出率分别为15.3%、29.2%、36.7%,绒毛管状腺瘤检出率分别为1.5%、4.7%、12.9%,锯齿状息肉检出率分别为2.9%、6.5%、5.8%。男性检出率高于女性(47.3%vs. 31.1%)。40~59岁组不同性别检出率比较差异有统计学意义(P<0.05),≤39岁组和≥60岁组不同性别检出率比较差异无统计学意义。结论 结肠肿瘤性息肉发病率随年龄增长而升高,男性发病率高于女性,且在40~59岁年龄组性别差异明显。

论小学教育就是培养学生良好的习惯

习惯是素质的重要内容,习惯的养成教育越来越成为教育的主题。在全社会教育的大背景下,教师应从简单的教授知识逐渐地向培养学生的良好的习惯转变,从细微处入手,努力把学生培养成能为祖国做出贡献的高素质的人才。

非小细胞肺癌中TRIM29、caspase-8、β-catenin蛋白表达情况及临床意义研究

目的探讨TRIM29、caspase-8和β-catenin在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法分别通过免疫组织化学法检测254例NSCLC患者肺癌组织(NSCLC组)及其癌旁正常肺组织(对照组)中TRIM29、caspase-8和β-catenin表达情况,并分析其与患者临床特征的关系。结果 NSCLC组中TRIM29的阳性表达率和β-catenin的异常表达率均明显高于对照组,caspase-8的阳性表达率明显低于对照组(P﹤0.01);肺鳞癌组织中TRIM29阳性表达率高于肺腺癌组织,β-catenin的异常表达率低于肺腺癌组织,而caspase-8在两种组织中的表达无明显差异;TRIM29、caspase-8阳性表达患者的平均生存时间明显低于阴性表达者,β-catenin高表达患者的平均生存时间明显低于低表达患者(P﹤0.01);Cox多因素分析显示,淋巴结转移、肿瘤分期、TRIM29、caspase-8和β-catenin表达水平是影响患者生存的独立预后因素。结论 TRIM29、caspase-8、β-catenin在NSCLC中均有异常表达,同时与NSCLC患者淋巴结转移、病理分类、临床分期及患者生存期有密切关系,可以作为临床中判断NSCLC患者病理分类、分期及预后的参考依据。

春风化雨 滋润心灵——班级精神文化建设探索

班级精神文化是一位隐性的"教育工作者",是在一个班级核心价值体系的基础上形成的具有延续性的共同的认知系统和习惯性的行为方式,是一个班级的灵魂。每个班级都像一个花园,若想芳香四溢,必须百花争妍,而独特的班级精神文化正是滋润这朵朵蓓蕾的春风雨露。良好的班级精神文化会在润物无声中对学生形成潜移默化的熏陶,日积月累,进而达到对其心灵和行为的教育和感化。下面我结合自己数十年的班主任工作经验谈谈进行班级精神文化建设的一些做法与体会。

浅谈学具的运用与素质教育的发展

素质教育对一个人来说，是德、智、体、美、劳等方面生动活泼、积极主动的发展，形成健全的人格、鲜明创造个性的教育。它不同于应试教育，是要创造：学生好学，喜学，乐学，教师喜教，乐教这样一种境界。

书法艺术对汉语言文化传承的影响评价

我国汉语言文化源远流长,其丰富的文化内涵和表现形式非常多元化,在现在汉语言文化传承过程中,许多书法艺术已经逐步渗透到了汉语言文化传承中来,产生了直接的影响,并且演变过程中发掘了深层次的文化内涵,形成了独树一帜的传统书法艺术。在书法形式发展过程中,现代汉语言文化的艺术性和审美性,打破了传统书法艺术的界限,引发社会关注,对汉语言文化的视觉传达和文化传承产生了深远的影响,为汉语言文化发展也提供了参考价值。

数学课堂有效提问的策略与方法

教师在课堂中的提问不仅是一种互动的形式,同时也是一门沟通的艺术。在初中数学课堂教学中,有效提问不仅可以活跃课堂气氛,而且能给学生更多主动思考的机会,培养学生思考问题和解决问题的能力,全面提高学生数学核心素养。

华支睾吸虫成虫抗原致敏树突状细胞诱导免疫应答的研究

目的研究华支睾吸虫成虫虫体抗原(CA)致敏树突状细胞(DCs)诱导免疫应答的类型。方法利用rm-GMCSF诱导分化BALB/c小鼠骨髓细胞获得DCs,倒置显微镜和透射电镜观察DCs形态;CA致敏DCs,检测IL-12p70水平;将致敏后的DCs和淋巴细胞共培养,用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖,用ELISA试剂盒检测IFN-γ和IL-4水平。结果倒置显微镜和透射电镜下见典型的DCs,CA致敏的DCs分泌高水平IL-12p70;共培养后,淋巴细胞明显增殖,分泌的IFN-γ水平显著升高,IL-4水平与其他各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CA刺激后DCs被活化,诱导的免疫应答向Th1方向极化,该应答与华支睾吸虫感染早期的保护性免疫密切相关。

小发夹RNA体外抑制乙型肝炎病毒X蛋白表达的实验研究

目的构建靶向乙型肝炎病毒X基因(HBX)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,观察其体外抑制HBX在HepG2细胞中表达的作用,为应用RNA干扰技术进一步研究HBX基因的功能奠定基础。方法设计并构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,脂质体转染法将HBX表达载体pcDNA3.1-HBX与pSilencer3.1-shHBX共转染人肝癌HepG2细胞,培养72 h后以RT-PCR检测HBX基因表达情况,以Western blot检测HBX蛋白的表达量。结果经酶切和测序鉴定,构建的重组质粒pSilencer3.1-shHBX与设计一致。该质粒使HBX基因mRNA表达量降低47.1%,使HBx蛋白表达量降低58.9%,而阴性对照质粒无此作用。结论成功构建靶向HBX shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,该质粒可体外抑制HBX在HepG2细胞中的表达。

靶向HBX基因小干扰RNA抑制乙型肝炎病毒复制的实验研究

目的探讨HBX特异性RNA小干扰抑制乙型肝炎病毒复制的作用。方法用脂质体转染法将干扰质粒pSilencer3.1-shHBX和通用阴性对照质粒分别转染HepG2.2.15细胞,并设立未转染的空白对照组。分别于转染后24、487、2 h收集细胞培养上清液和细胞总蛋白,Western blot检测HBx蛋白表达情况,ELISA检测3组细胞上清中HBsAg和HBeAg表达情况。结果 Western blot检测显示,干扰质粒转染组HBx蛋白表达量逐渐降低,各时间点的表达量与空白对照组和通用阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);ELISA检测显示,各时间点干扰质粒转染组细胞培养液上清中HBsAg和HBeAg的表达均下调,表达量与空白对照组和通用阴性对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 HBX特异性小干扰RNA可抑制HBV复制,为siRNA作为抗乙肝病毒感染制剂提供了实验依据。

1995～2009年滨州市64例艾滋病病毒感染者资料分析

[目的]了解滨州市艾滋病流行特征,探讨防治对策。[方法]对1995～2009年滨州市检出的艾滋病病毒（HIV）感染者资料进行分析。[结果]1995～2009年滨州市累计报告HIV感染者64例,其中艾滋病病人9例,死亡10例。64例中,男性39例,女性25例;15～39岁52例,农民35例;分布在全市7个县（区）;1995～2004年10例,2005～2009年54例;感染途径为性接触的44例（异性性接触35例、同性性接触9例）,吸毒感染8例,有偿献血感染7例,母婴传播1例,传播途径不详4例。[结论]滨州市艾滋病处于低流行期,性传播为最主要的感染途径。